探討慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴細胞表面共刺激分子的表達變化及臨床意義

摘要：目的 探討慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴細胞表面共刺激分子的表達變化及臨床意義。方法 選取南昌大學第一附屬醫院收治的慢性乙型肝炎患者40例作為觀察組，所有患者均予以外周血T淋巴細胞表面CD4*、CD8*、CD4*/CD8*比值、CTLA-4等共刺激分子的表達變化測定，同時選取健康患者39例作為對照組，統計兩組患者的測定結果。結果 觀察組中治療組、治療無效組、治療有效組CD4*、CD8*T淋巴細胞亞群絕對表達量均明顯下降，低于對照組 （P<0.05）；CD8*T淋巴細胞亞群相對表達量明顯高于對照組（P<0.05），另外未治療組、治療無效組CD4*/CD8*比值明顯高于治療有效組、對照組（P<0.05）。結論 進行共刺激分子表達變化研究可以為慢性乙型肝炎治療提供一定的依據，為深入評價細胞免疫功能提供了新的研究角度。

關鍵詞：慢性乙型肝炎；外周血；T淋巴細胞；共刺激分子；表達變化

慢性乙型肝炎源于機體細胞免疫功能紊亂，不能有效清除體內病毒，其中T淋巴細胞在主導機體免疫功能方面發揮著重要的作用[1]。筆者主要探討慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴細胞表面共刺激分子的表達變化及臨床意義，將結果報告如下：

1 資料與方法

1.1一般資料 本次選取的40例研究對象均為南昌大學第一附屬醫院于2013年4月～2015年1月收治的慢性乙型肝炎患者作為觀察組，所有患者均知情同意，其中男29例，女11例，年齡37～68歲，平均年齡（45.3±5.6）歲；職業：教師16例、農民工4例、企業高管8例、退休在家12例。所有患者經檢查，均符合慢性乙型肝炎的診斷標準，排除神經系統障礙、嚴重心腦血管疾病、全身免疫系統疾病、凝血及造血功能障礙、甲型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎等患者。同時選取健康患者39例作為對照組，其中男30例，女9例，年齡36～69歲，平均年齡（45.8±5.7）歲；職業：教師15例、農民工5例、企業高管9例、退休在家11例。兩組患者在性別、年齡等資料方面無顯著差異（P>0.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1試劑 在測定過程中，需要用到的試劑：鼠抗人CD3-APC、CD8-FIT、CTLA-4-PE、PD-1-PE熒光素標記單克隆抗體，LgG-FITC、lgG-PE、lgG-APC同型對照融血劑，由美國BD公司提供；另外需要乙型肝炎病毒及耐藥突變檢測試劑盒、HBV標志物檢測試劑盒、ALT檢測試劑盒。

1.2.2儀器 流式細胞儀、擴增儀、高速冷凍離心機、全自動生化分析儀、全自動酶免分析儀、低溫冰箱。

1.2.3測定 外周血T淋巴細胞表面共刺激分子檢測具體方法：患者晨起空腹抽取外周靜脈血3 ml，抗凝混勻后分別置于5支不同的測定管中：其中第一管加入CD3、CD8、CD28，第二管中加入單抗CD3、CD8、CTLA-4，第三管中加入CD3、CD8、PD-1，第四管中加入單抗CD3、CD8、Tim-3，第五管中加入lgG-FTTC lgG-PE lgG-APC作為同型對照管，所有試管中均加入單抗20 μl，搖勻后在常溫下狀態下放置30 min，然后加入新鮮配置的溶血劑搖勻，在光線暗處放置15 min并離心5 min，使用磷酸鹽緩沖液進行3次洗滌，并且每管中加入0.3 ml PBS，在4°C中放置后在1 d內檢測。為了使結果更加精準，輔助測定方法：并采用定時熒光定量PCR檢測技術測定血清中HBV（乙型肝炎病毒）、DNA（脫氧核糖核酸）含量；采用雙抗體夾心時間分辨熒光免疫分析法檢測乙型肝炎病毒；采用全自動生化分析儀監測丙氨酸轉氨酶含量。

1.3觀察指標 將觀察組分為為治療組、治療無效組、治療有效組，與對照組作比較。分析兩組患者外周血T淋巴細胞亞群相對表達量[2]。分析兩組患者外周血T淋巴細胞亞群絕對表達量[3]。

1.4統計學方法 采用SSPS 20.0軟件進行數據的處理與分析，表示計量數據資料，采用t檢驗，（%）表示計數資料，并進行χ2檢驗，P<0.05，具有統計學意義。

2 結果

2.1患者外周血T淋巴細胞亞群相對表達量分析 觀察組三組CD4*、CD8*T淋巴細胞亞群絕對表達量均明顯下降，低于對照組 （P<0.05），見表1。

2.2患者外周血T淋巴細胞亞群絕對表達量分析 CD8*T淋巴細胞亞群絕對表達量明顯高于對照組。另外未治療組、治療無效組CD4*/CD8*比值明顯高于治療有效組、對照組（P<0.05），見表2。

3 討論

與對照組相比較，觀察組CD4*、CD8*等表達量出現明顯下降，另外未治療組CD4*、PD-1*表達量明顯高于對照組、治療有效組、治療無效組。總體而言，觀察組CD4*T淋巴細胞亞群相對表達量、絕對表達量均明顯低于對照組，但是CD8*T淋巴細胞亞群相對表達量升高，絕對表達量下降。研究表明，共刺激分子的絕對表達量更能反應患者的免疫功能狀態[4]。

綜上所述，進行共刺激分子表達變化研究可以為慢性乙型肝炎治療提供一定的依據，為深入評價細胞免疫功能提供了新的研究角度。

參考文獻：

[1]宋華峰.負性共刺激分子BTLA/HVEM在慢性乙肝患者外周血T細胞上的表達特性及其臨床意義[D].江蘇：蘇州大學，2014.

[2]王琳.外周血T細胞免疫功能與乙肝慢性化的相關性研究[D].江蘇：蘇州大學，2014.

[3]曹麗娟.負性共刺激分子在慢性乙肝患者外周血Treg的表達特性及其臨床意義[D].江蘇：蘇州大學，2013.

[4]黃璇.白細胞介素-21在慢性HBV感染者發生HBeAg血清學轉換中的作用[D].廣東：南方醫科大學，2013.

[5]張沙沙.程序性死亡分子1在HBV相關慢加急性肝衰竭發病機制中的作用[D].河北：河北醫科大學，2012.

編輯/羅茗柯