秦巴地區(qū)產(chǎn)杜仲皮急性毒性實驗的研究

曾吉祥，王健，張曉林，龔遠林

(達州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川 達州　635001)

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秦巴地區(qū)產(chǎn)杜仲皮急性毒性實驗的研究

曾吉祥，王健，張曉林，龔遠林

(達州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川 達州635001)

目的：比較秦巴地區(qū)產(chǎn)的杜仲水提組分和醇提組分對小鼠的急性毒性，為杜仲臨床應(yīng)用和杜仲產(chǎn)品開發(fā)提供基礎(chǔ)依據(jù)。方法：應(yīng)用經(jīng)典的急性毒性實驗方法測定杜仲水提組分的最大耐受量(MTD)和醇提組分的半數(shù)致死量(LD50),并且在整個急性毒性實驗過程中，觀察小鼠灌胃后的活動狀態(tài)以及體重變化。結(jié)果：杜仲水提組分的MTD為24 g/kg，杜仲醇提組分的LD50(95%的可信限)為54.51(49.72～59.77)g/kg，主要毒性癥狀有倦怠、俯臥不動、抽搐等。結(jié)論：秦巴地區(qū)產(chǎn)杜仲水提組分與醇提組分相比，其中醇提組分的急性毒性較大，水提組分較為安全。

秦巴地區(qū)；杜仲；急性毒性

杜仲為杜仲科的多年生落葉喬木，適宜生活在溫暖潮濕的氣候環(huán)境中，在我國四川、云南、貴州、陜西等地分布[1-3]。近年來，國內(nèi)外學(xué)者對杜仲的化學(xué)成分、生物學(xué)、藥理作用、保健品開發(fā)等領(lǐng)域的研究較多，但是在杜仲的急性毒性方面研究甚少，甚至因為對杜仲的毒性不了解，導(dǎo)致一系列的中毒狀況[4]。本文致力于對杜仲水提組分和醇提組分急性毒性的研究，為杜仲的臨床應(yīng)用和杜仲產(chǎn)品的開發(fā)提供相應(yīng)的理論基礎(chǔ)[5]。

1　實驗材料與方法

1.1實驗材料

杜仲皮采自四川達州，經(jīng)惠康藥業(yè)有限公司鑒定為藥用杜仲；乙醇等試劑均為分析純；昆明種小鼠，健康適齡，體重18～22 g，SPF級，購自第三軍醫(yī)大實驗動物中心。

1.2實驗方法

1.2.1杜仲不同組分的制備(1)杜仲水提組分的制備：取杜仲皮200 g，粉碎，用10倍量水浸泡，加熱回流提取3次，1.5 h/次，濾液減壓濃縮干燥后，即得杜仲皮水提浸膏。(2)杜仲醇提組分的制備 取杜仲皮200 g，粉碎，用70%乙醇煮沸回流提取3次，1.5 h/次，濾液減壓濃縮干燥后，即得杜仲皮醇提浸膏。

1.2.2急性毒性實驗(1)杜仲水提組分最大耐受量(MTD)的測定：根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果無法測得杜仲水提組分的小鼠灌胃半數(shù)致死量，因而進行最大耐受量的實驗。取20只小鼠，雌雄各半，隨機分成兩組，即空白對照組和水提組分藥物組。水提組分藥物組以8 g/kg的量溶解于4 mL的蒸餾水中灌胃，24 h灌胃3次，空白對照組灌胃等體積的蒸餾水。觀察小鼠給藥后的反應(yīng)，并與每日稱量體重，記錄下實驗數(shù)據(jù)，連續(xù)觀察7 d。(2)杜仲醇提組分半數(shù)致死量(LD50)的測定：預(yù)試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)一定給藥劑量下有小鼠死亡，因此杜仲醇提組分可測出小鼠的灌胃LD50，正式實驗醇提組分設(shè)置5個劑量組，其劑量分別為100 g/kg、50 g/kg、25 g/kg、12.5 g/kg、6.5 g/kg，各組稱取的杜仲皮浸膏用4 mL的蒸餾水制備成混懸液后給藥，取小鼠60只，隨機平分為6組，雌雄各半，實驗前禁食12 h，不禁水。5個實驗組，一個空白對照組，對照組灌胃等體積的蒸餾水，給藥后正常飼養(yǎng)。給藥后2 h內(nèi)，每15 min觀察1次；給藥2～4 h，每30 min觀察1次；4～8 h內(nèi)，每1 h觀察1次；8～24 h內(nèi)，每4 h觀察1次；給藥后第2天起，每天觀察1次。密切觀察小鼠精神、禁食、毛色、飲水以及死亡等可能出現(xiàn)的一切情況。

2　結(jié)果

2.1杜仲水提組分急性實驗結(jié)果

小鼠給藥30 min后開始出現(xiàn)怠動，活動較少，精神萎靡，且隨著時間的變化小鼠體重與空白組比較，呈增長趨勢(圖1)，無小鼠死亡。給藥后的第2天小鼠活動恢復(fù)正常。結(jié)果表明杜仲水提部分毒性較小，小鼠灌胃的最大耐受量為24 g/kg(相當于生藥量240 g/kg)。

