類風濕關節炎患者外周血單個核細胞中B10細胞比例及臨床意義

李曉燕，吳貴福，張慧琴

(陜西省人民醫院，西安710068)

類風濕關節炎患者外周血單個核細胞中B10細胞比例及臨床意義

李曉燕，吳貴福，張慧琴

(陜西省人民醫院，西安710068)

目的 觀察類風濕關節炎(RA)患者外周血單個核細胞(PBMC)中B10細胞比例，并探討其臨床意義。方法 選取疾病活動期RA患者56例(RA組)和體檢健康者25例(對照組)，取外周靜脈血，采用流式細胞術檢測兩組PBMC中的B10細胞(表達CD19+CD5+CD1dhi并分泌IL-10的細胞亞群)，分析其與RA患者臨床指標的關系。結果 RA組PBMC 中B10細胞比例為0.46 %±0.24%，低于對照組的1.98%±0.45%(P<0.05)。PBMC中B10細胞比例與RA患者病程、壓痛關節數、腫脹關節數、C反應蛋白、紅細胞沉降率、病情活動程度DAS28評分、類風濕因子、抗環瓜氨酸肽抗體均呈負相關(r分別為-0.73、-0.46、-0.52、-0.44、-0.61、-0.58、-0.72、-0.66，P均<0.05)。結論 RA患者PBMC中B10細胞比例降低，且其水平可反應病情活動及炎癥反應程度。

類風濕關節炎；B10細胞；外周血單個核細胞；病情活動；炎癥反應

研究表明，B細胞在類風濕關節炎(RA)的發生、病情進展中扮演致病的角色。但有學者也發現，在B細胞缺陷小鼠模型中可出現關節炎癥狀加重現象，提示B細胞中可能存在著一群發揮免疫抑制作用的細胞[1]。這種具有負性免疫調節的B細胞亞群被稱為調節性B細胞(Breg)[2]。Breg可通過分泌細胞因子和細胞間接觸的方式發揮作用，而細胞因子IL-10是其介導免疫抑制的主要方式。為區別于分泌其他細胞因子的Breg亞群，這群表達CD19+CD5+CD1dhi并分泌IL-10的細胞亞群稱為B10細胞[3～5]。2015年1月～2016年6月，我們觀察了RA患者外周血單個核細胞(PBMC)中B10細胞比例變化，并分析探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取陜西省人民醫院同期收治的RA患者56例(RA組)，男40例、女16例，年齡18～75歲，病程5～50個月；壓痛關節數4～28個，腫脹關節數4～28個；C反應蛋白(CRP) 0.8～19.5 mg/dL，紅細胞沉降率(ESR)19～140 mm/h，病情活動程度DAS28評分3.05～8.16分，類風濕因子(RF)0～7 630 IU/mL，抗環瓜氨酸肽(CCP)抗體0～1 750 RU/mL。患者未經任何治療或僅服用非甾體類抗炎藥，排除感染、惡性腫瘤、傳染病以及心、肝、腎功能異常等患者。選取年齡及性別相匹配的健康人25例作為對照組。本研究獲醫院倫理委員會批準，研究對象均簽署知情同意書。

1.2 PBMC中B10細胞檢測方法 抽取外周靜脈血，采用Percoll密度梯度離心法分離外周血PBMC；調整細胞密度為1×107/ mL，用流式細胞術(FACSort；BD Biosciences)檢測。采用細胞膜與細胞內細胞因子共染色，抗CD19/CD5/CD1d抗體細胞膜染色、抗CD19細胞膜/IL-10胞內染色陽性細胞為B10細胞。

2 結果

2.1 兩組PBMC 中B10細胞比例比較 RA組PBMC 中B10細胞比例為0.46 %±0.24%，低于對照組的1.98%±0.45%(P<0.05)。

2.2 RA患者PBMC 中B10細胞比例與各臨床指標的關系 PBMC中B10細胞比例與RA患者病程、壓痛關節數、腫脹關節數、CRP、ESR、DAS28評分、RF、抗CCP抗體均呈負相關(r分別為-0.73、-0.46、-0.52、-0.44、-0.61、-0.58、-0.72、-0.66，P均<0.05)。

3 討論

RA是一種系統性、致殘率高的自身免疫性疾病，其發病有眾多炎性細胞和細胞因子的參與[6,7]。近年來以T細胞、B細胞和各種炎性細胞因子為治療靶點的生物制劑不斷出現[8]，這極大改善了RA 患者的預后。然而，一些難治性RA患者經上述治療后仍不能緩解。因此，需進一步深入研究RA的發病機制。

隨著研究的深入，各種T細胞亞群如Th1/Th2、Th17、Foxp3+Treg細胞在RA發病中的作用逐漸受到重視。但對于發病機制復雜的RA，主要以Th1細胞介導發病的膠原誘導的小鼠關節炎模型在反映整個RA的病理過程方面存在局限性。因此，近年來 B細胞在RA發病中的作用備受重視[9]。研究表明，B細胞通過多種方式參與RA發病：①分泌自身抗體參與機體的體液免疫。早在上世紀90年代，人們發現RA患者血清中存在多種自身抗體，如抗Ⅱ型膠原抗體、抗CCP抗體等。②提呈抗原作用。可活化T細胞，誘導后者產生TNF-α，進而活化巨噬細胞。③分泌細胞因子。可分泌TNF-α、IL-6等細胞因子，進而刺激固有免疫反應細胞活化，增強RA炎癥反應。④在RA患者滑膜組織內參與形成濾泡外生發中心，參與關節局部破壞。此外，B淋巴細胞刺激因子對B細胞的調節異常也會促進B細胞的惡性增殖，導致疾病的發生和進展。

研究發現，激活后的B10細胞主要通過分泌細胞因子和細胞接觸等多種方式發揮免疫抑制作用，而分泌IL-10是B10介導免疫抑制的主要方式。動物研究表明，給予自身免疫病動物體內輸入少量的B10細胞即可達到較長時間的保護作用，提示B10細胞可能在體內增殖，同時或也可能激活了其他免疫抑制細胞，誘導免疫抑制“瀑布效應”的形成。B10細胞不僅抑制Th17/Th1細胞的反應，而且能夠抑制活化的CD4+T細胞的功能并上調Treg細胞的表達，也可使效應性T細胞轉化為分泌IL-10的調節性T細胞[10]。目前，關于B10細胞表面標記還未完全達成一致[11]， 但是其能夠分泌IL-10卻是公認的。動物實驗發現，B10細胞可緩解炎性腸病[12]、系統性紅斑狼瘡[13]等小鼠模型的癥狀。近期研究發現，多種自身免疫性疾病患者體內B10細胞表達異常。本研究結果發現，RA患者體內B10細胞水平較正常人顯著降低，初步提示B10細胞在RA的發病中起抑制作用；并且，進一步研究結果證實B10水平與患者病程、病情活動度、炎癥指標呈負相關。因此，B10細胞可作為RA發病及病情評估的重要指標，這為探索B10治療RA的可能提供了理論基礎。但是，B10細胞是如何參與RA的發病，對RA患者T細胞、B細胞、單核細胞等炎性細胞是如何調節，以及是否具有過繼免疫治療作用，尚需進一步研究。

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陜西省科學研究計劃項目(S2016YFJQ1621)。

張慧琴(E-mail: zhq1589173@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.18.030

R593.22

B

1002-266X(2017)18-0083-03

2016-11-16)