細胞侵襲相關IL—8及IL—18在骨肉瘤患者血清水平及其臨床意義

黃可++廖品琥++謝克恭++盧賢哲++陸潞++王俊利++韋葉生++唐毓金

【摘要】目的研究血清IL8及IL18水平在骨肉瘤患者與健康體檢者之間的差異及臨床意義。

方法采用酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測160例骨肉瘤患者及250例健康體檢者的外周血血清IL8及IL18水平，比較兩組間IL8、IL18水平的差異及它們之間的相關性，探討血清IL8及IL18水平與骨肉瘤發病及進展的關系。

結果骨肉瘤患者組血清IL8水平較健康對照組升高（P<0.01 ），血清IL18水平較健康對照組降低（P<0.01）。在骨肉瘤患者組中，未發生遠行轉移的患者其血清IL8水平低于已發生轉移患者（P<0.05），未發生遠行轉移的患者其血清IL18水平高于已發生轉移患者（P<0.05）。AJCC分期中Ⅰ～Ⅱ期的低度惡性腫瘤相對于Ⅲ期同一骨斷不連續的腫瘤、Ⅳ期伴有血源性肺轉移以及遠行轉移腫瘤其血清IL8水平均較低（P<0.01），Ⅲ期較Ⅳ期伴有血源性肺轉移以及遠行轉移腫瘤其血清IL8水平略高，但差異無統計學意義（P>0.05）；Ⅰ～Ⅱ期患者較Ⅲ、Ⅳ期患者血清IL18水平均較高（P<0.01），Ⅲ期較Ⅳ期伴有血源性肺轉移以及遠行轉移腫瘤其血清IL18水平較高（P<0.05）。

結論血清IL8水平升高、IL18水平下降可能與骨肉瘤發生、進展、轉移有關，其作用可能表現為促進骨肉瘤細胞的增生和轉移，兩者有可能成為判斷骨肉瘤的進展和預后的指標。

【關鍵詞】骨肉瘤；白細胞介素8；白細胞介素18

骨肉瘤（osteosarcoma）是最常見的惡性骨腫瘤，好發于青少年，多發于骨干骺端，其早期即可發生遠處轉移。白細胞介素是一種由白細胞分泌的調節細胞生長分化的細胞因子，在調節機體免疫應答、損傷修復中起重要作用。近年來發現各種白細胞介素在直腸癌、乳腺癌、宮頸癌、胃癌等多種惡性腫瘤組織中高表達，并與腫瘤的血管生成、轉移、復發等惡性行為密切相關[1～4]。而不同家族白細胞介素對腫瘤細胞的生長、轉移作用也不相同，甚至相反。白介素8（interleukin8，IL8）可促進腫瘤血管新生和浸潤轉移，通過 JNK/SAPK 信號通路調控MMP2 蛋白的表達，促進肺腺癌A549細胞的轉移[5]。IL18可通過誘導T、NK等細胞產生干擾素γ（IFNγ），增強NK細胞和CTL的活性，促進T細胞增殖，以調節機體的免疫監視功能[6～7]，殺傷腫瘤細胞。本研究通過檢測骨肉瘤患者血清IL8、IL18水平，探討其與骨肉瘤的關系。

1對象與方法

1.1研究對象

選取2005年～2013年右江民族醫學院附屬醫院收治的骨肉瘤患者160例作為病例組，并最終有明確病理診斷確診為骨肉瘤的患者。男105例，女55例，年齡（27.88±8.26）歲。所有患者均排除家族腫瘤病史及自身免疫性疾病病史，且入院前未經抗腫瘤治療，未服用皮質類固醇激素、阿霉素以及有可能影響機體免疫功能的非甾體類抗炎藥物。隨機選取同時期到我院進行健康體檢的250名體檢健康者作為對照組，排除了家族性腫瘤病史、遺傳史或其他嚴重疾病史。男155例，女95例，年齡（27.53±7.35）歲。本研究經右江民族醫學院附屬醫院倫理委員會批準。兩組性別、年齡比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2主要試劑儀器

血清IL8及IL18試劑盒（武漢華美生物工程有限公司）；全自動酶標儀（美國雷杜公司）。

1.3血清IL8及IL18檢測

采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附劑測定 （ELISA）分別檢測血清IL8及IL18含量。

1.4統計學方法

采用SPSS 19.0軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用兩獨立樣本均數t檢驗，三組均數的比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用q檢驗（NewmanKeuls法），檢驗水準：α=0.05。

