2005—2014年CHINET流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌耐藥性監(jiān)測

孫 燕， 孔 菁， 張 泓， 王傳清， 王愛敏， 徐英春， 張小江， 卓 超， 蘇丹虹，胡云建， 艾效曼， 孫自鏞， 陳中舉， 謝 軼， 康 梅， 魏蓮花， 吳 玲， 單 斌，杜 艷， 俞云松0， 林 潔0， 徐元宏， 沈繼錄， 韓艷秋， 郭素芳， 楊 青， 賈 蓓，黃文祥， 倪語星， 孫景勇， 張朝霞， 季 萍， 褚云卓， 田素飛， 胡志東， 李 金，汪 復， 胡付品， 朱德妹

·論著·

2005—2014年CHINET流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌耐藥性監(jiān)測

孫 燕1， 孔 菁1， 張 泓1， 王傳清2， 王愛敏2， 徐英春3， 張小江3， 卓 超4， 蘇丹虹4，胡云建5， 艾效曼5， 孫自鏞6， 陳中舉6， 謝 軼7， 康 梅7， 魏蓮花8， 吳 玲8， 單 斌9，杜 艷9， 俞云松10， 林 潔10， 徐元宏11， 沈繼錄11， 韓艷秋12， 郭素芳12， 楊 青13， 賈 蓓14，黃文祥14， 倪語星15， 孫景勇15， 張朝霞16， 季 萍16， 褚云卓17， 田素飛17， 胡志東18， 李 金18，汪 復19， 胡付品19， 朱德妹19

目的 了解2005—2014年國內不同地區(qū)臨床分離流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌的耐藥性變遷。方法 收集17所綜合性醫(yī)院和2所兒童醫(yī)院臨床分離的7 983株流感嗜血桿菌和1 713株卡他莫拉菌，采用紙片擴散法或自動化儀器法按統一方案進行藥敏試驗，依照CLSI 2014版標準判斷結果。頭孢硝噻吩紙片法測定β內酰胺酶。結果 10年間，流感嗜血桿菌的檢出率呈上升趨勢：2005年為0.69%，2014年上升至1.57%；10年間，卡他莫拉菌的檢出率呈上升趨勢：2005年為0.03%，2014年上升至0.41%。7 983株流感嗜血桿菌對甲氧芐啶-磺胺甲唑耐藥率最高且上升趨勢最明顯，由2005年的44.4%上升至2014年的64.6%；對氨芐西林、氨芐西林-舒巴坦和阿奇霉素耐藥率呈上升趨勢，分別由2005年的20.6%、11.8%和2.2%上升至2014年的41.8%、24.8%和14.2%；對頭孢噻肟、環(huán)丙沙星和氯霉素耐藥率近年有下降趨勢；對阿莫西林-克拉維酸和頭孢呋辛耐藥率雖略有上升趨勢，但仍低于25%。兒童分離株對氨芐西林的耐藥率和產酶率（36.7%、 33.8%）均高于成人分離株（25.7%、22.5%），對環(huán)丙沙星的耐藥率（4.7%）低于成人分離株（15.8%），耐藥率差異均有統計學意義（P＜0.05）。β內酰胺酶總檢出率為29.9%。383株為β內酰胺酶陰性氨芐西林耐藥株（BLNAR）。1 713株卡他莫拉菌對第二和第三代頭孢菌素、阿莫西林-克拉維酸、左氧氟沙星和甲氧芐啶-磺胺甲唑均高度敏感（敏感率為80%～100%），耐藥率變化較小，但對阿奇霉素的耐藥率較高且呈上升趨勢，由2006年的41.2%增至2013年的57.8%。該菌產β內酰胺酶的檢出率為93.3%。結論 流感嗜血桿菌對頭孢菌素類、阿莫西林-克拉維酸、阿奇霉素、氯霉素及環(huán)丙沙星耐藥率較低，可作為臨床的首選用藥，而對甲氧芐啶-磺胺甲唑耐藥率已上升至60%左右，不適于臨床用藥。卡他莫拉菌對所測試藥物耐藥率變化較小。

