前列腺切除術后創面修復細胞來源的初步探討

丁華，羅光恒，孫兆林

(貴州醫科大學附屬人民醫院泌尿外科，貴州 貴陽　550002)

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前列腺切除術后創面修復細胞來源的初步探討

丁華，羅光恒，孫兆林

(貴州醫科大學附屬人民醫院泌尿外科，貴州 貴陽550002)

目的：探討前列腺術后前列腺部尿道創面修復的細胞來源。方法：12只成年雄性中華田園犬，隨機分為兩組。實驗組接受經膀胱前列腺切除術，對照組僅膀胱切開后縫合。于術后3 d、1周和2周處死動物留取前列腺部尿道標本，采用HE染色觀察前列腺部尿道病理學改變，免疫組化檢測CK34、PSA表達。結果：HE染色示術后1周散在新生上皮形成，術后2周時基本覆蓋創面。免疫組化顯示術后3 d前列腺部尿道創面未見CK34、PSA表達；術后1周創面出現新生散在、島狀分布的CK34陽性細胞，未見PSA陽性細胞；術后2周新生上皮覆蓋創面，CK34表達陽性，與正常尿道上皮相延續，但仍未見新生PSA陽性細胞。結論：創面下殘余前列腺組織是前列腺切除術后修復來源，基底層CK34陽性細胞是參與該修復的細胞來源，而PSA細胞未直接參與。

良性前列腺增生；再上皮化；基底細胞

良性前列腺增生(benign prostate hyperplasia，BPH)是中老年男性常見疾病之一，可導致膀胱頸出口梗阻進而影響膀胱、腎臟功能[1]。因此，約20%有癥狀的BPH患者最終需要接受外科手術治療[2]。然而，前列腺切除術后可能繼發尿道感染、膀胱頸瘢痕攣縮、尿道狹窄等[3]。尿道的再上皮化修復可封閉術后創面，該修復與這些并發癥密切相關。傳統觀念認為前列腺切除術后前列腺部尿道再上皮化是由創緣旁膀胱頸尿道上皮從創緣向創面中心增殖分化覆蓋創面完成，但Eduardo等[4]人認為前列腺部尿道上皮修復主要來源于殘余前列腺組織。

前列腺上皮組織中的基底細胞處于低分化狀態，增殖能力卓越，能自我更新[5]。CK34βE12(CK34)高分子細胞角蛋白，細胞骨架蛋白的一種，該蛋白在前列腺基底細胞中特異表達[6]。PSA在前列腺分泌上皮胞漿中特異表達。本研究旨在建立犬前列腺切除模型，進一步探討前列腺部尿道修復的細胞來源。

1　材料和方法

1.1實驗動物

成年雄性中華田園犬12只，購于遵義醫學院實驗動物場，年齡6～9歲，體重18～22 kg。

1.2模型建立

隨機分為實驗組和對照組。腹腔注射10%水合氯醛(0.3 mL/100 g)對犬進行麻醉，麻醉生效后仰臥位固定，常規消毒后行下腹部正中切口暴露膀胱。實驗組以英國佳樂電切鏡經膀胱插入，輸出功率電切160 W，電凝80 W下切除前列腺部尿道的所有尿道上皮和部分前列腺組織。對照組僅行膀胱切開后縫合關腹。

1.3取材與HE染色

分別于術后3 d、1周、2周處死動物。留取前列腺部尿道標本，多聚甲醛固定保存。組織經包埋和切片，制成石蠟切片。HE染色后，鏡下觀察。

1.4免疫組化

3%H2O2處理石蠟切片后，1%BSA封閉30 min，按說明書分別以1∶400、1∶200濃度滴加CK34、PSA一抗，濕盒內4 °C孵育過夜。PBS重復洗滌滴加二抗后室溫孵育。PBS再次洗滌。經DAB顯色、蘇木素染色后，滴 加 適 量 中 性 樹 膠 蓋 玻 片 封 固 。PBS代替一抗作為陰性對照。

2　結果

2.1對照組非手術區正常尿道上皮HE染色

如圖1A所示，正常尿道上皮由三種不同細胞組成的細胞區組成，從基底膜起可分為基底區、中間區、表層區，立方形單層小細胞組成基底區，中間區由不規則狀多邊形細胞組成，表層區由梭形細胞組成，它們彼此相互融合。

2.2實驗組前列腺創面的HE染色

如圖1B所示，術后3 d，手術創面見凝固壞死組織，無新生上皮細胞形成，大量炎癥細胞浸潤，近創面處細胞排列紊亂。術后1周，附著創面之上的凝固性壞死組織變薄，有島狀新生上皮細胞，炎癥壞死滲出仍較明顯(圖1C)。術后2周時，創面新生上皮細胞較前增厚，厚度不均，薄則2層，厚達8層。創面幾乎被尿道上皮覆蓋，厚度4～6層，缺乏極性，組織間輕度水腫，纖維母細胞增生明顯(圖1D)。

2.3實驗組術后前列腺部尿道上皮中CK34的表達

CK34為胞漿蛋白，胞漿染色呈棕黃色細胞為CK34陽性細胞。對照組正常前列腺部尿道上皮基底區可見線性連續著色細胞，基底細胞表達CK34胞質蛋白，染色呈棕黃色(圖2A)。實驗組，術后3天時，未見前列腺切除術后的尿道創面出現CK34陽性的細胞(圖2B)；術后1周見術后創面出現新生的CK34陽性的細胞，呈島狀分布(圖2C)；術后2周術后創面新生的CK34陽性的細胞呈線性排列，覆蓋整個創面，并且與周圍正常的尿道上皮相連續(圖2D)。

