體外誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞定向分化為肝細胞的研究

薛改　韓華　陳澤紗　吳紅海　劉建芳　侯艷寧

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·論著·

體外誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞定向分化為肝細胞的研究

薛改韓華陳澤紗吳紅海劉建芳侯艷寧

目的對肝組織勻漿上清液(LHS)體外誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞(hUCMSC)定向分化為肝細胞的功能特性進行檢測。方法選取第3代hUCMSC，采用LHS作為誘導培養(yǎng)基，實驗分為對照組和LHS處理誘導組，每組有3、5、7 d 三個時間點；誘導后對細胞進行AFP、CK18、TPH2、CYP3A4、Alb、HGF的免疫熒光細胞化學染色；并測定誘導前后CYP3A酶活性、Alb、HGF和尿素的分泌量。結果LHS誘導3 d后細胞表達肝特異性蛋白AFP、CK18、TPH2、CYP3A4、Alb和HGF；對照組hUCMSC不同時間點CYP3A酶特異性代謝底物咪達唑侖的代謝量為0.026～0.030 ng/mg，LHS誘導3、5和7 d后細胞代謝量分別為(30.14±1.19)、(50.20±6.24)和(120.85±15.52) ng/mg，與對照組相比顯著升高(P<0.01)；對照組細胞3、5和7 d HGF的分泌量分別為(0.24±0.14)、(0.42±0.20)和(0.18±0.15) ng/mg，LHS誘導后細胞HGF的分泌量分別為(4.06±1.35)、(3.35±0.17)和(3.83±0.42) ng/mg，與對照組相比顯著升高(P<0.01)；LHS誘導后各組細胞尿素分泌量增加14倍以上，與對照組相比顯著升高(P<0.01)；對照組3、5和7 d Alb的分泌量分別為(22.66±2.99)、(16.99±2.90)和(15.37±1.86) μg/mg，誘導3、5和7 d后Alb的分泌量分別為(36.40±3.53)、(46.66±2.50)和(54.82±4.28) μg/mg，與對照組相比顯著升高(P<0.05或P<0.01)。結論在體外經(jīng)LHS誘導后，hUCMSC能夠分化為具有成熟肝細胞功能的肝細胞。

人臍帶間充質(zhì)干細胞；誘導分化；肝組織勻漿上清液；肝細胞

近年來，臍帶來源的間充質(zhì)干細胞(umbilical cord mesenchymal stem cells，UCMSC)以其顯著的優(yōu)點引起越來越多研究者的重視[1-2]。UCMSC可經(jīng)體外誘導分化為各種組織細胞，如神經(jīng)細胞，骨細胞，脂肪細胞，心肌細胞等[3]。研究發(fā)現(xiàn)，有關肝細胞發(fā)育的轉(zhuǎn)錄因子和肝祖細胞標志物在UCMSC中高表達，說明UCMSC在向肝細胞誘導方面更具有優(yōu)勢[4]。體內(nèi)實驗表明，UCMSC在治療肝臟疾病的同時在體內(nèi)可定向分化為肝樣細胞[5]，然而其機制還不十分清楚。體外研究顯示，UCMSC體外誘導可定向分化為肝樣細胞[6-8]。研究者們多采用各種細胞因子如：肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor，HGF)、成纖維細胞生長因子(fibroblast growth factor，F(xiàn)GF)、表皮生長因子(epidermal growth factor，EGF )和致瘤素M(oncostatin M，OSM)等來進行誘導。誘導后細胞的鑒定指標一般為肝細胞特異性標志物或功能蛋白，如AFP、CK18、CK19、Alb、TDO等。……