流感嗜血桿菌； 卡他莫拉菌； β內酰胺酶； 耐藥性

流感嗜血桿菌是寄居于人類上呼吸道的條件致病菌，可引起成人和兒童社區(qū)獲得性肺炎、鼻竇炎和化膿性中耳炎等。卡他莫拉菌是僅次于肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌的第三位呼吸道感染病原體。這2種細菌對抗菌藥物的耐藥率及產β內酰胺酶率不斷上升的趨勢在臨床上受到越來越多的重視。現將2005—2014年CHINET流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌耐藥性監(jiān)測結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細菌來源 收集2005—2014年國內主要地區(qū)19所教學醫(yī)院臨床分離的流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌，剔除同一患者分離的重復菌株。

1.1.2 培養(yǎng)基和藥敏試驗用材料 培養(yǎng)基藥敏試驗用MH瓊脂，購于英國OXOID公司。流感嗜血桿菌藥敏試驗培養(yǎng)基和營養(yǎng)補充劑SR158購于英國OXOID公司。

1.1.3 抗菌藥物紙片 抗菌藥物紙片及測定β內酰胺酶的頭孢硝噻吩試劑購于美國BD公司或英國OXOID公司。

1.2 方法

參照CLSI 2014年推薦的藥敏試驗方法進行。

1.2.1 藥敏試驗 采用紙片擴散法（K-B法）或自動化儀器法。質控菌株為流感嗜血桿菌ATCC49247，藥敏試驗結果按CLSI 2014年版標準判斷［1］。

1.2.2 β內酰胺酶檢測 采用頭孢硝噻吩試驗定性檢測流感嗜血桿菌的β內酰胺酶。

1.2.3 結果統計分析 試驗結果數據用WHONET5.6軟件統計分析。

2 結果

2.1 細菌及其分布

參與本研究的19所醫(yī)院2005—2014年共收集到流感嗜血桿菌7 983株，卡他莫拉菌1 713株，在各醫(yī)院的分布見表1。10年間，流感嗜血桿菌的檢出率呈上升趨勢：2005年為0.69%，2014年上升至1.57%；10年間，卡他莫拉菌的檢出率呈上升趨勢：2005年為0.03%，2014年上升至0.41%，見表2。

表1 2005—2014年流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌在不同醫(yī)院的分布Table 1 Distribution of Haemophilus influenzae and Moraxella catarrhalis by hospital from 2005 to 2014

表2 流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌在所有臨床分離株中的檢出率Table 2 Prevalence of H. influenzae and M. catarrhalis among all clinical isolates

7 983株流感嗜血桿菌中，兒童（＜18歲）分離株5 277株，占66.1%，成人（≥18歲）分離株2 706株，占33.9%。兒童分離株中， 分離自3歲及以下兒童3 750株，占兒童分離株的71.1%；4～10歲958株， 占18.2%；11～18歲569株，占10.7%。分離自住院患者6 575株，占82.4%，分離自門急診患者1 408株，占17.6%。流感嗜血桿菌主要分離自呼吸道標本，占89.6%（7 153/ 7 983），其次為生殖道標本占5.5%（438/7 983）、膿液標本占0.7%（55/7 983）、血液標本占0.5%（38/ 7 983），其他標本占3.7%（299/7 983）。

1 713株卡他莫拉菌中，兒童（＜18歲）分離株1 173株，占68.5%，成人（≥18歲）分離株540株，占31.5%。兒童分離株中，分離自3歲及以下兒童941株，占兒童分離株的80.2%；4～10歲180株，占15.3%；11～18歲52株，占4.5%。分離自住院患者的菌株為1 561株，占91.1%，分離自門急診患者的菌株為152株，占8.9%。卡他莫拉菌主要分離自呼吸道標本，占93.8%（1 607/ 1 713），其次為血液占0.5%（9/1 713）、膿液占0.5% （8/1 713）和生殖道標本占0.2%（3/1 713），其他標本占5.0%（86/1 713）。

2.2 流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌β內酰胺酶檢測結果

7 983株流感嗜血桿菌中有6 399株做了β內酰胺酶的檢測，其中兒童株4 218株，成人株2 181株；兒童分離株和成人分離株β內酰胺酶檢測率分別為33.8%（1 425/4 218）和22.5%（490/ 2 181）；總檢出率29.9%（1 915/6 399）。對氨芐西林耐藥流感嗜血桿菌中，兒童分離株產酶率為83.4%（1 338/1 605），成人分離株為76.5% （378/494）。1 713株卡他莫拉菌中有1 289株做了β內酰胺酶檢測，β內酰胺酶檢出率為93.2% （1 202/1 289）；其中兒童株檢出率為94.6% （850/898），成人株為90.0%（352/391）。

