IRF2 基因rs13146124位點多態性與系統性紅斑狼瘡的關聯性研究*

崔曉麗，李紅梅，劉水和，葉震璇，張 華△

(1.遵義醫學院檢驗系，貴州遵義 563000；2.貴州省人民醫院檢驗科，貴陽 550001)

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論著·臨床研究 doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.30.017

IRF2 基因rs13146124位點多態性與系統性紅斑狼瘡的關聯性研究*

崔曉麗1，李紅梅2#，劉水和2，葉震璇2，張 華2△

(1.遵義醫學院檢驗系，貴州遵義 563000；2.貴州省人民醫院檢驗科，貴陽 550001)

目的 探討Ⅰ型干擾素通路中干擾素調節因子2(IRF2)基因rs13146124位點單核苷酸多態性(SNP)與系統性紅斑狼瘡(SLE)易感性之間的關聯。方法 采用Taqman實時熒光定量聚合酶鏈式反應(PCR)分析技術檢測366例SLE患者、218例健康對照者IRF2基因rs13146124位點多態性，計算和分析基因型和等位基因頻率。結果 SLE患者IRF2 rs13146124位點 AA、AG、GG基因型頻率分別為0.011、0.246、0.743，與對照組間差異無統計學意義(χ2值分別為0.093、0.205、0.136；P值分別為0.761、0.651、0.712)；SLE患者IRF2 rs13146124位點A、G等位基因的頻率分別為0.13、0.87，與對照組間差異無統計學意義(χ2=0.071，P=0.790)。IRF2 rs13146124位點等位基因A和G與抗核抗體(ANA)、抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)等特異性抗體之間差異無統計學意義(P>0.05)。IRF2 rs13146124位點的等位基因與關節炎、腎損傷等臨床特征無相關關系。結論 IRF2 rs13146124基因位點的多態性可能與貴州人群SLE的易感性無關。

系統性紅斑狼瘡；干擾素調節因子；基因多態性

系統性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE) 是一種自身免疫性疾病[1]，以體內大量自身抗體產生和免疫復合物形成為特點，發病機制尚不明確。全基因組關聯研究(GWAS)及SLE候選基因的研究已經確定了70多個易感位點，但許多易感基因仍有待確定[2]。近年來研究證實干擾素通路中的多個基因的變異參與了SLE的發病。干擾素調節因子(interferon regulator factor，IRF)是一類多功能的轉錄因子，目前已發現10個IRFs成員：IRF1～IRF9 和病毒 IRF( V-IRF)[3]。IRF可誘導干擾素的產生及調控相關基因的表達，在SLE的發病中起作用。近來日本學者Kawasaki等[4]報道，IRF2 rs13146124與亞洲人群SLE易感性相關，而國內尚未見該基因與SLE的相關報道。本研究擬對貴州地區人群SLE患者與健康人群IRF2基因進行單核苷酸多態性(single nucleotide polymorphism，SNP)檢測，以探討IRF2基因多態性與SLE易感性之間的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 SLE組：收集2010年10月至2016年3月貴州省人民醫院腎內科門診及住院患者366例，其中男36例，女330例，年齡9～86歲，平均(32.89±13.28)歲。所有病例均符合1997年美國風濕病學會(ACR)關于SLE的分類修訂標準[5]。對照組：貴州省人民醫院體檢健康者218例，排除1型糖尿病、類風濕性關節炎、SLE等自身免疫病患者，其中男20例，女198例，年齡14～76歲，平均(38.41±13.62)歲，年齡、性別與SLE組相匹配。所有研究對象均無親緣關系。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取 采集受檢者靜脈血2 mL，用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝，采用非離心柱法提取基因組DNA。

1.2.2 引物設計與合成 由美國ABI公司設計合成，在特異性雜交熒光探針的5′端結合熒光發光基團(FAM)，在3′端結合熒光吸收基團(VIC)。產品目錄號：C_31861563_10(IRF2)。

1.2.3 IRF2基因聚合酶鏈式反應(PCR)擴增 PCR反應體系總體積25 μL。擴增條件：50 ℃ 2 min，95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s ，60 ℃ 1 min，共40個循環。

1.2.4 等位基因分型 ABI 7500 FAST 通過檢測熒光強度來確定基因型，并利用終點法對等位基因進行定性，SDS軟件檢測和分析處理PCR擴增后的FAM和VIC熒光信號。

