鄭州地區兒童血清神經元特異性烯醇化酶參考區間的建立

葛麗麗，楊俊梅，李進香

(河南省鄭州市兒童醫院檢驗科 450053)

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·經驗交流·

鄭州地區兒童血清神經元特異性烯醇化酶參考區間的建立

葛麗麗，楊俊梅△，李進香

(河南省鄭州市兒童醫院檢驗科 450053)

目的 建立鄭州地區0～14歲健康兒童血清神經元特異性烯醇化酶(NSE)的參考區間。方法 檢測1 001名0～14歲健康兒童血清NSE。將研究對象按性別和年齡分組(<1個月組、1個月至3歲組、>3歲組),對各項參數進行統計學分析，得出各年齡組兒童血清NSE的參考區間。結果 0～14歲兒童不同性別間血清NSE水平差異無統計學意義(P>0.05)；不同年齡組間血清NSE水平差異有統計學意義(P<0.05)。3個年齡組的參考區間分別是0～32.13mg/L(<1月組)，0～23.26mg/L(1個月至3歲組)和0～21.47mg/L(>3歲組)。結論 兒童各年齡組的NSE參考區間具有明顯差異。建立不同年齡段的NSE參考區間，對于臨床疾病的診斷和評估具有重要意義。

神經元特異性烯醇化酶；參考值；兒童；鄭州

1977年，Marangos等首次從大腦組織中提取神經元特異性烯醇化酶(neuron-specificenolase,NSE)，該蛋白相對分子質量為78×103，是含有2個w亞基的二聚體肽，參與糖酵解的催化過程[1]。近年來，有學者證實，NSE是神經元及神經內分泌細胞的一個標志酶。它在神經源腫瘤組織和細胞中高表達，在非神經性腫瘤組織中則呈陰性[2]。NSE與神經系統腫瘤和損傷密切相關，當神經元受損時破壞了膜的完整性，NSE即從胞質釋放到細胞外間隙，在腦創傷、癲癇、高熱驚厥、神經母細胞瘤、新生兒缺氧缺血性腦病等中樞神經系統疾病中，血清NSE可作為腦損傷的一種生化指標并指導治療[3-6]。隨著NSE在兒童神經系統疾病中越來越廣泛的應用，不同的檢測試劑盒有不同的參考值，而臨床上NSE的正常參考值均來自于健康成人。由于沒有統一的兒童血清正常參考值給臨床應用帶來諸多不便。研究表明，兒童血清NSE正常值高于成人，若直接將成人的正常參考值應用于兒童，會造成臨床上假陽性的結果[7]。因此，建立適用于兒童的血清NSE正常參考值范圍,能夠更好地反映神經系統損傷兒童體內NSE水平。本文通過檢測1 001名0～14歲健康兒童血清NSE值來建立兒童的正常參考范圍,為臨床兒童神經系統損傷疾病的診治提供診斷依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 經臨床表現、體征及影像學檢查排除黃疸、神經母細胞瘤、高熱驚厥、癲癇、缺氧缺血性腦病、腦損傷等神經系統疾病的兒童作為研究對象，受檢者年齡為0～14歲,剔除離群值，符合納入標準的共1 001人,其中男孩500人,女孩501人,依據相鄰年齡組NSE比較差異無統計學意義(P>0.05)進行合并，差異有統計學意義不進行合并的原則(P<0.05)分為3個年齡組:<1個月組87人,1個月至3歲組530人,>3歲組384人。

1.2 儀器與試劑 分析儀器為Roche公司E170型全自動電化學發光分析儀，試劑為Roche公司生產的NSE測定試劑盒。批號00182195,有效期期至2016年7月。

