血清中亞甲基四氫葉酸還原酶活性與白癜風臨床特征相關性研究

陳佳希 易秀莉 李春英 高天文

?

·論著·

血清中亞甲基四氫葉酸還原酶活性與白癜風臨床特征相關性研究

陳佳希 易秀莉 李春英 高天文

目的： 明確白癜風患者血清中亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)活性與白癜風臨床特征間的關系。方法： 選擇性別年齡相匹配的白癜風患者及健康對照各90例，采用ELISA法檢測血清中MTHFR活性。結果： 白癜風患者血清中MTHFR活性為(332.77±92.85)U/L,顯著低于對照組的(403.66±96.56)U/L，(P<0.0001)。靜止期、進展期及快速進展期患者血清中MTHFR活性呈逐級降低趨勢。MTHFR活性在患者性別、家族史、病程等方面無顯著差異。結論： 白癜風患者血清中MTHFR活性降低可能與白癜風疾病發展相關。

白癜風； 亞甲基四氫葉酸還原酶； 活性

白癜風是一種常見的獲得性色素脫失性疾病，臨床表現為皮膚黏膜白斑，病理表現為表皮、黏膜或其他組織內黑素細胞的減少或消失[1]。亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)是催化葉酸代謝及甲硫氨酸代謝通路的關鍵分子，是分子量為70～77 KD的黃素蛋白，具有結合FAD、NAD(P)H、CH2-H2的N端催化結構域及Ado Met的C端調節區。大量文獻提示MTHFR及其代謝通路異常與白癜風發病密切相關。并且我們前期研究發現[2]，MTHFR是白癜風的易感基因之一，其rs1801133是白癜風的易感位點，該位點TT基因型與CT及CC型相比具有明顯降低白癜風易感性的作用。然而MTHFR活性與白癜風臨床特征之間的關系并不明確。因此從白癜風易感基因MTHFR出發，分析其活性與白癜風臨床特征之間的相關性，有可能豐富該疾病發病的機制，并進一步為白癜風的治療提供新的思路。

1 研究對象及方法

1.1 研究對象 已經臨床確診的白癜風患者為研究對象，選擇性別年齡匹配的正常人為對照。所有病例樣本來自第四軍醫大學西京醫院皮膚科，正常對照來自西京醫院同期的隊列研究基地。對患者病情登記內容主要包括一般情況、個人疾病史、家族史、生活習慣、主要環境危險因素暴露史、臨床資料包括臨床分型、分類等，參照全國中西醫皮膚性病學會色素病學組制定的白癜風臨床分型及療效標準(2003年修訂稿)。疾病分期依據國外文獻報道[3]及本科臨床經驗，在本文中將白癜風患者分為快速進展期、進展期、穩定期三類。其中，3個月內新發白斑或白斑面積擴大大于10%的患者定義為快速進展期，6個月內新發白斑或白斑面積擴大小于10%的患者定義為進展期；6個月內白斑無明顯變化定義為穩定期。

1.2 實驗方法 留取白癜風患者及正常對照全血，在4℃條件下，于2000 g離心15 min收集血清。通過酶聯免疫法(ELISA)檢測MTHFR在白癜風患者及正常對照血清中的活性。

1.3 統計學方法 采用SAS軟件進行統計分析。描述性統計分析，定性指標以百分率或構成比描述；定量指標以均數±標準差表示。兩組對比分析，定性資料采用卡方檢驗，fisher精確概率法，Wilcoxon秩和檢驗。定量資料符合正態分布用單因素方差分析方法(組間進行方差齊性檢驗，以0.05作為檢驗水準，方差不齊時選用Satterthwaite方法進行校正的t檢驗)，不符合正態分布的用Wilcoxon秩和檢驗。假設檢驗統一使用雙側檢驗，給出檢驗統計量及其對應的P值，以P<0.05作為有顯著統計學意義。

2 結果

2.1 患者臨床特征概況 對白癜風患者臨床特征按照性別、病程、家族史、疾病活動性、皮損面積、疾病分型這五個方面進行分類。本研究包含90例白癜風患者及性別年齡相匹配的90名健康對照。在病例組中包含52.2%的男及47.8%的女。患者病程為(60.15±84.64)個月。有白癜風家族史患者占病例組人數的17.8%。病例組包含14.4%的穩定期患者，70.0%進展期患者及15.6%快速進展期患者。有56.7%的患者白斑面積<1%，23.3%的患者白斑面積1%～5%，13.3%的患者白斑面積5%～50%，6.7%的患者白斑面積>50%。30%的患者為局限型，3.3%的患者為肢端型，64.5%的患者為散發型，2.2%的患者為泛發型。具體分類結果見表1。

