不同培養方法對山羊瘤胃上皮細胞生長及角蛋白18表達量的影響

劉思樂 康勁翮 譚支良 王 征

(1.中國科學院亞熱帶農業生態過程重點實驗室，亞熱帶農業生態研究所，湖南省農業生態過程重點實驗室，長沙410125；2.湖南農業大學生物科學技術學院，長沙410128)

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不同培養方法對山羊瘤胃上皮細胞生長及角蛋白18表達量的影響

劉思樂1,2康勁翮1*譚支良1王 征2*

(1.中國科學院亞熱帶農業生態過程重點實驗室，亞熱帶農業生態研究所，湖南省農業生態過程重點實驗室，長沙410125；2.湖南農業大學生物科學技術學院，長沙410128)

本試驗旨在研究不同培養方法對山羊瘤胃上皮細胞生長及角蛋白18(CK18)表達量的影響。采集42日齡山羊的瘤胃上皮組織，分別采用酶消化法和組織塊法對其進行體外培養。通過光學顯微鏡觀察原代培養和傳代培養階段的細胞形態，檢測第5代山羊瘤胃上皮細胞的生長曲線，并采用細胞免疫熒光法對山羊瘤胃上皮細胞進行鑒定。結果顯示：1)經0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙酸消化獲得的原代培養山羊瘤胃上皮細胞于2d開始貼壁生長，5d細胞開始明顯增多，10d細胞數量達到最大。2)經組織塊法獲得的原代培養山羊瘤胃上皮細胞于4d開始“爬出”組織塊，8d細胞開始明顯增多，14d細胞數量達到最大。3)經免疫熒光染色顯示2種方法獲得的細胞胞漿內CK18均呈陽性表達且細胞純度后者明顯高于前者。4)組織塊法獲得的細胞CK18表達量顯著高于酶消化法(P<0.05)。綜合得出，與酶消化法相比，應用組織塊法可成功獲得純度更高的山羊瘤胃上皮細胞。

山羊；瘤胃；上皮細胞；原代培養；分離；CK18

瘤胃是反芻動物消化代謝和營養物質吸收最重要的場所。……