1.3 方法

1.3.1 標本采集 采集外周靜脈血2mL，3 000r/min離心10min,取上層血清上機按照儀器操作規程測定,檢測方法為電化學發光法。

1.3.2 分組方法 將研究對象按年齡分為15個組，即：<1個月組(A組)，1個月至<1歲組(B組)，1～<2歲組(C組)，2～<3歲組(D組)，3～<4歲組(E組)，4～<5歲組(F組)，5～<6歲組(G組)，6～<7歲組(H組)，7～<8歲組(I組)，8～<9歲組(J組)，9～<10歲組(K組)，10～<11歲組(L組)，11～<12歲組(M組)，12～<13歲組(N組)，13～<14歲組(O組)。相鄰兩個年齡組間NSE比較采用t檢驗。差異無統計學意義(P>0.05)的相鄰年齡組進行合并，差異有統計學意義(P<0.05)的相鄰年齡組不合并。依據分組合并原則最后分為3個年齡組，即<1個月組、1個月至3歲組和>3歲組。

1.5 參考區間驗證 篩選并分析2015年9月鄭州市某三甲醫院使用相同分析系統的實驗室血清標本，約50例，所有標本均符合試驗標準，計算R值。R=測定結果在參考區間內的例數/總測定例數。如果50個試驗對象有5個以上檢測值在參考區間以外，即R≤90%，則參考區間不適用，如果R>90%，則參考區間適用。

2 結 果

2.1 0～14歲兒童血清NSE分布 統計結果顯示，總體的偏度系數為0.99，峰度系數為1.85。正態性K-S檢驗結果顯示，數據基本服從正態分布(圖1)。

2.2 各年齡組兒童血清NSE分布 <1個月組偏度系數為0.60，峰度系數為-0.27；1個月至3歲組偏度系數為0.71，峰度系數為0.59；>3歲組偏度系數為0.76，峰度系數為1.87。K-S檢驗結果顯示，新生兒組呈近似正態分布，其他兩組數據均服從正態分布(圖2)。

圖1 0～15歲兒童血清NSE分布直方圖

圖2 各年齡組兒童血清NSE分布直方圖

2.3 不同年齡組間兒童血清NSE比較 采用獨立樣本t檢驗比較相鄰兩個年齡組間血清NSE的統計學差異。結果顯示，A組與B組(P=0.00)、D組與E組(P=0.00)、O組與成人組比較，差異有統計學意義(P<0.05)。其余相鄰組間差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 相鄰年齡組兒童血清NSE比較

2.4 各年齡組間兒童血清NSE比較 將無統計學差異的組進行合并，分為3組，即<1個月組，1個月至3歲組，>3歲組。采用單因素方差分析比較3個不同年齡組間兒童血清NSE值，F值為38.49，P值為0.00，表明，3組數據差異有統計學意義。進一步對3組數據進行兩兩比較，檢驗結果顯示，<1個月組顯著高于1個月至3歲組(P=0.00)，并顯著高于>3歲組(P=0.00)，而1個月至3歲組也顯著高于>3歲組(P=0.01)。>3歲組與成人組相比，差異有統計學意義(P=0.00)。取單側95%可信區間建立各年齡階段正常參考值范圍(表2)。

表2 年齡組間兒童血清參考區間

2.4 相同年齡不同性別間兒童血清NSE比較 采用獨立樣本t檢驗比較相同年齡不同性別兒童之間血清NSE的差異，結果顯示，P值均大于0.05。表明，相同年齡不同性別間兒童血清NSE的差異無統計學意義(表3)。

表3 各組兒童不同性別之間血清NSE比較

2.5 各年齡組兒童血清NSE參考區間驗證 抽取鄭州市某三甲醫院使用相同分析系統的實驗室血清標本，剔除離群值后，約50例，所有標本均符合試驗標準，試驗條件保持和本實驗室一致。驗證結果顯示，小于10%的檢測值落在建立的參考區間以外，即R>90%，表明，本試驗建立的兒童血清NSE正常參考值范圍適用。

