近20年氣滯血瘀證動物造模進展研究

李楠，劉麗＊，李碩熙

（黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院婦二科，黑龍江 哈爾濱 150040）

近20年氣滯血瘀證動物造模進展研究

李楠，劉麗＊，李碩熙

（黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院婦二科，黑龍江 哈爾濱 150040）

本文主要討論近20年氣滯血瘀證實驗動物模型造模方法。發(fā)現(xiàn)單一因素造模主要以腎上腺素注射液為主，多因素主要以化學藥物聯(lián)合其他方法：物理因素（夾尾、冰水浴、束縛、聲光電等）；飲食（高脂高糖）等；環(huán)境因素（晝夜顛倒及改變照明等）為主；而選用多因素造模越來越普遍。本文總結(jié)出選用大鼠、多因素、慢性造模更適合臨床氣滯血瘀證的研究，以期為今后的實驗提供有利的指導(dǎo)。

氣滯血瘀；實驗動物；造模方法

1 氣滯血瘀模型

本動物模型模仿人類氣滯血瘀狀態(tài)，患者臨床往往出現(xiàn)心煩氣躁，易激惹的情感狀態(tài)，血液黏稠易凝，流速降低，血管痙攣狀態(tài)等[1]。縱觀近20年來文獻報道，我們可以總結(jié)出造模成功的動物往往精神抑郁或煩躁不安，易激惹，活動減少，白晝異常興奮或夜晚嗜睡，毛發(fā)變黃干枯，目赤，唇四白發(fā)黑，舌紫暗，舌下絡(luò)脈瘀紫，耳色變深瘀斑，爪甲色黃開裂，進食量少，排泄物少，飲水少，體質(zhì)量減輕，血液流變學可檢測各項凝血指標等均可支持氣滯血瘀證造模成功。前人的實踐給后人研究血瘀證生物表征模型的建立以很大啟發(fā)[2]。造模方法主要有注射腎上腺素；夾尾；束縛；聲光電；冰水浴；電針；干預(yù)飲食等。

1.1 單一因素造模 章正祥[3]采用注射腎上腺素的方法造模。《內(nèi)經(jīng)·經(jīng)脈別論》曰：疾走恐懼，汗出于肝。腎上腺素由腎上腺分泌，通過增加心輸出量，有供養(yǎng)機體超負運轉(zhuǎn)的作用。當人興奮、恐懼時，這種激素分泌增加。注射腎上腺素是為了模仿動物激怒恐懼狀態(tài)，從而實現(xiàn)氣滯血瘀模型。

1.2 多因素造模 除了注射腎上腺素以外，還有物理因素（包括聲、光、電）、環(huán)境因素等。陳輝[4]等指出，以上物理因素刺激動物，則可促進其交感神經(jīng)活動增強，出現(xiàn)微循環(huán)障礙等血瘀表現(xiàn)。而環(huán)境作為治病因素在“整體觀念”中即有體現(xiàn)。王文麗[5]用大鼠采用高脂飲食加夾尾刺激。高脂飲食配方為：6%蔗糖，1%谷氨酸鈉，5%蛋黃粉，8%花生油，1.5%膽固醇，0.4%甲基硫氧嘧啶，78.1%基礎(chǔ)飼料。夾尾頻率為每次30分鐘，每天4次。王家歷[6]選用大鼠實驗，采用多因素造模分別為夾尾每次30 min，每日2次；束縛每次30 min；冰水浴1oC-4oC冰水中每日游泳5 min，每日2次；傾斜鼠籠45度2 h，每日1次。晝夜顛倒，改變照明24 h；懸尾10 min；禁食24 h；皮下注射腎上腺素1 g/L 1次，每只0.1 mL；每日給予上述刺激中的一種。Wang等[7]采用注射腎上腺素及冰水浴的方法造模，腎上腺素濃度0.8 mg/kg，兩次注射間隔4 h，第一次注射2 h后冰水浴5 min。陳嘉斌等[8]分別采用電針刺激、中藥灌胃、以及注射腎上腺素等方法聯(lián)合造模，電刺激方法如下于：固定板上對足底進行電針刺激，頻率2 HZ，刺激3 h/d，固定3 h/d，共計處理20 d；中藥灌胃造模方法如下：灌胃黃連、石膏水煎劑，給藥劑量15 g/kg，灌胃2次/d，每次2 mL，共計處理15 d），腎上腺素造模方法如下：腎上腺素組皮下注射0.1%腎上腺素，每只0.2 mL，每天1次，共計處理7 d造模。測量血流變、高中低切變率、血漿黏度等指標。

2 總結(jié)

