G試驗和GM試驗在診斷AECOPD患者肺真菌感染的應用

隨著人口老齡化的加劇，抗生素的使用率增加，肺部感染的病原微生物正發生著變化，細菌，病毒，支原體，衣原體和真菌等不同病原致病后應對措施不同，缺少有效的早期診斷手段，真菌感染的病死率也居高不下。如何減少肺部感染的發生率和致死率，是當下值得重視和研究的臨床問題[1]。我科自2013年1月～2015年6月對慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）合并侵襲性肺真菌感染（IPFI）的高危79例患者進行了真菌1，3-β-D-葡聚糖（G試驗）和曲霉半乳甘露聚糖檢測（GM試驗），旨在早期診斷。

1資料與方法

1.1一般資料 本組自2013年1月～2015年6月因AECOPD 入院，經規范廣譜抗生素治療5 d 后，喘息和氣促不能緩解，體溫超過38℃或起初下降后再復升，遂行血漿G 試驗和血清GM 試驗的患者共79 例。根據我國血液病/惡性腫瘤患者侵襲性真菌感染的診斷標準與治療原則（第四次修訂），結合抗真菌感染治療效果，本組中，臨床確診侵襲性肺真菌感染 45 例、擬診侵襲性肺真菌感染6 例，非侵襲性肺真菌感染 28 例。

1.2方法

1.2.1血漿G 試驗 實驗原理為根據檢測血漿吸光度變化對真菌1，3-β-D-葡聚糖濃度進行定量，具體步驟如下：取待測血漿0.2 ml直接加入酶反應主劑中，溶解后使用微量加樣器轉移至9 mm ×65 mm 標準無熱原平底試管中（不要產生氣泡），插入MB-80 微生物快速動態監測系統中進行反應，反應結束后檢測系統自動計算出待測血清中1，3-β-D 葡聚糖含量，以>10 pg/ml視為結果陽性。

1.2.2血清GM值檢測 采用PlateliaAspergillus試劑盒（法國公司），具體方法為：血清樣本經含乙二胺四乙酸（EDTA）的處理液加熱處理，經處理的血清樣本與探測抗體一起加入到包被有單抗的微孔內，經過孵育，當有特異性抗原存在時形成了單抗一半乳甘露聚糖一單抗/過氧化物酶復合物。經沖洗去掉未結合物質，加入顯色溶液顯色至反應停止后即可在450 nm/630 nm處讀取吸光度（A）值。患者血清的GM值計算公式為：A指數（I）=A測定/A標準血清，GM試驗陽性定義為連續2次不同時點檢測A值>0.5或單次>0.7。

1.2.3 G 試驗與GM 試驗聯合檢測 聯合檢測的結果判斷方法有兩種，分別為聯合一：結果陽性是指G（+）GM（+），G（+）GM（-），G（-）GM（+）；結果陰性是指G（-）GM（-）。聯合二：結果陽性是指G（+）GM（+）；結果陰性是指G（+）GM（-），G（-）GM（+），G（-）GM（-）。

1.3統計學方法 以臨床確診IPFI 為真陽性，以非IPFI 為真陰性作四格表分析評價G 試驗、GM 試驗與聯合檢測診斷IPFI 的價值。采用SPSS 19.0 統計軟件。

2結果

2.1 G試驗結果 79 例患者中G 試驗陽性45 例，陰性34 例，陽性率為57.0%。以臨床確診IPFI 為真陽性共45 例，排除IPFI 診斷為真陰性共28 例，行四格表分析。G 試驗敏感度、特異度、陽性預測值（PPV）及陰性預測值（NPV）見表1。

2.2 GM試驗結果 79 例患者中GM 試驗陽性13 例，陰性66 例，陽性率16.5%。以臨床確診IPFI 為真陽性共45 例，排除IPFI 診斷為真陰性共28 例，行四格表分析。GM 試驗敏感度、特異度、PPV 和NPV 見表2。

2.3 G試驗和GM 試驗聯合檢測結果 臨床確診IPFI 患者45 例，非IPFI 患者28 例。根據G 試驗與GM 試驗結果，聯合一，即只要有一種結果為陽性則聯合檢測陽性，余為聯合檢測陰性，其敏感度、特異度、PPV、NPV 見表3；聯合二，即兩種結果均為陽性則聯合檢測陽性，余為聯合檢測陰性，其敏感度、特異度、PPV、NPV 見表3。

3討論

侵襲性肺真菌感染的治療依賴早期的診斷和用藥，但臨床上診斷系統性曲霉感染經常遇到困難，病情缺乏特異的臨床表現，很多患者死亡后經尸檢才能發現感染了曲霉。真菌感染機體的過程中，其菌體成分作為抗原釋放于體液中并刺激機體產生特異性抗體，因此對抗原和抗體的檢測有助于診斷。真菌1，3-β-D-葡聚糖是酵母和絲狀真菌細胞壁的多聚糖成分，在原核生物、病毒和人體細胞內均不存在。因此，血液及無菌體液中檢出1，3-β-D-葡聚糖在很大程度上可以視為IPFI的標志，如念珠菌、曲霉、鐮刀霉、酵母和絲孢酵母感染等。該試驗在定植的念珠菌中結果顯示為陰性，而接合菌（毛霉）、隱球菌屬的感染由于其細胞壁不能釋放這種多聚糖往往在G試驗中也顯示陰性。

半乳甘露聚糖（GM）是曲霉細胞壁上的多聚抗原，一般在曲霉感染者出現臨床癥狀和影像學檢查異常前數天，其體內循環中GM即可呈陽性表達，其靈敏度和特異度均可達到80%以上。GM試驗和G試驗聯合檢測能提高曲霉檢出的陽性率。作為診斷IFI的新型無創檢測手段，G試驗具有靈敏度和特異度高的優點，既能作為高度疑診。

參考文獻：

[1]劉代紅.血清半乳甘露聚糖檢測對患者AECOPD的診斷價值[J].中華呼吸雜志，2013；28（3）：83-86.

編輯/孫杰