采用HPLC法測定三七中3種皂苷的含量

摘要：目的 研究探討采用高效液相色譜儀測定復(fù)三七中三種皂苷含量的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法 以三七總皂苷分散片為研究對象，對其中的人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1含量進(jìn)行檢測。結(jié)果 不同批次三七總皂苷分散片中，人參皂苷Rb1含量在17.91 mg/片～18.23 mg/片，人參皂苷Rg1含量在17.12 mg/片～17.65 mg/片，三七皂苷R1含量在4.73 mg/片～4.82 mg/片。結(jié)論 通過高效液相色譜儀（HPLC）可以同時(shí)對三七中不同皂苷的含量進(jìn)行準(zhǔn)確定量，且具有操作簡單、快捷的優(yōu)點(diǎn)，重復(fù)性好，穩(wěn)定性強(qiáng)，可以用于三七相關(guān)藥物質(zhì)量控制的過程中，值得推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；三七；皂苷；含量

三七是我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中最珍貴的藥材之一，具有止血、補(bǔ)血、活血、抗血栓等多種功效[1]。本文以三七總皂苷分散片為研究對象，通過高效液相色譜法對三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1等三種皂苷含量進(jìn)行測定，并對其具體操作方法及檢測結(jié)果進(jìn)行分析。具體報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料 儀器：選擇日本島津儀器生產(chǎn)的LC-10A高效液相色譜儀（組成部分有微體積串聯(lián)雙柱塞、柱溫箱、紫外可見雙波長檢測器 、超聲波提取器HS 3120、中文化LC工作站）。

試劑：對照品人參皂苷Rb1（批號：110703-201420）、對照品人參皂苷Rg1 （批號：110703-201421）、對照品三七皂苷R1 （批號：110703-201423）；三七總皂苷分散片（三七總皂苷含量為50 mg/片）；洗脫劑乙腈（色譜純）、甲醇（分析純）、水（超純水）。其中，對照品皂苷購自中國食品藥品檢定研究院，三七總皂苷分散片為自制，洗脫劑購自津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心。

1.2方法 分別取人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1對照品進(jìn)行精密稱定，并使用濃度為20%的乙腈水溶液對其進(jìn)行溶解，并制成1 ml的混合溶液（其中人參皂苷Rb1含量為0.5 mg、人參皂苷Rg1含量為0.4 mg、三七皂苷R1含量為0.12 m）。同時(shí)取兩片三七總皂苷分散片研細(xì)，精密稱取0.3 g，用50 ml甲醇溶解，再次稱定經(jīng)超聲處理后，冷卻，稱定并使用甲醇將重量補(bǔ)足，以微孔濾膜進(jìn)行濾過處理，精密量取25 ml續(xù)濾液，待其徹底揮干之后，在殘?jiān)屑尤爰状既芤哼M(jìn)行充分溶解。溶解結(jié)束之后轉(zhuǎn)移至大小合適的容量瓶中，稀釋混勻，再次進(jìn)行濾過處理，獲得的續(xù)濾液即為供試品溶液。

色譜柱選擇規(guī)格為4.6 mm×250 mm，5 μm的Inertsil-Cl8柱，流動(dòng)相選擇乙腈-水溶液（前28 min和40 min后乙腈與水的比例為19：81，28～40 min乙腈與水的比例為47：53），在流速1.0 ml/min、柱溫為35℃條件下，波長203 nm下對三種不同皂苷的含量進(jìn)行檢測。對照品溶液、供試品溶液的進(jìn)樣量分別為10 μL和3 μL。同時(shí)，在不同條件下分別對檢測時(shí)的線性關(guān)系、精密度、樣品溶液穩(wěn)定性、回收率等進(jìn)行考察。

2結(jié)果

觀察高效液相色譜法檢測獲得的色譜圖，列出峰面積（A）與進(jìn)樣量（C）的線性回歸方程，可見人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1的線性范圍分別是0.4～8 μg、0.5～10 μg、0.12～2.4 μg，峰面積與進(jìn)樣量之間的線性關(guān)系良好，r分別是0.999963、0.999971、0.999939，P<0.05。精密度試驗(yàn)結(jié)果人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1的RSD 分別為0.23%、0.31%、0.33%，穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD 分別為0.70%、0.80%、0.61%，精密度和穩(wěn)定性均良好，平均回收率分別為99.01%和98.24%、98.83%。

對三個(gè)不同批次的三種皂苷水平進(jìn)行測定，可見20140901批次每片三七總皂苷分散片中人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量分別為18.23 mg、17.33 mg、4.73 mg，總含量為40.29 mg；20140902批次中人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量分別為18.01 mg、17.12 mg、4.82 mg，總含量為39.95 mg；20140903批次中人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量分別為17.91 mg、17.65 mg、4.77 mg，總含量為40.33 mg。

3討論

隨著現(xiàn)代提取與純化技術(shù)的不斷提高，三七的化學(xué)成分研究也獲得了長足的進(jìn)展，三七皂苷、黃酮苷、三七素、氨基酸、揮發(fā)油、糖類、其他微量元素等是三七的主要化學(xué)成分[2]，其中，皂苷作為最重要的成分，包含了總皂苷（以人參皂苷Rb1、 Rg1等為主，共計(jì)七種）和三七皂苷（以三七皂苷R1為主，共計(jì)二十余種）皂苷成分[3]，以皂苷為主要有效原料的藥物也涉及到血塞通片等不同類型。

本文采用了高效液相色譜儀分別對三七總皂苷分散片中三種皂苷的含量進(jìn)行測定，經(jīng)線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、回收率等系統(tǒng)性評估后，可見高效液相色譜法的檢測效果良好，基于該情況，對三個(gè)不同批次的三七總皂苷分散片樣品含量進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rb1含量在17.91 mg/片～18.23 mg/片，人參皂苷Rg1含量在17.12 mg/片～17.65 mg/片，三七皂苷R1含量在4.73 mg/片～4.82 mg/片，無論是淡中皂苷含量還是三種總量，均符合國家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)中關(guān)于三七總皂苷含量的規(guī)定，且操作簡單、快捷的優(yōu)點(diǎn)，重復(fù)性好，穩(wěn)定性強(qiáng)，可以用于三七總皂苷分散片質(zhì)量控制的過程中，也可在其他三七相關(guān)藥物質(zhì)量控制過程在推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

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