MP1全自動(dòng)干式生化分析儀總膽汁酸檢測性能的評(píng)價(jià)

李亞麗，沃燕波，趙春燕

(1.甘肅省金昌市疾病預(yù)防控制中心　737100；2.寧波美康生物科技股份有限公司，浙江寧波 315100；3.寧波美康保生生物醫(yī)學(xué)工程有限公司，浙江寧波 315100)

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·臨床研究·

MP1全自動(dòng)干式生化分析儀總膽汁酸檢測性能的評(píng)價(jià)

李亞麗1，沃燕波2，趙春燕3

(1.甘肅省金昌市疾病預(yù)防控制中心737100；2.寧波美康生物科技股份有限公司，浙江寧波 315100；3.寧波美康保生生物醫(yī)學(xué)工程有限公司，浙江寧波 315100)

目的應(yīng)用EP10-A2文件對(duì)MP1全自動(dòng)干式生化分析儀總膽汁酸(TBA)檢測性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法按照美國國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)頒布的EP10-A2文件，按特定順序測定高、中、低濃度的TBA樣本，連續(xù)5 d，計(jì)算測定結(jié)果的偏差、總不精密度，對(duì)截距、斜率、非線性、攜帶污染和漂移進(jìn)行多元回歸分析。結(jié)果低、中、高濃度TBA樣本偏差分別為-0.2、-0.2和-0.3 mol/L；總不精密度分別為1.8%、1.3%和1.2%；截距、斜率、非線性、攜帶污染、漂移分別為-0.051、0.995、0.641、0.000和0.031，其t值分別為-0.255、-1.076、0.340、-1.785和0.642，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01)。結(jié)論MP1全自動(dòng)干式生化分析儀TBA檢測準(zhǔn)確度、精密度良好，線性良好，攜帶污染率較低，穩(wěn)定性好，能初步滿足臨床檢測的應(yīng)用要求。

總膽汁酸；EP 10-A2；評(píng)價(jià)

健康者肝臟合成的膽汁酸有膽酸、鵝脫氧膽酸和代謝中產(chǎn)生的脫氧膽酸，還有少量石膽酸和微量熊脫氧膽酸，合稱為總膽汁酸(TBA)。健康者的周圍血液中TBA含量極微，當(dāng)肝細(xì)胞受到損害或肝內(nèi)、外阻塞時(shí)，膽汁酸代謝就會(huì)出現(xiàn)異常，TBA就會(huì)升高[1-2]。因此，TBA測定是1項(xiàng)比較敏感和有效的肝功能檢測項(xiàng)目。目前在生化分析儀上主要采用循環(huán)酶法檢測樣本中的TBA水平[3]。近年來，基于微流控芯片的便攜式即時(shí)檢測(POCT)已經(jīng)成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)[4-5]。本文參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)頒布的《定量臨床檢驗(yàn)方法的初步評(píng)價(jià)：批準(zhǔn)指南EP10-A2》文件，對(duì)寧波美康保生生物醫(yī)學(xué)工程有限公司結(jié)合微流控芯片技術(shù)開發(fā)的MP1全自動(dòng)干式生化分析儀檢測TBA的偏差、總不精密度、截距、斜率、非線性、攜帶污染和漂移進(jìn)行分析，對(duì)其臨床適用性進(jìn)行了初步評(píng)估[6-7]。

1　材料與方法

1.1樣本分析樣本為購自Randox公司的定植質(zhì)控，低值樣本(批號(hào)：942UN)，靶值為26.7 mol/L；高值樣本(批號(hào)：680UE)，靶值為47.9 mol/L。將上述高、低值樣本以1∶1比例混合，得到中值樣本，靶值為 37.3 mol/L。

1.2樣本測定按照EP10-A2文件要求，每天按中、高、低、中、中、低、低、高、高、中的順序測定各濃度樣本，連續(xù)5 d。其中第1個(gè)中值作為測定起始用，不納入統(tǒng)計(jì)，其余9個(gè)數(shù)據(jù)若有1個(gè)不合格，則需棄掉該批數(shù)據(jù)重新進(jìn)行測定。