2結果

2.1病例組與健康對照組IL8及IL18水平的比較

骨肉瘤組血清IL8水平較健康對照組升高，差異有統計學意義（P<0.01 ）。骨肉瘤組患者血清IL18水平較對照組降低，差異有統計學意義（P<0.01）。見表1。

2.2病例組是否發生轉移患者的IL8及IL18水平比較

在骨肉瘤組患者中，未發生遠行轉移的患者其血清IL8水平低于已發生轉移患者，差異有統計學意義（P<0.05）；未發生遠行轉移的患者其血清IL18水平高于已發生轉移患者，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3病例組患者骨腫瘤AJCC分期的IL8及IL18水平比較

AJCC分期中Ⅰ～Ⅱ期的低度惡性腫瘤相對于Ⅲ期同一骨斷不連續的腫瘤、Ⅳ期伴有血源性肺轉移以及遠行轉移腫瘤其血清IL8水平均較低，差異均有統計學意義（P<0.01），Ⅲ期較Ⅳ期伴有血源性肺轉移以及遠行轉移腫瘤其血清IL8水平略高，但差異無統計學意義（P>0.05）；Ⅰ～Ⅱ期患者較Ⅲ、Ⅳ期患者血清IL18水平均較高，差異有統計學意義（P<0.01），Ⅲ期較Ⅳ期伴有血源性肺轉移以及遠行轉移腫瘤其血清IL18水平較高，差異有統計學意義（P<0.05）。見表3。

3討論

骨肉瘤多發生于青少年，惡性程度相對較高，嚴重危害青少年的身體健康。 隨著抗腫瘤藥物的應用，目前骨肉瘤患者術后5年生存率已明顯提高。但由于腫瘤細胞的迅速發展及耐藥性的產生，骨肉瘤治療失敗病例數逐年增加。為此，進一步探討骨肉瘤發生的分子機制勢在必行。早期探討與骨肉瘤發生、發展相關的基因可能包括：Bcl2家族、Fas/FasL家族、Caspases家族以及P53家族等[4]。近年來，白細胞介素家族在骨肉瘤發生、發展、轉移過程中的作用越來越受學者們的關注。本研究發現，IL8、IL18在骨肉瘤患者血清水平中呈相反的發展趨勢，說明兩者對骨肉瘤的作用可能表現為相互抑制或拮抗可能，作用相反。

IL8是一種多功能的趨化因子， 能夠促進炎癥反應的進程，對中性粒細胞有誘導趨化作用[6]。其在介導內皮細胞的遷移和增生，促進細胞分裂及腫瘤新生血管的形成，并在腫瘤發生、復發及轉移中發揮著重要作用[9～12]。本研究發現骨肉瘤患者血清 IL8水平較健康對照組患者顯著升高，且對于已經發生血源性轉移的患者其血清IL8水平明顯高于未發生轉移患者；Ⅲ期多發性腫瘤、Ⅳ期伴有遠行轉移腫瘤其血清IL8水平也顯著高于Ⅰ、Ⅱ期患者，說明IL8與骨肉瘤的發生、發展的過程密切相關，其作用可能表現為促進骨肉瘤細胞的增生和轉移。劉濤等人[13]對30例骨肉瘤標本進行免疫組化檢測，28例為IL8陽性（93.3%），其中強陽性者25例（83.3%）；在負荷原位灶中表達量明顯增加。此也進一步證實IL8可直接促進骨肉瘤細胞的增殖和轉移。

IL18屬于IL1配體家族，其結構與IL1蛋白家族相似，它可誘導T、NK等細胞產生干擾素（IFN），通過增強Thl細胞產生Thl類細胞因子、促進T細胞表面Fas配體的表達和增強Fas介導的細胞毒等作用，提高Thl免疫應答，以調節機體的免疫監視功能[6]，并在抗腫瘤血管生成中起重要作用[14～15]。IL18基因多態性可能與惡性腫瘤的發生有密切關系[16]。IL18表達下降可能與免疫細胞功能受損、免疫功能失調密切相關，從而增加腫瘤易感性。本實驗研究發現，在外周血中的IL18在健康對照組的水平明顯高于骨肉瘤組（P<0.05）。表明血清IL18的水平高低與機體抵抗腫瘤的能力變化方向是一致的。對于合并血源性肺轉移患者其血清IL18水平較未發生轉移患者低，且Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者血清IL18水平均較低度惡性的Ⅰ期患者低，說明骨肉瘤的轉移可能與IL18表達下調或其抗腫瘤的分子信息傳導途徑異常有關。Naoko Yamada等通過對骨肉瘤肺轉移小鼠模型進行化療和免疫治療發現，IL18可顯著抑制骨肉瘤發生肺部轉移，當聯合異環磷酰胺時其對骨肉瘤肺轉移的抑制作用更大[17]。查翔遠等[18]研究發現，內源性抑制物IL18結合蛋白可能通過上調VEGF的表達促進肝細胞癌血管形成。此二者均從另一個相反方向進一步證明此觀點，因此可以認為血清IL18的水平高低在一定程度上可能與骨肉瘤的預后有關，對判斷骨肉瘤的預后可能有幫助。

