慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化和肝細胞癌患者T淋巴細胞亞群的表達差異

陳偉霞　楊麗麗　王磊　季光　邢練軍

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慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化和肝細胞癌患者T淋巴細胞亞群的表達差異

陳偉霞楊麗麗王磊季光邢練軍

目的探討HBV感染者生化指標、外周血T細胞亞群在不同病程中的變化及臨床意義。方法選取慢性乙型肝炎23例，肝炎后肝硬化21例，原發性肝癌35例，采用全自動生化、流式細胞分析，觀察生化指標，T淋巴細胞亞群的變化。結果ALT以慢性乙型肝炎組升高最顯著，和其他兩組相比差異有統計學意義(P<0.05)；谷氨酰轉肽酶(γ-GT)、ALP、LDH以原發性肝癌組升高最明顯，膽堿酯酶(CHE)以原發性肝癌組降低最明顯，和其他兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)；觀察3組外周血T淋巴細胞結果顯示，CD8+T細胞、CD8+CD28+T細胞在慢性乙型肝炎組中最高，CD4+CD25+T細胞在原發性肝癌組中最高。結論HBV感染者不同病程中生化指標、T細胞亞群表達存在顯著差異，可作為病情演變、療效及預后評判的可靠依據。

HBV；生化指標；T淋巴細胞亞群

乙型肝炎是乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的以肝臟炎癥和壞死病變為主的一種傳染病。據WHO報道，全世界約3.5億人感染HBV，其中有15%～40%的人因 HBV 感染逐漸發展形成肝硬化、肝衰竭、原發性肝細胞癌死亡[1-2]。慢性乙型肝炎形成的原因很復雜，人體感染HBV后，HBV并不直接對肝細胞造成損傷而與體內的免疫細胞相互作用。其中機體T細胞免疫應答是決定HBV感染臨床轉歸的主要因素，所以外周血T淋巴細胞亞群的特征能夠反映患者的免疫狀態[3-4]。本研究比較慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化和原發性肝癌患者主要生化指標及T淋巴細胞亞群的變化，從而探討HBV感染后不同的臨床轉歸與宿主細胞免疫功能的關系。

資料和方法

一、臨床資料

79例HBV感染者均來上海龍華醫院感染科2013年1月至2015年12月期間住院患者。其中，慢性乙型肝炎23例(慢乙肝組)，男15例、女8例，平均年齡47.4歲；肝炎肝硬化21例(肝硬化組)，男14例、女7例，平均年齡50.5歲；原發性肝癌35例(肝癌組)，男25例、女10例，平均年齡53.2歲，慢性乙型肝炎和肝炎肝硬化患者均符合西醫診斷標準，參照2015年中華醫學會肝病學分會、感染病學分會聯合修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[5]，原發性肝癌的診斷依據臨床、血清學和影像學檢查，并符合中國抗癌協會肝癌專業委員會制定的原發性肝癌的臨床診斷與分期標準。入選病例半年內未接受免疫調節及抗病毒治療。

二、方法

抽取各組患者靜脈血4 mL，分2管。1管為普通管，分離血清后應用全自動生化分析儀檢測生化指標；另1管用乙二胺四乙酸二鉀抗凝，采用美國BD公司生產的FACS Calibur流式細胞儀直接免疫熒光法檢測外周T淋巴細胞亞群百分比。

三、統計學方法

采用SPSS 18.0統計軟件，組間差異比較采用方差分析，P<0.05為差異有統計學意義。

結　　果

一、HBV感染者不同病程中生化指標分析

慢性乙型肝炎組、肝炎肝硬化組、原發性肝癌組患者ALT、AST、CHE差異具有統計學意義(P<0.05)，且以慢性乙型肝炎組升高最顯著，而原發性肝癌組和肝炎肝硬化組之間則變化不顯著，差異無統計學意義(P>0.05)；γ-GT、ALP、LDH以原發性肝癌組升高最明顯，CHE以原發性肝癌組降低最明顯(P<0.05)(表1)。