1.3繪圖及數(shù)據(jù)處理以質(zhì)控的靶值(X)作橫坐標(biāo)、實(shí)測值與靶值的差值(Y-X)作縱坐標(biāo)作偏倚圖；以質(zhì)控的靶值(X)作橫坐標(biāo)、實(shí)測值(Y)作縱坐標(biāo)作散點(diǎn)圖；觀察有無離群點(diǎn)及其線性情況。偏差允許范圍設(shè)定為靶值±5%，總不精密度的允許范圍設(shè)定為5%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用Microsoft Excel2003統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)算偏差、總不精密度，對(duì)截距、斜率、非線性、攜帶污染、漂移作回歸分析。其校正回歸值作t檢驗(yàn)，當(dāng)t>4.6或t<-4.6時(shí)，P<0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

2.1繪圖、目測觀察離群點(diǎn)和線性MP1全自動(dòng)干式生化分析儀TBA檢測結(jié)果的偏倚圖和散點(diǎn)圖見圖1、2，目測各濃度樣本測定結(jié)果無離群點(diǎn)，精密度良好，實(shí)測值與靶值間線性良好。

圖1　MP1全自動(dòng)干式生化分析儀TBA檢測實(shí)測值與靶值偏倚圖

圖2　MP1全自動(dòng)干式生化分析儀TBA檢測實(shí)測值與靶值散點(diǎn)圖

2.2數(shù)據(jù)分析依照EP10-A2文件所設(shè)計(jì)的數(shù)據(jù)處理表格進(jìn)行計(jì)算，得出最后統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

2.2.1偏差評(píng)估以各濃度5 d測定結(jié)果的均值與其相對(duì)應(yīng)的靶值之差計(jì)算偏差，試驗(yàn)結(jié)果顯示，TBA各濃度的偏差均未超過設(shè)定的±5%范圍，臨床均可接受。結(jié)果見表1。

2.2.2總不精密度分析按EP10-A2文件提供的方法，計(jì)算總不精密度。結(jié)果顯示TBA各濃度的總精密度均未超過允許不精密度，臨床均可接受。結(jié)果見表2。

2.2.3測定結(jié)果多重回歸分析對(duì)每天結(jié)果進(jìn)行回歸分析，計(jì)算每天TBA測定結(jié)果的截距、斜率、非線性、攜帶污染和漂移，結(jié)果見表3。結(jié)果顯示，MP1全自動(dòng)干式生化分析儀TBA檢測結(jié)果的截距、斜率、非線性、攜帶污染和漂移差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(-4.60.01)。

表1　　MP1全自動(dòng)干式生化分析儀TBA檢測結(jié)果偏差分析

表2　　MP1全自動(dòng)干式生化分析儀TBA檢測結(jié)果不精密度分析

表3　　MP1全自動(dòng)干式生化分析儀TBA檢測結(jié)果多元回歸分析

注：當(dāng)t>4.6或t<-4.6時(shí)，P<0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3　討　　論

膽汁酸是內(nèi)源性膽固醇在肝臟內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物，是膽汁中存在的一類膽烷酸的總稱，以鈉鹽或鉀鹽的形式存在，目前認(rèn)為血清TBA水平是唯一可同時(shí)反映肝臟分泌、肝臟合成與代謝以及肝細(xì)胞損傷三方面的血清學(xué)指標(biāo)[1-2]。臨床發(fā)現(xiàn)，TBA的測定與谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等生化檢查項(xiàng)目有同等的診斷效率，且體內(nèi)TBA在反映肝功能改變上早于其他生化指標(biāo)的變化，更具有特異性和靈敏性[8-9]。

目前檢測TBA的方法有氣相色譜、高效液相色譜、毛細(xì)管電泳(CE)和酶循環(huán)法[10]。不管是氣相或液相色譜法測定TBA都需要衍生和水解，較為繁瑣，不適合臨床檢測。而CE檢測大都采用紫外檢測，靈敏度較低。臨床使用的酶循環(huán)法普遍采用各種大型全自動(dòng)生化分析儀檢測，由于大型全自動(dòng)生化分析儀價(jià)格高，操作復(fù)雜，操作人員需要相關(guān)的專業(yè)知識(shí)和接受相應(yīng)的培訓(xùn)，并且其使用配套條件要求高，需配備穩(wěn)壓電源、純水機(jī)，占地面積大，維護(hù)費(fèi)用高，需要專業(yè)人員定期保養(yǎng)，因此基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)或家庭個(gè)人都沒有條件購買和使用。同時(shí)，大型醫(yī)院患者多，檢測手續(xù)繁瑣、流程長、等待時(shí)間長，這也給患者帶來了巨大的時(shí)間負(fù)擔(dān)。