3 討 論

臨床研究提示，NSE是一個容易檢測、有高度特異性并且穩定性強的神經系統損傷標志物。近年來，有關NSE在兒童神經系統疾病中應用的研究逐漸增多， 如在新生兒缺氧缺血性腦病、中樞神經感染、癲癇、心肺復蘇后腦損傷的應用中發現其與腦細胞的損傷程度呈正相關，和預后呈負相關[8-10]。研究表明，當機體缺血、缺氧引起神經組織損傷時，NSE從缺氧缺血的壞死細胞中釋放最迅速，在24 h內檢測其濃度最能反映其高峰值，比其他神經系統檢查結果快速，且結果穩定，不易受神經系統以外因素的影響，故其血清濃度的改變可作為判斷足月新生兒缺氧缺血性腦損傷程度和預后靈敏而可靠的生化指標[11]。窒息新生兒由于腦組織嚴重損傷可導致多種神經系統后遺癥，如腦癱、癲癇和智力發育落后等。因此，早期診斷和正確評估腦損傷嚴重程度及預后具有重要的臨床意義。

目前，臨床上使用的化學發光法檢測NSE的正常參考值范圍為0～16(mg/L)，是成年人的血清參考值范圍。研究表明，兒童血清NSE正常值高于成人血清，若直接將成人的正常參考值應用于兒童，會造成臨床上假陽性的結果。本研究發現，兒童血清NSE無性別差異，但其均數隨年齡增加有降低趨勢，并與成人存在差異。血清NSE取決于神經元和神經內分泌細胞釋放NSE的量和血腦屏障。與成人相比，兒童血腦屏障還不完善，腦脊液中的物質更易通過血腦屏障到達血液中，這點可能是兒童血清NSE 高于成人的原因之一。而隨著年齡的增長，血腦屏障逐漸完善，腦脊液中的物質不容易流入血液，3歲后血腦屏障發育已基本成熟。考慮到年齡是影響因素，血腦屏障的發育水平與年齡相關，丁志勇等[7]將兒童組根據年齡分為兩個階段(≤3歲和>3歲)，分別檢測兩個年齡段及成人的血清NSE，并統計學分析幾組血清NSE值之間的差異，研究結果顯示，3歲以下兒童的血清NSE平均水平高于3歲以上兒童，提示兒童血清NSE水平和年齡呈負相關，而成人血清NSE則和年齡不相關，證明血腦屏障完善后，血清NSE不再受年齡的影響。彭好等[12]通過對新生兒血清 NSE水平的動態研究發現，新生兒生后血清NSE水平高于成人正常參考值。

隨著NSE在兒童神經系統疾病中越來越廣泛的應用，不同的試劑盒檢測有不同的參考值，而臨床上NSE的正常參考值均來自于健康成人。由于沒有統一的兒童血清正常參考值給臨床應用帶來諸多不便。因此，建立兒童NSE的正常參考范圍，為小兒神經系統損傷的診斷提供更精確的檢測參考指標具有極其重要的臨床意義。

本文得出<1個月組、1個月至3歲組和>3歲組兒童血NSE正常參考值范圍分別為0～32.13、0～23.26 mg/L和0～21.47 mg/L，其參考區間均與臨床現用的成人參考值范圍不符,若將成人的NSE參考值范圍應用于神經系統損傷的兒童進行診斷,將導致假陽性。此外，統計學結果表明,0～14歲兒童不同性別間血清NSE值的差異無統計學意義(P>0.05);而文中年齡組間血清NSE值的差異存在統計學意義(P<0.05)。>3歲兒童的平均血清NSE值明顯高于3歲以下的兒童,表明血清NSE的水平有隨著年齡增加而降低的趨勢,且其參考值范圍的下限和上限也相應降低。這一結果提示在兒童血清NSE結果判定時應充分考慮到年齡因素,以免造成假陽性或假陰性。

血清NSE是一個對兒童神經系統損傷高度敏感、非常有應用價值的分子標志物，因此確立兒童血清NSE正常參考值范圍，對于兒童神經系統疾病的診斷和治療具有重要的臨床意義。

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作者簡介：尹康(1974-)，碩士，副教授，主要從事燒傷、整形美容方面的研究。

10.3969/j.issn.1671-8348.2016.31.032

鄭州市科技攻關項目(20140513)。

葛麗麗(1981-)，碩士，檢驗師，主要從事臨床免疫學檢驗及研究。△

，E-mail:yangjunmei7683@163.com。

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1671-8348(2016)31-4413-03

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