牛髓藥材中蛋白質(zhì)含量測定方法

周麗麗 ，谷杰 ，孫婷婷 ，鄒巖

1.長春市食品藥品檢驗(yàn)中心，吉林長春 130021；2.白求恩醫(yī)科大學(xué)制藥廠，吉林長春 130000

牛髓為牛科野牛屬動(dòng)物黃牛Bos taurus domesticus Gmelin或水牛屬動(dòng)物水牛Bubalus bubalis Linnaeus的骨髓。牛髓，史載于《神農(nóng)本草經(jīng)》《本草綱目》等古代醫(yī)藥經(jīng)典著作，記載了該品的藥用功效，我國現(xiàn)代醫(yī)藥著作《中華本草》《中藥大辭典》《中國動(dòng)物藥資源》中均有記載該藥材，詳細(xì)描述了該品的來源、原形態(tài)、生境分布、化學(xué)成分、藥理作用、性味、歸經(jīng)、功能主治及用法用量。具有補(bǔ)血益精，止渴，止血，止帶之功效。常用于精血虧損，虛勞羸瘦，消渴，吐衄，便血，崩漏，帶下[1]。

現(xiàn)代研究表明，牛髓含有蛋白質(zhì)、脂肪、灰分、維生素B1、維生素BZ、尼克酸，其脂肪酸含月桂酸、肉豆酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸等。牛脊髓富含蛋白質(zhì)，氨基酸組成比豬肉更接近人體需要，能提高機(jī)體抗病能力，對生長發(fā)育及術(shù)后，病后調(diào)養(yǎng)的人在補(bǔ)充失血、修復(fù)組織等方面特別適宜，寒冬食牛肉可暖胃，是該季節(jié)的補(bǔ)益佳品；牛脊髓有補(bǔ)中益氣，滋養(yǎng)脾胃，強(qiáng)健筋骨，化痰息風(fēng)，止渴止涎之功效，適宜于中氣下隱、氣短體虛、筋骨酸軟、貧血久病及面黃目眩之人食用；牛脊髓能安胎補(bǔ)神，能安中益氣、健脾養(yǎng)胃、強(qiáng)筋壯骨。

目前國內(nèi)具備批準(zhǔn)文號的3個(gè)中成藥品種血寶片、血寶膠囊、益血生膠囊處方中均含有該藥材，成藥品種均有完善的國家標(biāo)準(zhǔn)，但處方中牛髓藥材無現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)及地方標(biāo)準(zhǔn)，無法控制藥材質(zhì)量，嚴(yán)重制約了該品種的深入開發(fā)。且牛髓本身為動(dòng)物鮮用組織，取用保存不當(dāng)，極易影響藥材質(zhì)量。企業(yè)急切期待制訂牛髓藥材的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。完善該藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，控制藥材質(zhì)量，才能更好地保證中成藥的質(zhì)量、保障人民用藥安全，同時(shí)也可為牛髓藥材的開發(fā)和廣泛應(yīng)用提供質(zhì)量保證。由于牛脊骨和腿骨均有髓腔，其中均有骨髓分布，有的企業(yè)以脊骨骨髓入藥，有的企業(yè)以腿骨骨髓入藥，由于基源記載中未規(guī)定骨髓來源，故二者均需作為研究對象。該文參照中國藥典氮測定法對其進(jìn)行了氮含量測定研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明所建立方法易于操作，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性良好，可作為牛髓藥材蛋白質(zhì)含量的質(zhì)控方法。

1 儀器與試藥

FOSS 8400型自動(dòng)定氮儀；硫酸滴定液（0.005 mol/L，F(xiàn)值為 1.011）為購買后稀釋 [精密量取硫酸滴定液（0.05 mol/L，F(xiàn) 值為 1.011）100 mL， 置 1 000 mL 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻]；硫酸銨（來源：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，純度：99.95%~100.05%，基準(zhǔn)試劑）硫酸為分析純，消化劑為FOSS公司提供。牛髓藥材為自行購買，分別購自長春、內(nèi)蒙、延邊、吉林地區(qū)。

2 測定方法

供試品溶液的制備：取本品0.1 g，精密稱定，置消化管中，分別加硫酸3 mL，消化劑0.6 g，置消化爐上，420℃消化，至溶液呈澄明的的綠色后，繼續(xù)加熱10 min，放冷，備用。

測定法：將盛已消化樣品的凱氏定氮瓶安裝在定氮儀上，加40%氫氧化鈉溶液30 mL，硼酸吸收液30 mL，水30 mL，進(jìn)行自動(dòng)蒸餾和滴定。并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。

3 方法驗(yàn)證

3.1 耐用性考察

供試品溶液制備方法的選擇參考中國藥典2015年版四部[2]氮測定法，對供試品制備條件進(jìn)行篩選：取本品（批號 20170225）0.1 g，4 份，精密稱定，置消化管中，分別加硫酸 10 mL、5 mL、3 mL、2 mL，分別加消化劑 0.6 g，置消化爐上，420℃消化，依法測定。結(jié)果見表1，顯示測定結(jié)果與加硫酸量無顯著差異，不同硫酸用量均能夠完全消化樣品，該法采用加酸量為5 mL。

表1 供試品溶液制備方法的選擇結(jié)果

3.2 專屬性考察

取空白管同法消化、測定，作為陰性對照（定氮儀測定時(shí)自動(dòng)扣除空白）。

3.3 線性關(guān)系考察

精密稱取硫酸銨0.120 9 g（含氮為25.62 mg），置100 mL容量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 1、3、5、7、10、15 mL， 置于全自動(dòng)定氮儀上進(jìn)行蒸餾滴定，以氮含量（mg）為橫坐標(biāo)，滴定液消耗量為縱坐標(biāo)計(jì)算回歸方程，結(jié)果見表2。結(jié)果表明氮含量在0.256 2～3.843 0 mg范圍內(nèi)，與滴定液消耗體積呈良好的線性關(guān)系。

表2 線性關(guān)系考察結(jié)果

3.4 重復(fù)性考察

精密稱取樣品 0.08、0.10、0.12 g，每個(gè)濃度取 3份，照上述方法獨(dú)立制備9份供試品，分別測定結(jié)果見表3，結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

3.5 回收率試驗(yàn)

精密稱取供試品0.05g，共稱9份，精密加入硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液（每 1 豪升含氮 0.712 mg）0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL各3份，照上述方法測定，計(jì)算方法回收率，結(jié)果顯示該方法加樣回收率較好，見表4。

3.6 樣品測定

精密稱取供試品0.1 g，照上述方法分別測定12批牛髓樣品蛋白質(zhì)含量，結(jié)果見表5。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

表4 回收率試驗(yàn)結(jié)果

表5 樣品測定結(jié)果

4 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，采用全自動(dòng)常量凱氏定氮法，測定牛髓藥材中蛋白質(zhì)含量。方法簡便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高，并且樣品中的油脂等其他成分不影響測定結(jié)果，可作為牛髓藥材中蛋白質(zhì)含量的準(zhǔn)確測定方法。

[1]南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典[S].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社,2006：403.

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：2015年版四部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2015：88.