POCT是1項(xiàng)新興的技術(shù)領(lǐng)域，主要特點(diǎn)是快速得出結(jié)果，操作簡便，容易使用和小型化。隨著診斷和輔助技術(shù)的進(jìn)步，以及人們對(duì)疾病的認(rèn)識(shí)及治療水平提高的要求，POCT逐漸受到關(guān)注[4-5]。微流控芯片技術(shù)是21世紀(jì)最為重要的前沿技術(shù)之一，它把生物和化學(xué)等領(lǐng)域中所涉及的樣品制備、反應(yīng)、分離、檢測及細(xì)胞培養(yǎng)、分選、裂解等基本操作單元集成到一塊幾十平方厘米(甚至更小)的芯片上，由微通道形成網(wǎng)絡(luò)，以可控流體貫穿整個(gè)系統(tǒng)，是用以取代常規(guī)生物或化學(xué)實(shí)驗(yàn)室的各種功能的1種技術(shù)[4-5]。微流控芯片系統(tǒng)微型化、集成化和自動(dòng)化的特點(diǎn)使得它很適合應(yīng)用于現(xiàn)場和個(gè)體分析[11]。寧波美康保生生物醫(yī)學(xué)工程有限公司開發(fā)的MP1全自動(dòng)干式生化分析儀，結(jié)合了微流控芯片技術(shù)，可使以往實(shí)驗(yàn)室繁復(fù)的全血定量、血細(xì)胞血清分離、血清稀釋等步驟在芯片上在線自動(dòng)化完成，具有自動(dòng)化程度高，靈敏度高，特異性好，標(biāo)本采集后無需經(jīng)過前處理、即時(shí)獲得檢驗(yàn)結(jié)果的特點(diǎn)。

筆者參照EP10-A2文件對(duì)該儀器TBA檢測性能進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)，偏差評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，低、中、高濃度的絕對(duì)偏差均在允許偏差范圍之內(nèi)，故其偏差可接受，并且多元回歸分析結(jié)果亦顯示其斜率、截距的t值均在-4.6～4.6之間，其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說明MP1全自動(dòng)干式生化分析儀TBA檢測的準(zhǔn)確度較好。對(duì)精密度分析結(jié)果顯示，低、中、高濃度的總不精密度均小于允許總不精密度，說明其精密度也符合臨床應(yīng)用要求。多元回歸分析結(jié)果顯示，攜帶污染、非線性的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明其線性能力良好，攜帶污染率低。因此，從評(píng)估結(jié)果可見MP1全自動(dòng)干式生化分析儀TBA檢測準(zhǔn)確度、精密度良好，線性良好，攜帶污染率較低，穩(wěn)定性好，能初步滿足TBA檢測的應(yīng)用要求。由于EP10-A2文件的評(píng)價(jià)方法建立于初步評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)之上，忽略了很多影響因素，因此該儀器TBA檢測的性能還有待于應(yīng)用CLSI的其他文件進(jìn)行進(jìn)一步評(píng)價(jià)[12-13]。

隨著“十一五”計(jì)劃針對(duì)三級(jí)及二級(jí)醫(yī)院基礎(chǔ)設(shè)備的購置與加強(qiáng)，目前中級(jí)以上醫(yī)院已具備良好的軟硬件設(shè)施，但是基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)特別是衛(wèi)生院、衛(wèi)生所等單位全自動(dòng)生化檢驗(yàn)儀器設(shè)施普遍不足，也沒有足夠數(shù)目的檢驗(yàn)專業(yè)人員。與傳統(tǒng)的全自動(dòng)生化分析儀TBA檢測比較，MP1全自動(dòng)干式生化分析儀定量測定TBA的方法不僅操作簡便，各項(xiàng)性能良好，并且由于測定所用的試劑盤片采用了真空冷凍干燥技術(shù)和微流控芯片技術(shù)，檢測試劑以凍干小球的形式存放于盤片中，攜帶方便，因此非常適用于在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)推廣使用。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.18.040

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1673-4130(2016)18-2608-03

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