登革病毒高度保守的HLA-A*1101限制性T細胞表位鑒定和體內免疫反應研究

陳新宇，段志良，江明華，賈慶軍，徐娟娟，陳柏坤，文金生，

（1.溫州醫科大學附屬第二醫院育英兒童醫院 檢驗科，浙江 溫州 325027；2.溫州醫科大學 基礎醫學院蟲媒病毒研究所，浙江 溫州 325035）

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登革病毒高度保守的HLA-A*1101限制性T細胞表位鑒定和體內免疫反應研究

陳新宇1，段志良1，江明華1，賈慶軍2，徐娟娟2，陳柏坤2，文金生1，2

（1.溫州醫科大學附屬第二醫院育英兒童醫院 檢驗科，浙江 溫州 325027；2.溫州醫科大學 基礎醫學院蟲媒病毒研究所，浙江 溫州 325035）

目的：鑒定登革病毒2型（DENV-2）HLA-A*1101限制性T細胞表位并探討其誘導的T細胞反應的特征。方法：基于DENV-2的氨基酸序列，采用T細胞表位預測軟件預測HLA-A*1101限制性候選T細胞表位；基于HLA-A*1101轉基因小鼠，采用ELISPOT實驗、ELISA實驗和CD8+T細胞（CTL）殺傷實驗研究候選表位的HLAA*1101限制性和所誘導的T細胞反應的特征。結果：在合成的14條候選表位中，9條肽（NS1161-170、NS1263-272、NS36-15、NS4b44-53、NS333-42、C58-67、E30-38、NS3576-584和NS4a72-80）免疫HLA-A*1101轉基因小鼠可誘導產生肽特異性分泌IFN-γ的T細胞。除了分泌IFN-γ，C58-67和NS3576-584特異性T細胞也可分泌TNF-α，而E30-38特異性T細胞更可同時分泌TNF-α和IL-6。DENV-2感染的HLA-A*1101轉基因小鼠體內也可檢測到針對NS4b44-53、NS333-42、C58-67、E30-38、NS3576-584和NS4a72-80的分泌IFN-γ的T細胞。采用上述6條肽的混合物免疫HLA-A*1101轉基因小鼠所誘導的效應細胞可顯著殺傷DENV-2感染的小鼠脾單核細胞。結論：本研究鑒定出了9條全新的DENV-2特異性HLA-A*1101限制性T細胞表位。

登革病毒；HLA-A*1101；表位/肽；轉基因小鼠

登革病毒（dengue virus，DENV）感染常引起自限性登革熱（dengue fever，DF），也可導致致死性登革出血熱（dengue hemorrhagic fever，DHF）/登革休克綜合癥（dengue shock syndrome，DSS）。每年約有3.9億人感染DENV，包括約1億DF患者，50萬DHF和（或）DSS，2萬死亡病例［1-2］。大量研究表明：DENV特異性CD8+T細胞（CTL）不但可保護機體抵抗DENV的攻擊、控制DENV感染和復制［3-5］，而且可預防DENV二次感染時抗體依賴增強效應（antibody dependent enhancement，ADE）的發生［6］?！?br>