2.3 流感嗜血桿菌對各種抗菌藥物的耐藥性變遷

7 983株流感嗜血桿菌對氨芐西林、氨芐西林-舒巴坦、甲氧芐啶-磺胺甲唑、阿莫西林-克拉維酸、頭孢呋辛及阿奇霉素耐藥率均呈上升趨勢，其中以氨芐西林和甲氧芐啶-磺胺甲唑上升最明顯，分別由2005年的20.6%和44.4%上升到2014年的41.8%和64.6%。對頭孢噻肟、環(huán)丙沙星和氯霉素耐藥率呈下降趨勢，見表3。

表3 2005—2014年流感嗜血桿菌對常用抗菌藥物的耐藥率和敏感率Table 3 Susceptibility of of Haemophilus influenzae to antimicrobial agents by year from 2005 to 2014 （%）

分離于兒童患者的流感嗜血桿菌對氨芐西林、氨芐西林-舒巴坦、頭孢呋辛和甲氧芐啶-磺胺甲唑耐藥率上升的趨勢比成人分離株明顯，尤以甲氧芐啶-磺胺甲唑最明顯，由2005年的39.3%增至2014年的67.8%；兒童分離株和成人分離株對頭孢噻肟、阿奇霉素和氯霉素耐藥率的變化較為平穩(wěn)，但兒童分離株對這3種藥物的耐藥率皆高于成人。成人分離株和兒童分離株對環(huán)丙沙星的耐藥率都呈下降趨勢，分別由2005年的30.9%和14.8%下降至2014年的15.3%和4.9%，見表4。

2.4 卡他莫拉菌對各種抗菌藥物的耐藥性和敏感性變遷

卡他莫拉菌除了對阿奇霉素耐藥率在30%～ 60%外，對其他抗菌藥物，包括第二、第三代頭孢菌素，阿莫西林-克拉維酸，左氧氟沙星和甲氧芐啶-磺胺甲唑耐藥率均較低且變化不大，見表5。

3 討論

本次監(jiān)測結果顯示，7 983株流感嗜血桿菌和1 713株卡他莫拉菌主要分離于呼吸道標本，分別占89.6%和93.8%；主要分離于≤3歲兒童群體，分別占71.1%和80.2%，提示這2種細菌均為3歲及以下兒童患者呼吸道感染的主要病原體，這與2010年CHINET細菌耐藥監(jiān)測結果相仿［2］。流感嗜血桿菌對甲氧芐啶-磺胺甲唑耐藥率由2005年的44.4%上升至2014年的64.6%；成人分離株和兒童分離株對氨芐西林耐藥率分別由2005年的23.0%和16.4%上升至2014年36.0%和45.3%；而對頭孢菌素類、阿莫西林-克拉維酸、阿奇霉素、氯霉素及環(huán)丙沙星耐藥率均低于30%，提示臨床上治療流感嗜血桿菌感染可以根據藥敏結果選用上述藥物，但應控制甲氧芐啶-磺胺甲唑和氨芐西林的使用。

表4 2005—2014年分離自兒童和成人的流感嗜血桿菌對常用抗菌藥物的敏感率和耐藥率Table 4 Susceptibility of Haemophilus influenzae isolates from children and adults by year from 2005 to 2014 （%）

氨芐西林曾是治療流感嗜血桿菌的首選藥物，隨著它在臨床上的廣泛使用，國內外各地區(qū)關于其耐藥率呈上升趨勢的報道也不斷增多。ZHU等［3］報道北京地區(qū)流感嗜血桿菌對氨芐西林敏感率由2000年的96%降至2012年的61%的同時，產β內酰胺酶率由4%上升至31%，與本組結果相仿。流感嗜血桿菌對氨芐西林耐藥的主要機制是產β內酰胺酶水解β內酰胺類抗生素，常見的β內酰胺酶有TEM-1和ROB-1型2種，其中90%以上為TEM-1型。而β內酰胺酶陰性氨芐西林耐藥菌株（ β-lactamase negative ampicillin-resistant， BLNAR）的耐藥機制主要是青霉素結合蛋白（PBP）的結構改變使與氨芐西林及其他β內酰胺類抗生素的親和力降低，不能被β內酰胺酶抑制劑所抑制。國外有報道顯示，BLNAR+β內酰胺酶陰性氨芐西林中介菌株（ β-lactamase negative ampicillin-intermediate，BLNAI）分離率由2000年的28.8%快速上升至2012年的63.5%［4］。本研究中，2005—2014年共7 983株流感嗜血桿菌中有383株為BLNAR，占4.8%，490株為BLNAI，占6.1%，BLNAR+BLNAI共占10.9%，提示BLNAR 和BLNAI分離率存在地區(qū)差異性。