1.3 統計學處理 采用SPSS17.0軟件對研究數據進行統計分析。樣本的群體代表性采用Hardy-Weinberg平衡檢驗檢測。等位基因頻率=(2×純合子+雜合子)/(2×受檢人數)。計數資料以例數或百分率表示，基因型及等位基因頻率組間，自身抗體組間，臨床癥狀組間計數資料比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 IRF2基因 rs13146124基因型及等位基因頻率分布 IRF2基因rs13146124原始數據見圖1，等位基因純合子分別沿X軸、Y軸分布，雜合子則沿對角線分布。IRF2 rs13146124基因型頻率在SLE組和對照組人群中符合Hardy-Weinberg遺傳平衡(χ2=1.328，χ2=0.254，均P>0.05)，說明樣本具備群體代表性，可進行遺傳分析。IRF2 rs13146124位點存在的3種基因型AA/AG/GG，等位基因為A和G。通過χ2檢驗，基因型AA、GG、AG在兩組間的頻率總體分布差異無統計學意義 (χ2值分別為0.093，0.205，0.136；P值分別為0.761，0.651，0.712)，等位基因A/G頻率在兩組人群中的分布差異無統計學意義(χ2=0.071，P=0.790)，見表1。

X軸：基因型AA；Y軸：基因型GG。

圖1 rs13146124位點等位基因分型結果

2.2 IRF2基因 rs13146124 位點多態性與抗體的關系 通過病例-病例分析[比如抗Sm抗體(+)的SLE患者與抗Sm抗體(-)的SLE患者之間rs13146124等位基因頻率的差異]，rs13142164位點等位基因A和G與抗核抗體(ANA)、抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)等特異性抗體之間差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

2.3 SLE患者的臨床資料 366例SLE患者中，可提供臨床資料分析的共262例。其中較為常見的臨床癥狀有關節炎 120例( 45.80%)、腎損傷 109 例(41.60%)，其次為顴部紅斑、盤狀紅斑、漿膜炎、光敏感，陽性率分別為32.44%、5.34%、6.11%、4.58%，見表3。

表2 SLE組特異性抗體與rs13146124等位基因的相關性分析

表3 rs13142164位點 SLE 患者的主要臨床癥狀

2.4 基因分型結果與臨床表現的關系 關節炎、腎損傷、顴部紅斑、盤狀紅斑等臨床特征與 rs13146124位點的等位基因之間無明顯相關性(P>0.05)，見表4。

表4 rs13146124 等位基因頻率與 SLE 臨床表現的關聯性分析

續表4 rs13146124 等位基因頻率與 SLE 臨床表現的關聯性分析

3 討 論

SLE是一種以產生多種自身抗體、激活補體、免疫復合物沉積，以導致組織和器官的損傷為特征的自身免疫性疾病，可累及多系統、多臟器，臨床表現復雜多樣[1]。迄今為止，其發病機制尚未完全闡明，一般認為是由遺傳因素和環境因素共同作用，導致多種免疫異常，致 T淋巴細胞、B 淋巴細胞和樹突狀細胞的功能失調及大量自身抗體產物形成。SLE是一種多基因遺傳病，多個微效易感基因可能共同參與了SLE的發生與發展[6]。迄今為止，已發現并確證多個SLE的易感區域或基因，如HLA區域、ITGAM、IRF5、STAT4、PTPN22、BLK、BANK1、TNFSF4 等。隨著SNPs檢測技術的進展，在大規模人群中對SNPs進行檢測日益得到廣泛應用。

有文獻報道Ⅰ型干擾素通路在SLE的發病機制中扮演著重要角色[7]。Ⅰ型干擾素信號傳導通路受多種基因調控，他們的SNPs對SLE的發病有不同貢獻，其中IRF5和STAT4是主要的Ⅰ型干擾素相關基因[8-9]，他們的多種SNPs與SLE發病相關[10]，但目前國內未見IRF2有關SNP的報道。

IRF2屬于干擾素調節因子家族的一員，基因定位于4q35.1，編碼區1 047 bp，由349個氨基酸組成，被認為是負性調節Ⅰ型干擾素信號[11]。IRF2主要通過與IRF1競爭性結合相同的順式作用元件，相互協調來調節Ⅰ型干擾素基因和干擾素刺激應答基因(interferon stimulated gene，ISG)的表達。IRF2能強烈啟動Thl 應答，通過與IRF8的相互作用來增加 白細胞介素(IL)-12和IL-23 的p40 亞基表達，促進Th1的分化，從而引起SLE的發病[12]。此外，IRF2也參與了乳腺癌、黑色素瘤、食管癌等多種腫瘤的形成[13-14]。