2.2 血清中MTHFR活性與白癜風臨床特征相關性分析 使用ELISA法檢測白癜風患者及正常對照血清中MTHFR活性后聯合患者臨床特征進行分析。結果顯示，白癜風患者血清中MTHFR活性明顯低于正常對照組。(332.77±92.85 vs. 403.66±96.56 U/L;P<0.0001)(圖1)。

MTHFR活性與白癜風活動性分析結果顯示，白癜風患者血清中MTHFR活性隨著疾病活動性增強表達降低，其活性分別為穩定期(375.65±61.14)U/L，進展期(330.98±96.09)U/L，快速進展期(301.02±92.70)U/L。穩定期患者MTHFR酶活性與對照組相比無顯著差異(P=0.3128)，進展期及快速進展期患者MTHFR酶活性與對照組相比具有差異顯著(P<0.0001,P=0.0003)(圖2)。

表1 臨床樣本概況 例(%)

MTHFR活性與白癜風皮損面積相關性分析結果顯示，皮損面積處于<1%、1%～5%、5%～50%、>50%范圍的患者MTHFR活性分別為(343.73±91.73)U/L，(292.16±81.87)U/L，(356.63±112.24)U/L，(334.05±72.59)U/L。皮損面積在5%范圍內，隨著皮損面積的增加，MTHFR活性降低，當皮損面積>5%，隨著皮損面積的增加，MTHFR活性升高。皮損面積<1%、1%～5%的患者血清中MTHFR活性與對照組相比具有顯著差異(P=0.0004，P<0.0001)，皮損面積5%～50%、>50%的患者血清中MTHFR活性與對照組相比無顯著差異(P=0.123,P=0.087)(圖3)。

圖1 白癜風患者組及對照組MTHFR活性差異(***P<0.001) 圖2 MTHFR活性與白癜風活動性分析(***P<0.001)

圖3 MTHFR活性與白癜風皮損面積相關性分析(***P<0.001)

MTHFR活性與白癜風臨床分型相關性分析顯示，局限型、肢端型、散發型、泛發型患者血清中MTHFR活性分別為(334.23±94.61)U/L，(377.74±89.79)U/L，(326.58±92.58)U/L，(308.58±121.86)U/L。局限型及散發型患者MTHFR活性顯著低于對照組(P=0.003，P<0.0001)，肢端型及泛發型患者MTHFR活性與對照組相比無顯著差異(P=0.4665，P=0.1732)(圖4)。

圖4 MTHFR活性與白癜風臨床分型相關性分析 (**P<0.01,***P<0.001)

進一步分析結果顯示，不同性別的白癜風患者的MTHFR活性無顯著差異(P=0.7147)。不同家族史的白癜風患者MTHFR活性無顯著差異(P=0.9022)。不同病程的患者MTHFR活性無顯著差異(P=0.572，r=0.060)。

3 討論

MTHFR活性與白癜風臨床特征相關性分析結果表明，MTHFR在白癜風患者血清中呈低活性，與性別、家族史、病程無關，與疾病進展程度、皮損面積及臨床分型相關。其中，靜止期、進展期及快速進展期患者血清中MTHFR活性呈逐級降低趨勢。進展期及快速進展期患者，皮損面積<5%的患者，局限型及散發型患者血清中MTHFR活性顯著低于正常對照組，以上分析結果提示MTHFR在白癜風疾病的發生發展中起到重要作用。