表5 2005—2014年卡他莫拉菌對常用抗菌藥物的耐藥率和敏感率Table 5 Susceptibility of Moraxella catarrhalis to antimicrobial agents by year from 2005 to 2014 （%）

卡他莫拉菌對阿奇霉素耐藥率較高但變化較平穩(wěn)，在34.7%～57.8%；而對其他測試藥物耐藥率較低，提示臨床上治療卡他莫拉菌感染可將第二、第三代頭孢菌素，阿莫西林-克拉維酸，左氧氟沙星和甲氧芐啶-磺胺甲唑作為首選藥物。PINGAULT等［5］及SHEIKH等［6］研究顯示，卡他莫拉菌產β內酰胺酶率分別為97.7%和84%，本組資料產酶率為93.3%，提示卡他莫拉菌產β內酰胺酶存在明顯的地區(qū)差異性。卡他莫拉菌產生的β內酰胺酶被稱為BRO酶，是由染色體基因編碼合成的脂蛋白，可快速水解氨芐西林，導致氨芐西林耐藥率增高。BRO酶主要為 BRO-1型和BRO-2型。BRO基因陽性菌株不僅影響β內酰胺類還能影響大環(huán)內酯類抗生素的抗菌活性，但不同的基因型對不同的抗生素抗菌活性的影響不同［7-8］。此外，最新研究發(fā)現卡他莫拉菌感染好發(fā)于冬春季，且月感染率與月平均氣溫、月平均風速、日照時間均呈負相關［9］。卡他莫拉菌引起兒童患者呼吸道疾病的特點及耐藥率的變遷仍需進一步研究。

［1］Clinical and Laboratory Standards Institute．Performance standards for antimicrobial susceptibility testing［S］. Twentyfourth informational supplement， 2014 ， M100-S24.

［2］張泓，孔菁，王傳清，等. 2010中國CHINET流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌耐藥性監(jiān)測［J］.中國感染與化療雜志， 2012，12（3）： 180-184.

［3］ZHU H， WANG A， TONG J， et al. Nasopharyngeal carriage and antimicrobial susceptibility of Haemophilus influenzae among children younger than 5 years of age in Beijing， China ［J］.BMC Microbiol， 2015， 15（1）： 6.

［4］SHIRO H， SATO Y， TOYONAGA Y， et al. Nationwide survey of the development of drug resistance in the pediatric field in 2000-2001， 2004， 2007， 2010， and 2012： Evaluation of the changes in drug sensitivity of Haemophilus influenzae and patients' background factors ［J］. J Infect Chemother，2015， 21 （4）：247-256.

［5］PINGAULT NM， BOWMAN JM， LEHMANN D， et al. Antimicrobial susceptibility of Moraxella catarrhalis isolated from children in Kalgoorlie-Boulder， Western Australia ［J］. Pathology，2010，42（3）： 273-279.

［6］SHEIKH SO， FASIH N， IRFAN S， et al. β-Lactamase production and antimicrobial susceptibility pattern of Moraxella catarrhalis isolates： report from Pakistan ［J］. Asian Pac J Trop Med， 2014， 7S1：s228-s231.

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Antibiotic resistance profile of Haemophilus influenzae and Moraxella catarrhalis in hospitals across China：data from CHINET Antimicrobial Resistance Surveillance Program from 2005 through 2014

SUN Yan， KONG Jing， ZHANG Hong， WANG Chuanqing， WANG Aimin， XU Yingchun， ZHANG Xiaojiang， ZHUO Chao， SU Danhong， HU Yunjian， AI Xiaoman， SUN Ziyong， CHEN Zhongju， XIE Yi， KANG Mei， WEI Lianhua，WU Ling， SHAN Bin， DU Yan， YU Yunsong， LIN Jie， XU Yuanhong， SHEN Jilu， HAN Yanqiu， GUO Sufang，YANG Qing， JIA Bei， HUANG Wenxiang， NI Yuxing， SUN Jingyong， ZHANG Zhaoxia， JI Ping， CHU Yunzhuo，TIAN Sufei， HU Zhidong， LI Jin， WANG Fu， HU Fupin， ZHU Demei. （Children′s Hospital， Shanghai Jiaotong University， Shanghai 200040， China）