二、HBV感染者不同病程中T細胞亞群功能分析

慢性乙型肝炎組CD8+T細胞、CD8+CD28+T細胞百分比均高于肝炎肝硬化組和原發性肝癌組，差異均有統計學意義(P均<0.05)；原發性肝癌組患者CD4+CD25+T細胞百分比高于慢性乙型肝炎組，差異有統計學意義(P<0.05)；肝炎肝硬化組患者CD4+/CD8+高于慢性乙型肝炎組，差異有統計學意義(P<0.05)；慢性乙型肝炎組、肝炎肝硬化組、原發性肝癌組患者CD3+細胞、CD4+細胞、NK細胞及CD4+CD45RA+細胞百分數差別均無統計學意義(P均>0.05)(表2)。

表1　各組患者生化指標分析(U/L)

注：▲與慢乙肝組比較P<0.05，★與肝硬化組比較P<0.05

表2　各組患者T細胞亞群分析(±s，%)

注：▲與慢乙肝組比較P<0.05

討　　論

人類HBV感染是世界范圍的公共衛生問題。由于MHC多態性和易感性格局，以及其他關鍵基因的突變，中國有1.2億無癥狀攜帶者，在免疫低下的情況容易轉化為HBV慢性患者。HBV慢性感染可持續數十年，患者肝組織反復損傷，進行性進展為肝硬化和肝癌。

本研究中選擇慢性乙型肝炎患者、肝炎肝硬化患者及原發性肝癌患者為研究對象，進行外周血生化指標檢測。生化指標結果提示γ-GT、ALP、LDH以原發性肝癌組升高最明顯，CHE以肝癌組降低最明顯(P<0.05)。血清γ-GT主要來自肝臟，肝膽疾病時，γ-GT水平升高；ALP是需要經過肝臟由膽汁排出，排泄過程中出現異常，引起ALP偏高；當肝病病情進一步惡化時，肝細胞損傷加重，LDH含量有不同程度增高；CHE是一種催化?；憠A水解的酶，由肝細胞合成，主要反映肝臟的合成和儲備能力[6-7]。原發性肝癌組相比慢性乙型肝炎組和肝炎肝硬化組，肝臟損傷更為嚴重，肝臟的合成和儲備功能降低。因此γ-GT、ALP、LDH升高最明顯。

HBV慢性感染是一個極為復雜的過程，涉及HBV逃逸、免疫識別與攻擊等若干機制以及宿主發生免疫耐受的機制。HBV感染的結局直接與抗HBV適應性細胞免疫應答的類型和強度相關。慢性HBV感染患者病毒持續復制，肝組織經歷慢性損傷，容易發生纖維硬化和功能喪失，更傾向發生肝癌。由于每一個被感染宿主免疫應答差異以及HBV逃逸抗感染免疫策略的差異，并非每個慢性乙型肝炎患者發展為肝癌。本研究結果顯示，慢性乙型肝炎組CD8+T細胞、CD8+CD28+T細胞百分比均高于肝炎肝硬化組和原發性肝癌組(P均<0.05)。HBV 特異性T淋巴細胞免疫在病毒清除過程中起著重要作用，CD8+T細胞抑制病毒復制，決定是否能清除病毒的過程中起到關鍵作用。CD8+淋巴細胞上的 CD28+分子是參與乙型肝炎免疫應答的重要組成部分。有證據表明，說明機體參加免疫反應的免疫活性細胞已經發生改變。CD8+CD28+被認為是T細胞亞群中的CD8+CTL，CD8+CD28+T淋巴細胞增多，為T細胞清除病毒做準備[8-10]。 朱春蘭等[11]發現，在健康對照組，HBV攜帶組，CHB、肝硬化組中，外周血CD8+CD28+T細胞數目呈遞減趨勢，兩兩之間比較，差異均有統計學意義(P均<0.01)，與本研究結果一致。研究發現在肝炎肝硬化組和原發性肝癌組患者CD8+CD28+T細胞明顯降低，可能與HBV病毒持續存在、病情遷延不愈有關。CD8+T淋巴細胞表面CD28+分子的表達下降，會引起細胞毒性T細胞比例下降，而抑制性T細胞比例上升，導致病毒難以清除，病情逐漸進展。Franzese等通過四棱線蟲實驗分析發現，CD4+CD25+Treg能抑制乙型肝炎特異性CD8+T細胞介導的細胞免疫反應[12]。CD4+CD25+調節性T細胞(Treg)是近十年發現的T細胞亞群，具有抑制效應T細胞功能的作用[13]。本研究結果顯示，在CD4+CD25+T細胞在原發性肝癌組中最高(P<0.05)，提示原發性肝癌CD4+CD25+T細胞增多引起細胞免疫反應下降。