閆珊珊等[9]指出，氣滯血瘀是一個漫長的病理過程，短時間之內(nèi)造模可信度較弱，且缺乏量化標準。且單一因素造模周期長，成功率低，病變的全面性和準確性無法保障。復(fù)合因素造模能提高成功率，降低死亡率。實驗人員也認識到了這些不足，任建勛等[10]通過實驗證明了多因素刺激對于血液流變學的影響比單一因素刺激更明顯。近20年文獻的查詢中，筆者發(fā)現(xiàn)，單一因素造模主要以腎上腺素注射液為主，多因素主要以化學藥物腎上腺素為主聯(lián)合其他方法如物理因素（夾尾、冰水浴、束縛、聲光電等）；飲食因素（高脂高糖等）；環(huán)境因素（晝夜顛倒及改變照明等）；而選用多因素造模越來越普遍，這是因為與單一的西醫(yī)化學藥物刺激（腎上腺素等）相比，物理以及情志刺激更符合中醫(yī)證候之于人的進展過程，保證實驗的順利進行。其次，王婷婷等[1]驗證了只要達到造模的目的不需要對每一種方法都應(yīng)用在動物身上。從倫理學的角度來講，這也體現(xiàn)了對實驗動物的尊重和情感關(guān)懷。此外，不同的藥物濃度，以及刺激強度的差異均可不同程度的影響實驗結(jié)果，以上方法還需反復(fù)、多次實驗，通過對實驗數(shù)據(jù)的反復(fù)計算，推導(dǎo)，從而精益求精，得出最具有參考價值的實驗操作方法。田金洲等[11]等指出，臨床上研究氣滯血瘀證模型進行動物實驗應(yīng)用的動物最多的是大鼠，其次是小鼠，也有兔等等。而筆者認為本實驗更適合用大鼠。這是因為：（1）生理習性：小鼠天性怕驚，實驗員抓取小鼠時易受傷。大鼠性情較為溫和，依從性較小鼠為優(yōu)；小鼠體型較小，身體嬌嫩，對環(huán)境適應(yīng)性差，對疾病抵抗能力差，過冷過熱均會造成死亡；如果采用小鼠將對實驗室的條件要求更為嚴苛。而大鼠抗病能力強，不易感染病菌，生存時間長，基本可以持續(xù)到實驗結(jié)束。（2）實驗數(shù)據(jù)：驗證氣滯血瘀造模實驗需要實驗數(shù)據(jù)支持，大鼠體型大于小鼠，因此對于實驗所需血量以及所需器官量較小鼠更多、更易獲得[12]。

將中醫(yī)的氣滯血瘀證通過造模表現(xiàn)在實驗動物模型身上對于臨床試驗研究治療氣滯血瘀證的進展以及治療有里程碑的意義。

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[2]杜金行,史載祥.血瘀證及活血化瘀研究回顧與展望[J].福建中醫(yī)藥大學學報,2012,22(4): 1-4.

[3]章正祥,曹克剛,王芬,等.皮下注射腎上腺素復(fù)制氣滯血瘀模型的血流動力學初探[J].天津中醫(yī)藥,2011,28(1): 9-11.

[4]陳輝,吳英,楊思進.血瘀證動物模型造模方法研究進展[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2010(8): 98-99.

[5]王文麗,李冬梅,施雷.痰瘀同治法干預(yù)咳嗽變異性哮喘大鼠病癥結(jié)合動物模型氣道慢性炎癥療效的實驗研究[J].中華中醫(yī)藥學刊,2017(1): 223-226.

[6]王家歷.化瘀止痛散對氣滯血瘀EM的臨床療效和模型鼠的HMGB1、OPN等影響的研究[D].山東中醫(yī)藥大學,2016.

[7]Wang Y,Yan J,Li S,et al.Composition of the essential oil from danggui-zhiqiao herb-pair and its analgesic activity and effect on hemorheology in rats with blood stasis syndrome [J].Pharmacogn Mag,2016,12(48): 271-275.

[8]陳嘉斌,柴可夫,鄭楊,等.三種方法建立糖尿病氣滯血瘀證型大鼠模型的對比實驗研究[J].浙江中醫(yī)藥大學學報,2013,37(3):234-239.

[9]閆珊珊,竇維華,董少龍,等.血瘀證動物模型的制作及存在問題的探討[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學雜志,2004,10(2): 35-37.

[10]任建勛,林成仁,王敏,等.多因素整合建立氣滯血瘀證動物模型研究[J].中藥藥理與臨床,2007(5): 210-211.

[11]田金洲,王永炎,徐意,等.血瘀證動物模型的種類、評價與研究[J].北京中醫(yī)藥大學學報,2006,29(6): 396-400.

[12]郝光榮.實驗動物學[M].北京: 第二軍醫(yī)大學出版社.1999.

黑龍江省自然科學基金面上項目（No.H2015026）