2.4實驗組術后前列腺部尿道上皮中PSA的表達

正常尿道上皮中PSA在前列腺腺泡、腺管的分泌細胞胞質中表達，而在前列腺基底細胞不表達，在尿道上皮中也不表達(圖3A所示)。在術后3天、1周、2周均未見新生上皮中PSA陽性表達(圖3B、3C、3D)。

3　討論

前列腺切除術為解除BPH所致尿道梗阻的常規治療手段。前列腺切除術術后創面的再上皮化是術后修復的關鍵步驟。因尿道上皮的缺失使得創面直接暴露于尿液刺激之下，增加外源性病原體入侵的機會。如果延遲愈合將導致創面纖維化加重，產生明顯瘢痕組織，造成術后尿道狹窄等并發癥。因此，對前列腺切除術后創面修復的細胞來源及其機制進行研究，并進一步尋找促進創面修復的最佳條件將有助于實現創面迅速而良好的愈合、降低術后并發癥，具有重要意義。

本研究HE染色結果提示：術后1周創面開始再上皮化修復，在創面壞死組織下可見創面下前列腺細胞增殖，炎性滲出明顯。到術后2周時，新生上皮增厚，創面覆蓋，再上皮化初步完成。可見，前列腺部尿道創面的修復是由來源于創面下殘余前列腺組織。但是參與該修復的前列腺細胞類型尚不明確。

前列腺上皮細胞包括基底細胞、一過性增幅細胞和終分化完全的神經內分泌細胞以及表面分泌上皮細胞[7]。多項研究證明基底細胞具有卓越的增殖能力，能自我更新[5]。故而前列腺基底細胞可能為前列腺術后再上皮化修復的細胞來源。分泌上皮細胞雖然屬終末分化細胞，但Evans等人研究中發現在雄激素作用下前列腺分泌細胞分裂增殖先于基底細胞，在長期雄激素阻滯時分泌細胞分裂增殖速度快于基底細胞，這些研究都提示分泌上皮細胞能自我更新并獨立于基底細胞[8-9]。此外有報道表明前列腺組織中存在具有分泌細胞表型、干細胞特性的細胞[10]。在動物體內實驗中，基底細胞和分泌細胞具有干細胞特性—細胞周期緩慢[11]。即它們都具有干細胞特性，對維持前列腺結構功能完整都至關重要。

因基底細胞特異表達CK34，不分泌PSA。而分泌上皮細胞分泌 PSA，但不表達CK34[12]，所以我們

采用免疫組化法檢測序貫觀察前列腺術后前列腺部尿道創面的再上皮化。結果顯示術后1周創面新生上皮CK34表達陽性，到術后2周時表達CK34的新生上皮覆蓋創面，與正常尿道上皮相延續，但整個觀察過程中未見PSA陽性細胞的參與。此結果提示再上皮化細胞來源于分泌上皮細胞的可能較小，但基底細胞很可能是該修復的主要來源細胞之一。

那么PSA陽性細胞雖然未直接參與該修復，但是否可能通過其物質分泌、細胞間相互作用來影響修復過程？本研究實驗結果是否可以外推到人體？又是什么原因導致創面在短時間內完成了創面覆蓋？這些問題將為我們提供下一步的研究方向。

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[3]吳振啟,劉敏,李慧峰,等.經尿道雙極等離子前列腺電切術后并發癥分析及防治[J].臨床泌尿外科雜志,2014(9):828-830.

[4]Pow-Sang M,Orihuela E,Motamedi M,etal.Healing response of the canine prostate to Nd:YAG laser radiation[J].Prostate,1996,28(5):287-294.

[5]Barclay WW,Axanova LS,Chen W,etal.Characterization of adult prostatic progenitor/stem cells exhibiting self-renewal and multilineage differentiation[J].Stem Cells,2008,26(3):600-610.

[6]Ono M,Kijima H,Seino H,etal.Expression of cytokeratin 34βE12 is a good indicator of tumor progression in esophageal squamous cell carcinoma[J].Biomedical Research,2012, 33(3):183-189.

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[12]Shi X,Gipp J,Dries M,etal.Prostate progenitor cells proliferate in response to castration[J].Stem Cell Research,2014,13(1):154-163.

(學術編輯：潘勇軍)

The research on the cell source involving in re-epithelialization of prostatic urethra after prostatectomy

DING Hua，LUO Guang-heng，SUN Zhao-lin

(DepartmentofUrology，GuizhouProvincialPeople'sHospitalAffiliatedtoGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550002,Guizhou,China)

Objective：To explore the cells involving in re-epithelialization of prostatic urethra after prostatectomy.Methods：Twelve male canines were randomly divided into two groups and underwent transvesical prostatectomy or sham operation respectively. Wounds were observed with HE and immunohistochemical staining at day 3, week 1 and 2. Results：At day 3, CK34 and PSA expression were negative. CK34 was detected in newly generated epithelium at week 1, but PSA was not.At week 2, germinated epithelium formed by CK34 positive cells covered the wound, extending to urothelium. However, there was no PSA positive cell in newly generated epithelium.Conclusion：CK34 positive cells involved in re-epithelialization of prostatic urethra after prostatectomy.PSA positive cells may not play a direct role in that process.

Benign prostate hyperplasia；Re-epithelialization；Basal cells

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.03.01

國家自然科學基金(81260119)；貴州省優秀青年科技基金[黔科合人才團隊(2015)20號]

2016-03-20

丁華(1989-)，男，碩士研究生。E-mail:390227748@qq.com通訊作者：孫兆林，E-mail:szl@5055.com

時間：2016-6-1617∶46

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20160616.1746.002.html

1005-3697(2016)03-0288-03

R69

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