2.2杜仲醇提組分急性毒性實驗結(jié)果

杜仲醇提浸膏灌胃小鼠后30 min開始出現(xiàn)死亡，死亡均發(fā)生在8 h內(nèi)，給劑量組的死亡率分別為：100%、70%、40%、10%、0%。灌胃后不同時間點的累計死亡數(shù)見表1，不同時間點的累計死亡率見圖1。在灌胃后5 min就開始出現(xiàn)怠動、俯臥不動、閉眼等異常行為，給藥后小鼠的急性中毒癥狀見表2，由表2可見個實驗組在不同時間范圍內(nèi)均有不同程度的不適癥狀出現(xiàn)。各組存活小鼠體重變化見圖2，不難發(fā)現(xiàn)小鼠體重隨著給藥劑量的增加成一定的正相關(guān)性。

LD50和95%可信區(qū)間的計算采用的是改良寇氏法[6-9]:

lgLD50=Xm-i(∑p-0.5)

= 2-0.155(1+0.7+0.4+0.1-0.5)

= 1.736

故LD50=54.51g/kg

=49.72-59.77g/kg

其中，i為組距，即相鄰兩組劑量對數(shù)劑量之差；Xm為最大給藥劑量對數(shù)值；p為各劑量組死亡率，用小數(shù)表示；n為實驗組數(shù)(不包括空白對照組)。

表1　杜仲醇提組分灌胃后小鼠不同時間點的累計死亡數(shù)

表2　杜仲醇提組分組小鼠急性毒性癥狀

組分倦怠發(fā)生率(%)發(fā)生時間抽搐發(fā)生率(%)發(fā)生時間俯臥不動發(fā)生率(%)發(fā)生時間100g/kg1001min～12h400.5～81005min～8h70g/kg901min～8h400.5～4805min～8h49g/kg801min～8h200.5～4805min～6h34.3g/kg801min～4h———705min～6h24g/kg601min～2h———705min～4h空白組—————————

3　討論

杜仲皮具有補肝腎、強筋骨、調(diào)血壓、防衰老、抗腫瘤等功效，特別是對高血壓具有獨特的療效。近年來，對杜仲的藥理作用研究尤為多，隨著杜仲各種各種的藥理活性問世，對杜仲保健品的開發(fā)也層出不窮。本文針對杜仲的急性毒性進行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)杜仲水提組分的MTD為24 g/kg(相當于生藥量240 g/kg)，根據(jù)中藥毒性的現(xiàn)代分級，屬于杜仲水提組分屬于無毒[10]。醇提組分的LD50(95%的可信限)為54.51(49.72～59.77)g/kg屬于小毒[11-13]。本文僅針對急性中毒劑量上進行了探討，中毒機理尚不清楚，需進行進一步的研究。

在實驗過程中發(fā)現(xiàn)不管是水提組還是醇提組，小鼠的體重與空白組比較均較重，且給藥劑量越大小鼠體重增長越明顯。可能原因在于給藥后小鼠精神活動處于萎靡，怠動狀態(tài)，導(dǎo)致小鼠活動減少從而體重增加。由實驗結(jié)果可知杜仲醇提組分的毒性明顯比水提組分大，在制備杜仲不同組分的浸膏時，盡量將溶劑揮發(fā)干凈，因此溶劑對實驗結(jié)果的影響較小。可能原因在于不同提取溶劑提取的成分差別。水提組分主要以多糖類、蛋白質(zhì)類、氨基酸類等的物質(zhì)為主[14-15]，而醇提組分則是以木脂素類、環(huán)烯醚萜類、苯丙素類物質(zhì)為主[16-17]。相較于水提組分，醇提組存在一定的毒性。

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(學(xué)術(shù)編輯：周春陽)

The acute toxicity about eucommia ulmoides oliver from the area of Qinling-Daba Mountains

ZENG Ji-xiang,WANG Jian,ZHANG Xiao-lin,GONG Yuan-lin

(DazhouVocationalandTechnicalCollege,Dazhou635001,Sichuan,China)

Objective：Compare the acute toxicity of different components of Eucommia Ulmoides Oliver in Qinba Manountain Chain and to provide experimental data for safe use in clinal．Methods：Different components of Eucommia Ulmoides Oliver were administrated to mice．The MTD of water extract and the LD50of alcohol extract of Eucommia Ulmoides Oliver,Eucommia Ulmoides Oliver were tested by the classical methods of acute toxicity and the active state and weight change of mice were observed during the acute toxicity test.Results：The MTD of water extract of Eucommia Ulmoides Oliver was 24 g·kg-1．The LD50 ( 95% confidence interval) of alcohol extract of Eucommia Ulmoides Oliver were 54.51(49.72～59.77)g/kg in mice．Mental fatigue，lassitude and convulsion were the main acute tixical symptoms．Conclusion：Comparing the different components in Eucommia Ulmoides Oliver of acute toxicity,the water extract is safer,and the alcohol extract has certain toxicity.

】Qinba mamountain chain;Eucommia ulmoides;Acute toxicity

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.03.015

四川省教育廳科研項目(14ZA0331、14ZB0383)

2015-09-08

曾吉祥(1972-)，男，講師。通訊作者：王健，E-mail: wj_yxx@163.com

時間：2016-6-1617∶46

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20160616.1746.030.html

1005-3697(2016)03-0342-03

R285.5

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