Objective To investigate the changing antibiotic resistance profile of Haemophilus influenzae and Moraxella catarrhalis strains collected from hospitals across China from 2005 through 2014. Methods A total of 7 983 strains of H. influenzae and 1 713 strains of M. catarrhalis were collected from 17 general hospitals and 2 children's hospitals. Antimicrobial susceptibility testing was carried out according to a unified protocol using Kirby-Bauer method or automated systems. Results were analyzed according to CLSI 2014 breakpoints. Beta-lactamases were detected by nitrocefin disk test. Results The prevalence of H. influenzae increased with time from 0.69% in 2005 to 1.57% in 2014. The prevalence of M. catarrrhalis increased with time from 0.03% in 2005 to 0.41% in 2014. Among the 7 983 clinical strains of H. influenzae， the the highest resistance rate was to trimethoprimsulfamethoxazole， which increased significantly from 44.4% in 2005 to 64.6% in 2014. The resistance rate to ampicillin， ampicillinsulbactam and azithromycin also increased from 20.6%， 11.8% and 2.2% in 2005 to 41.8%， 24.8% and 14.2% in 2014， respectively. However， the resistance rate to cefotaxime， ciprofloxacin and chloramphenicol decreased in recent years. The resistance rate of H. influenzae strains to amoxicillin-clavulanic acid and cefuroxime increased slightly but still lower than 25%. The resistance rate to ampicillin and the prevalence of β-lactamases in the H. influenzae strains from children （36.7%， 33.8%） were higher than in the strains from adults （25.7%， 22.5%）. The resistance rate to ciprofloxacin was 4.7% in the H. influenzae strains from children，significantly lower than that in the strains from adults （15.8%）. The overall prevalence of β-lactamases was 29.9% in the H. influenzae strains. A total of 383 H. influenzae strains were found resistant to ampicillin but β-lactamase negative. The 1 713 clinical strains of M. catarrhalis remained highly susceptible to the second and third generation cephalosporins， amoxicillin-clavulanic acid， levofloxacin and trimethoprim-sulfamethoxazole （80%-100% susceptible）. The resistance rate to azithromycin increased from 41.2% in 2006 to 57.8% in 2013. The prevalence of β-lactamases was 93.3% in these M. catarrhalis. Conclusions H. influenzae and M. catarrhalis are still susceptible to cephalosporins， amoxicillin-clavulanic acid， azithromycin， chloramphenicol and ciprofloxacin， which can be used as the first choice in clinical practice. Nearly 60% of these strains were resistant to trimethoprim-sulfamethoxazole， which is inappropriate for clinical therapy. The resistance profile of M. catarrhalis does not change much in the 10-year period.

Haemophilus influenzae； Moraxella catarrhalis； β-lactamase； antibiotic resistance

R378.41

A

1009-7708（2016）02-0153-07

10.16718/j.1009-7708.2016.02.007

2015-04-15

2015-11-12

1. 上海市兒童醫(yī)院，上海交通大學附屬兒童醫(yī)院，上海 200040；

2. 復旦大學附屬兒科醫(yī)院；

3. 北京協和醫(yī)院；

4. 廣州醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院；

5. 北京醫(yī)院；

6. 華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院；

7. 四川大學華西醫(yī)院；

8. 甘肅省人民醫(yī)院；

9. 昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院；

10. 浙江大學醫(yī)學院附屬邵逸夫醫(yī)院；

11. 安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院；

12. 內蒙古醫(yī)科大學附屬醫(yī)院；

13. 浙江大學附屬第一醫(yī)院；

14. 重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院；

15. 上海交通大學醫(yī)學院附屬瑞金醫(yī)院；

16. 新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院；

17. 中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院；

18. 天津醫(yī)科大學總醫(yī)院；

19. 復旦大學附屬華山醫(yī)院。

孫燕（1981—），女，本科，技師，主要從事細菌耐藥機制分子流行病學分析。

張泓，E-mail： zhanghong3010@126.com。