綜上所述，IL8、IL18表達水平的檢測可能為骨肉瘤預防、診斷以及預后的判斷提供重要依據。但由于IL8、IL18在骨肉瘤患者血清表達恰恰相反，兩者對骨肉瘤疾病的發生、發展及轉移的過程中起相反作用，甚至存在相互拮抗可能，其可能相互機制仍需進一步探討。

參考文獻

[1]Wang JL，Nong LG，Wei YS，et al.Association of interleukin8 gene polymorphisms with the risk of hepatocellular carcinoma[J].Mol Biol Rep，2014，41（3）：14831489.

[2]Wang J，He W，Liu J，et al.Association of IL6 polymorphisms with gastric cancer risk：evidences from a metaanalysis[J].Cytokine，2012，59（1）：176183.

[3]Huang ZQ，Wang JL，Pan GG，et al.Association of single nucleotide polymorphisms in IL12 and IL27 genes with colorectal cancer risk[J].Clin Biochem，2012，45（12）：5459.

[4]陳楷，呂書軍，付東，等.骨肉瘤凋亡與耐藥相關機制的研究進展[J].中國骨與關節雜志，2015，4（1）：4549.

[5]楊同寧.IL8對肺腺癌A549細胞遷移的影響及其機制探討[D].重慶：重慶醫科大學，2011.

[6]甘家華，祝育德.血清IL6、IL18及IFNγ檢測與宮頸癌的相關性研究[D].廣州：暨南大學，2010.

[7]Zhang B，Wu KF，Cao ZY，et al.IL18 increases invasiveness of HL60 myeloid leukemia cells：upregulation of matrix metalloproteinases9 （MMP9） expression[J].Leuk Res，2004，28（1）：9195.

[8]Zhang WJ，Gong YF，Xu GM et al.Relationship between serum interleukin8 and ulcerative colitis[J].Chin J Gastroenterol，2002，7（5）：277279.

[9]Ma Q，Zhou Y，Qiu XC.Research progress on selfseeding of circulating tumor cells[J].Modern Oncology，2011，19（6）：12351238.

[10]Huh SJ，Liang S，Sharma A，et al.Transiently entrapped circulating tumor cells interact with neutrophils to facilitate lung metastasis development[J].Cancer Res，2010，70（14）：60716082.

[11]Epanchintsev A，Shyamsunder P，Verma RS，et al.IL6，IL8，MMP2，MMP9 are overexpressed in Fanconi anemia cells through a NFκB/TNFα dependent mechanism[J].Mol Carcinog，2015，54（12）：16861699.

[12]Chuang TD，Khorram O.miR200c regulates IL8 expression by targeting IKBKB：a potential mediator of inflammation in leiomyoma pathogenesis[J].PLoS One，2014，9（4）：e95370.

[13]劉濤，馬瓊，張迎龍，等.IL8在循環腫瘤細胞自我種植促進人骨肉瘤進展中的作用機制[J].現代腫瘤醫學，2015，23（16）：22432246.

[14]Dinarello CA，Novick D，Kim S，et al.Interleukin18 and IL18 binding protein[J].Front Immunol，2013（4）：289.

[15]Palma G，Barbieri A，Bimonte S，et al.Interleukin 18：friend or foe in cancer[J].Biochim Biophys Acta，2013，1836（2）：296303.

[16]Wei YS，Lan Y，Liu YG，et al.Interleukin18 gene promoter polymorphisms and the risk of esophageal squamous cell carcinoma[J].Acta Oncol，2007，46（8）：10901096.

[17]Yamada N，Hata M，Ohyama H，et al.Immunotherapy with interleukin18 in combination with preoperative chemotherapy with ifosfamide effectively inhibits postoperative progression of pulmonary metastases in a mouse osteosarcoma model[J].Tumour Biol，2009，30（4）：176184.

[18]查翔遠，翟群遠，吳建成，等. 肝細胞癌組織中 IL18BPc 和 VEGF 的表達及與腫瘤血管形成的關系[J].安徽醫藥，2016，20（1）：8285.

（收稿日期：2016-05-18修回日期：2016-08-18）

（編輯：梁明佩）