Kawasaki等[4]于2014年在日本對834例SLE患者和817例健康者做了IRF2 (rs13146124、rs66801661、rs62339994)的基因SNP與SLE的關聯性研究，結果發現rs13146124多態性與SLE具有相關關系。本次研究檢測了貴州省人群中SLE患者和健康對照人群中IRF2基因rs13142164位點的多態性。在SLE組和對照組中，rs13142164 位點都存在A和G等位基因。SLE組和對照組的等位基因頻率差異無統計學意義(P>0.05)；比較兩個位點的基因型頻率，發現SLE組中3種基因型頻率與對照組的分布差異也無統計學意義(P>0.05)。表明該位點與貴州地區SLE易感性不相關。本研究結果與其他報道不一致，原因可能與研究地區、種族差異相關，也可能與不同人群中SLE遺傳的異質性有關。

筆者還將IRF2 rs13146124分別與SLE 7種特異性抗體和臨床表現之間的相關性進行了分析。結果顯示：IRF2 rs13146124位點等位基因A和G與ANA、dsDNA、Anti-nRNP、Anti-Sm等7種抗體之間差異無統計學意義(P>0.05)。在納入研究的262例SLE患者中以關節炎、腎損傷、顴部紅斑為主要臨床表現，rs13146124位點等位基因A和G與關節炎、腎損傷、顴部紅斑等7種臨床表現之間差異無統計學意義(P> 0.05)。進一步說明rs13146124位點可能與貴州地區SLE的發病不存在關聯。

筆者采用群體相關研究策略，運用TaqMan-PCR技術發現IRF2 rs13146124與SLE易感性無關。SLE作為多因素疾病，受到眾多危險因素的影響。本次只選取了IRF2基因上的單個SNP 位點，在接下來的研究中可進一步探索其他 SNP位點與SLE發病的關聯。并深入探討 IRF2 SNP位點對其轉錄水平及其蛋白表達水平的影響，進一步對SLE發病相關機制進行深入研究。

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Study on the relationship between polymorphism site rs13146124 of IRF2 and systemic lupus erythematosus patients﹡

Cui Xiaoli1,Li Hongmei2#,Liu Shuihe2,Ye Zhenxuan2,Zhang Hua2△

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,ZunyiMedicalCollege,Zunyi,Guizhou563000,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,GuizhouProvincePeople′sHospital,Guiyang,Guizhou550001,China)

Objective To investigate the correlation between single nucleotide polymorphism rs13146124 of interferon regulatory factor2(IRF2) on type Ⅰ interferon pathway and systemic lupus erythematosus(SLE) in a population from Guizhou Province.Methods The polymorphism IRF2(rs13146124) was detected by using Taqman-PCR in 366 cases of patients with SLE and 218 healthy controls.The genotype and allele frequencies were calculated and analyzed.Results The genotype frequencies of AA,AG and GG in IRF2 rs13142164 site in patients with SLE were 0.011,0.246 and 0.743 respectively,compared with the control group,the difference was not statistically significant (χ2=0.093,0.205,0.136;P=0.761,0.651,0.712).The allele frequencies of A and G in IRF2 rs13146124 site in SLE patients were 0.13,0.87 respectively,compared with the control group,the difference was not statistically significant(χ2=0.071,P=0.790).There was no significant difference between the allele frequencies of A and G in IRF2 rs13146124 site in SLE and ANA,dsDNA and other specific antibodies.There was no correlation between the allele frequencies of A and G in IRF2 rs13146124 site in SLE and clinical features such as arthritis,kidney damage,etc.Conclusion The polymorphism of rs13146124 in IRF2 may not be associated with SLE in the population from Guizhou Province.

systemic lupus erythematosus;interferon regulatory factor;gene polymorphism

貴州省科技廳國際合作基金資助項目(黔科合外G字[2012]7046號)。作者簡介：崔曉麗(1991-)，在讀碩士，主要從事臨床檢驗診斷學研究。#：共同第一作者?！?/p>

R392.9;R593.24+1

A

1671-8348(2016)30-4230-03

2016-03-01

2016-06-14)