綜上所述，本研究全面分析了慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化、原發性肝癌等HBV感染的不同階段T細胞亞群的變化。研究結果顯示，不同類型慢性HBV感染者T細胞亞群存在差異，細胞免疫功能紊亂，不同類型患者應采用不同的免疫調節治療手段。

[1]Ma YJ， He M，Han JA， et al. A Clinical Study of HBsAg-Activated Dendritic Cells and Cytokine-Induced Killer Cells During the Treatment for Chronic Hepatitis B. Scandinavian Immunology，2013，78：387-393.

[2]Balmasova IP，Yashohuk ND, Mgnbaev OA, et al. Immunopatho-genesis of chronic hepatitis B. World J Gastroenterol，2014，20：14156-14171.

[3]Sakaki M，Hiroishi K，Baba T，et al. Intrahepatic status of regulatory T cells in autoimmune liver diseases and chronic viral hepatitis. Hepatol Res，2008，38：354-361

[4]李鴻賓，江曉萍，葉珺，等. 測定慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴細胞亞群的臨床意義. 安徽醫藥，2006, 10:588-589.

[5]中華醫學會肝病學分會、中華醫學會感染病學分會. 慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版). 肝臟，2015，20：915-932.

[6]李萍，史茜，王波，等. 多項生化指標在常見肝病診斷中的價值.國際檢驗醫學雜志，2013，34：3205-3207.

[7]彭健新. 8項生化指標在常見肝病中的診斷意義及相關分析. 中國當代醫藥，2011，18：77-78.

[8]王健，李朝品. HBV感染乙肝患者PBMC后對細胞免疫功能的影響. 中國人獸共患病雜志，1998，14：90-92.

[9]中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會、中華醫學會肝病學分會. 病毒性肝炎的診斷標準.中西醫結合肝病雜志，2001，11：56-60.

[10]姚光弼，王寶恩，崔振宇，等. 拉米夫定治療慢性乙型肝炎病人的長期療效. 中華肝臟病雜志，1999，7：80-83.

[11]朱春蘭，干迪郁，伍華東，等. 慢性乙型肝炎患者外周血 CD8+淋巴細胞上CD28抗原的表達. 放射免疫學雜志，2013，26：238-239.

[12]Franzese O， Kenndy PT, Gehring AJ, et al. Modulation of the CD8+T cell response by CD4+CD25+ regulatory cells in patients with hepatitis B virus infection. Viral，2005，79：3322-3328.

[13]Akbar SM，Furukawa S，Horiike N，et al. Safety and immunogenicity of hepatitis B surface antigen-pulse dendritic cells in patents with chronic hepatitis B. J Viral Hepat，2011，18：408-414.

(本文編輯：易玲)

國家自然科學基金項目(81302891)，上海市自然科學基金項目(14ZR1441600)

201203上海中醫藥大學附屬龍華醫院消化內科/脾胃病研究所

邢練軍，Email：xingdoctor@126.com

2016-03-08)