MTHFR可參與葉酸代謝及甲硫氨酸代謝循環，是兩條代謝通路中的關鍵調控單元。一方面MTHFR可催化5,10-亞甲基四氫葉酸(5,10-MTHF)轉變為5-甲基四氫葉酸(5-MTHF)，促進機體內葉酸發揮功能；另一方面MTHFR的催化產物5-MTHF在甲硫氨酸合成酶及其輔酶維生素B12的催化下提供一個甲基給同型半胱氨酸(Hcy)使之轉化成為甲硫氨酸，從而維持體內甲硫氨酸水平并減少Hcy的堆積。研究表明葉酸作為MTHFR代謝通路的底物在白癜風的治療中可起到較好的療效。方春紅等研究了表皮移植聯合葉酸及腺苷鈷胺治療白癜風的療效，結果顯示，葉酸及腺苷鈷胺用于表皮移植術，可使皮損部位復色時間提前并克服了色素生長欠均勻的缺陷[4]。此外，Montes等[5]研究發現，給予白癜風患者葉酸及維生素B12治療，有一定的輔助治療效果。而與之相對應MTHFR代謝通路中間產物的堆積則與白癜風發病密切相關。Shaker等研究發現與正常對照相比白癜風患者血清中及白斑皮損部位同型半胱氨酸(Hcy)水平顯著增高[6-9]，表明白癜風患者中MTHFR可能存在障礙從而導致底物利用不足以及中間產物堆積最終造成疾病的發生。因此，合理升高MTHFR活性，可在一定程度上抑制白癜風疾病的發展，為治療白癜風這一頑固性疾病提供新思路。

[1] Fistarol SK, Itin PH. Disorders of pigmentation[J]. J Dtsch Dermatol Ges,2010,8(3):187-201.

[2] Chen JX, Shi Q, Wang XW, et al. Genetic polymorphisms in the methylenetetrahydrofolate reductase gene (MTHFR) and risk of vitiligo in Han Chinese populations: a genotype-phenotype correlation study[J]. Br J Dermatol,2014,170(5):1092-1099.

[3] Lang KS, Caroli CC, Muhm A, et al. HLA-A2 restricted, melanocyte-specific CD8(+) T lymphocytes detected in vitiligo patients are related to disease activity and are predominantly directed against MelanA_MART1[J]. J Invest Dermatol,2001,116(6):891-897.

[4] 方春紅,梁虹,張啟國.表皮移植聯合葉酸及腺苷鈷胺治療白癜風臨床療效觀察[J].中國麻風皮膚病雜志,2005,21(7):505-506.

[5] Montes LF, Diaz ML, Lajous J, et al. Folic acid and vitamin B12 in vitiligo: a nutritional approach[J]. Cutis,1992,50(1):39-42.

[6] Anbar T, Zuel-Fakkar NM, Matta MF J, et al. Elevated homocysteine levels in suction induced blister fluid of active vitiligo lesions[J]. Eur J Dermatol,2016,26(1):64-67.

[7] Shaker OG, El-Tahlawi SM. Is there a relationship between homocysteine and vitiligo? A pilot study[J]. Br J Dermatol,2008,159(3):720-724.

[8] Karadag AS, Tutal E, Ertugrul DT, et al. Serum holotranscobalamine, vitamin B12, folic acid and homocysteine levels in patients with vitiligo[J]. Clin Exp Dermatol,2012,37(1):62-64.

[9] Silverberg JI, Silverberg NB. Serum homocysteine as a biomarker of vitiligo vulgaris severity: a pilot study[J]. J Am Acad Dermatol,2011,64(2):445-447.

(收稿：2016-09-07 修回：2016-10-26)

Correlation between serum MTHFR activity and clinical features of the patients with vitiligo

CHENJiaxi,YIXiuli,LIChunying,GAOTianwen.

Departmentofdermatology,XijingHospital,Fourthmilitarymedicaluniversity,Xi'an710032,ChinaCorrespondingauthor:GAOTianwen,E-mail:gaotw@fmmu.edu.cn

Objective:To determine the correlation between the serum methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) activity and clinical features of the patients with vitiligo. Methods: The MTHFR activity was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in 90 patients with vitiligo and 90 controls with matched age and sex. Results: The mean level of MTHFR was 332.77±92.85 U/L in vitiligo, which was lower than that in controls (403.66±96.56 U/L), (P<0.0001). The level of MTHFR activity in stable vitiligo, progressive vitiligo and rapid progressive vitiligo was decreased in a descending manner. There was no significant difference of MTHFR activity in sex, family history and duration of the disease. Conclusion: Reduction of MTHFR activity may be associated with the development of vitiligo.

vitiligo; MTHFR; activity

西京醫院助推項目(編號：XJZT15M15)

第四軍醫大學西京皮膚醫院，西安，710032

高天文，E-mail: gaotw@fmmu.edu.cn