FQ-PCR法檢測HBV-DNA與HBVM關系的探討

徐 慶 鄒 莉

（谷城縣人民醫院，湖北 襄陽 441700）

FQ-PCR法檢測HBV-DNA與HBVM關系的探討

徐 慶 鄒 莉

（谷城縣人民醫院，湖北 襄陽 441700）

目的探討FQ-PCR法檢測HBV-DNA與HBV血清標志物（HBVM）的相關性。方法對587例臨床血清標本采用FQ-PCR法進行HBV-DNA檢測，同時采用ELISA法進行乙肝免疫學對比檢測。結果血清HBV-DNA水平與HBV血清標志物的表現模式相關。以含有HBeAg（+）的（HBsAg（+）/HBeAg（+）/HBcAg（+））模式和（HBsAg（+）/HBeAg（+））模式的HBV-DNA陽性檢出率最高，分別為91.35%（169/183）和100%（17/17），均顯著高于其他HBVM模式（P＜0.01）。結論HBeAg和HBV-DNA有明顯的相關性，定量檢測HBV-DNA能真實反映HBV復制情況，為乙型肝炎的療效評價提供實驗室依據。

乙型肝炎病毒；FQ-PCR；血清標志物

目前，檢測HBV血清標志物（HBVM）及HBV-DNA是臨床診斷乙型肝炎病毒感染最常見的兩種方法。HBV-DNA一般先于血清標志物出現，且其就方法而言更為靈敏，因此HBV-DNA檢測在早期乙肝感染和抗病毒藥物的療效觀察、病情預測等方面具有重要的臨床價值。但老式的定性PCR具有易污染、假陽性高、試劑制品致癌等缺點，熒光定量PCR（FQ-PCR）正是克服了這些缺點現得到臨床的廣泛應用。本文采用587例臨床標本同時進行FQ-PCR和ELISA法檢測，將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源：選擇2013年10月至2014年12月我院門診乙肝5項查出的HBV不同感染模式者的血清587例，其中男性305例，女性282例，年齡6～79歲。采用無菌負壓管抽取空腹靜脈血5 mL，2 h內送檢。

1.2 方法

1.2.1 HBVM測定：采用ELISA法，試劑盒由中山生物工程有限公司提供；儀器為AP-960全自動酶聯免疫分析儀。

1.2.2 HBV-DNA測定：采用FQ-PCR法，試劑盒由達安基因診斷中心提供，儀器為ABI PRISM 7000全自動熒光定量PCR儀，嚴格按試劑說明書操作，設立陽性、陰性和臨界值對照以及4個標準梯度參控品，實際臨床可信靈敏度為1×10E3copies/mL，檢測HBV-DNA含量范圍在10E3～10E8copies/mL。

1.2.3 統計學方法：定量結果采用求算對數平均值的方法來計算HBVDNA平均拷貝數，以均數±標準差（x-±s）表示，遇有陰性結果（以＜1×10E3copies/mL為陰性結果），不參加平均值的統計。數據分析用t檢驗和χ2檢驗。

2 結 果

FQ-PCR法檢測HBV-DNA水平與ELISA法檢測HBVM陽性模式的關系見表1。由表1可見，只要是HBVM陽性的患者，其體內均存在不同程度的病毒復制。在HBeAg（+）的組1（大三陽）模式和組3模式中的HBV-DNA陽性率、HBV-DNA拷貝數對數值均顯著高于其他各組，差異有顯著性（P＜0.01）；組2（小三陽）和組4的HBV-DNA拷貝數對數值與組5和組6相比，差異無顯著性（P＞0.05），但HBVDNA陽性率與組5和組6的差異均有顯著性（P＜0.01）；組5和組6為具有一定免疫力的檢測者，其HBV-DNA拷貝數對數值的差異均無顯著性（P＞0.05）；而完全具有免疫力的組7檢測者其HBV-DNA陽性率為零。

3 討 論

本次檢測結果顯示，在有HBeAg（+）的組1（大三陽）模式和組3模式的HBV-DNA陽性檢出率較高，分別為91.35%和100%，這與其他模式無論是在HBV-DNA陽性檢出率還是其對數平均值上的差異均有顯著性（P＜0.01），這與有關報道相符[1-2]，進一步證實這兩種方法在反映HBV-DNA復制方面具有良好的一致性，有利于HBV感染期的診斷；而HBeAg為陰性的組2和組4模式中HBV-DNA的陽性率相對來說比較低，依次為41.01%和42.42%，這表明上面兩種情況患者體內HBV復制程度依次遞減[1]。另外，HBeAg陰性的患者仍然有半數可檢出HBV-DNA[3]，因此判斷HBV復制情況就特異性和敏感性而言，FQPCR法檢測HBV-DNA要優于ELISA法檢測的HBeAg[4]。

表1 血清HBV-DNA含量與HBVM的關系

另外，從組5和組6中可看出，在曾經感染并有免疫力的血清標本中，仍存在HBV-DNA的低水平復制，與有關報道一致[5]。這表示HBsAg已轉陰，但血清中仍存在HBsAb、HBeAb或HBcAb的患者，其體內依然有HBV-DNA的低水平復制，有復制即不能認為其完全無傳染性，進一步HBV-DNA的檢測很有必要。

總之，HBV感染的分子生物學標志HBV-DNA相比血清學的HBVM能更好地反映患者體內病毒的復制狀況，在臨床上評價乙型肝炎的傳染性及用藥療效等方面具有重要價值。

[1]楊連成.乙肝五項定性與HBV-DNA結果相關探討[J].安徽衛生職業技術學院學報,2014,13(2):95-96.

[2]張耀華,張紅旗.HBV感染者HBVM與HBV-DNA定量的關系[J].江蘇醫藥,2014,40(16):1626-1627.

[3]褚小慧.熒光定量PCR檢測HBV-DNA與ELISA檢測乙肝病毒血清標志物結果的關系探析[J].現代診斷與治療,2013,24(16):3794-3795.

[4]黃靜.熒光定量PCR檢測HBV-DNA與ELISA法乙肝免疫學檢測的探討[J].中國醫藥科學,2013,3(6):110-111.

[5]劉宇靜,吳學軍.熒光定量PCR檢測HBN-DNA與化學發光酶免疫檢測乙肝五項的相關性調查[J].標記免疫分析與臨床,2014,21(2): 197-199.

R512.6+2

B

1671-8194（2017）04-0031-02