真菌性角膜炎流行病學、病原學分析和主要病原菌的快速檢測

王　敏, 劉　意, 馬　宇, 周利曉

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真菌性角膜炎流行病學、病原學分析和主要病原菌的快速檢測

王敏1, 劉意1, 馬宇2, 周利曉2

角膜炎/流行病學、病因?qū)W； 眼感染，真菌性/流行病學、病因?qū)W； 真菌； 細胞學技術(shù)； 細胞診斷學； 顯微鏡檢查，共焦

真菌性角膜炎于1878年首次由Leber報告，是一種常見的、較頑固的、可致盲的角膜真菌感染，可致角膜潰瘍，最終導致視力受損，嚴重者可引起失明。近年來，由于我國中原農(nóng)業(yè)經(jīng)濟地區(qū)產(chǎn)業(yè)的崛起，加上抗生素、皮質(zhì)類激素、免疫抑制劑的廣泛應(yīng)用，真菌性角膜發(fā)病率有逐年增加的趨勢，在有些地區(qū)已經(jīng)成為角膜感染的致病菌之首[1]。對于越來越多的真菌感染，治療真菌性角膜炎的有效藥物卻比較少，治療棘手。因此，掌握該病的病理學特點及流行規(guī)律，建立主要致病菌的鑒定技術(shù)，將有利于該病的早期診斷、治療，改善其預后?，F(xiàn)對198例臨床診斷患者進行病原學分析及細胞學檢查、真菌培養(yǎng)、角膜共焦顯微鏡檢查，通過流行病學分析及真菌培養(yǎng)，為真菌性角膜炎預防、治療提供依據(jù)。

1　臨床資料

1.1對象收集2008年1月-2012年12月在筆者醫(yī)院角膜病區(qū)住院的患者，排除細菌、病毒等其他微生物的感染，經(jīng)姬姆薩染色法顯微鏡下檢查菌絲、真菌培養(yǎng)或新型成像檢查法，三者中至少一項陽性確診為真菌性角膜炎患者共198例。

1.2方法

1.2.1流行病學調(diào)查內(nèi)容包括年齡、性別、職業(yè)、易感因素、初次診斷、藥物治療史及有無角膜接觸鏡史。

1.2.2直接涂片鏡檢查法1%鹽酸奧布卡因滴眼液(日本參天公司)點3次，5 min后置開瞼器，于裂隙燈下用消毒的針頭刮取病灶邊緣組織，均勻涂于已消毒的載玻片上，行姬姆薩染色，30 min后檢查菌絲和真菌孢子。

1.2.3真菌培養(yǎng)法取病灶組織置于馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基，置于25 ℃溫箱孵化培養(yǎng)，根據(jù)菌落的特征及鏡下的特點，將菌株進行初步鑒定，在培養(yǎng)2～4 d后，觀察真菌菌落的外觀特征，鏡下菌絲、孢子及菌細胞形態(tài)。

1.2.4新型成像檢查法1%鹽酸奧布卡因滴眼液點3次，5 min后置開瞼器，共焦顯微鏡40倍水浸式圓錐物鏡均勻涂上羧甲基纖維素，將鏡頭輕輕前移，使人工淚液與角膜病變區(qū)接觸，快速記錄角膜各層結(jié)構(gòu)，觀察其中的微生物形態(tài)，采用圖像分析軟件對每張圖像進行測量和分析。

1.3結(jié)果

1.3.1基本情況198例中，男性117例59.1%；女性81例(40.9%)。職業(yè)分布：農(nóng)民143例(72.2%)，工人21例(10.6%)，學生9例(4.6%)，其他25例(12.6%)(表1)。

表1　真菌性角膜炎患者的職業(yè)分布

表中數(shù)據(jù)為n(%).

1.3.2患者的易感因素分布植物性外傷66例(33.3%)，異物入眼21例(10.6%),利器傷16例(8.1%)，其他(眼部手術(shù)、化學農(nóng)藥損傷等)8例(4.0%),無明顯誘因87例(44.0%)。

1.3.3檢查方法比較在檢驗水準α=0.05/3=0.017下，新型成像檢查法與傳統(tǒng)檢查法(姬姆薩染色及真菌培養(yǎng)法)陽性結(jié)果差別有統(tǒng)計學意義，結(jié)合3種檢查方法的陽性率，可以認為新型成像檢查法陽性率高于傳統(tǒng)檢查法。同樣，在檢驗水準α=0.05/3=0.017下，姬姆薩染色與真菌培養(yǎng)法陽性結(jié)果差別無統(tǒng)計學意義，尚不能認為二者的陽性率不同(表2)。

表2　各種檢查方法比較

2　討　論

真菌性角膜炎是嚴重的致盲性眼病，嚴重危害人們的生活質(zhì)量[2]。本研究流行病學調(diào)查結(jié)果顯示，真菌性角膜炎發(fā)病主要見于男性，與國內(nèi)外報道基本一致[3-4]。72.2%的患者職業(yè)是農(nóng)民，大多數(shù)患者都有明確的誘因，其中主要是植物性外傷如樹枝、玉米葉、花生葉等。異物入眼所占的比例在本研究中也達到10.6%，這部分患者在異物入眼后都在眼科門診就診，并使用了抗生素和糖皮質(zhì)激素，這也表明亂用抗生素和糖皮質(zhì)激素也是導致真菌性角膜炎的誘因之一[5]。出現(xiàn)真菌性角膜炎的9位學生中，8位均表示長期佩戴眼鏡，甚至佩戴過夜，長時間沒有規(guī)范進行隱形眼鏡清洗、護理等，這說明隱形眼鏡佩戴不規(guī)范易導致真菌性角膜炎。

目前，研究表明真菌性角膜炎的病原真菌多達56屬105種[6]。我國感染性角膜炎中，超過半數(shù)的病例是由于真菌引起的，大部分地區(qū)是以鐮刀菌為主，其中主要是茄病鐮刀菌；其次是曲霉菌、青霉菌等[7]。

本研究結(jié)果顯示，在真菌性角膜炎中的3種病原學診斷中,角膜共焦顯微鏡檢查診斷率最高(84.3%)。該方法可以早期診斷，且只需要短時間就可以對角膜進行全層掃描，并且為無創(chuàng)性檢查，不需要直接接觸角膜病變區(qū)，不會對患者造成不必要的角膜損傷。

對于我國這樣的農(nóng)業(yè)大國，應(yīng)該加強農(nóng)民在農(nóng)業(yè)勞動中的保護意識，必要時候采取防護眼鏡。一旦發(fā)現(xiàn)感染性角膜炎應(yīng)該選用共焦顯微鏡檢查盡早診斷。對于基層醫(yī)院，應(yīng)該盡早篩查進行分流，使患者得到及時合理的處理，挽救視力。

[1]姜釗,趙桂秋,高昂,等.真菌性角膜炎的回顧性分析[J].中華臨床醫(yī)師雜志,2013,7(6)：2686-2688.

[2]王麗婭,楊子建,張月琴,等.河南地區(qū)真菌性角膜炎病因?qū)W及流行病學分析[J].中國實用眼科雜志,2011,24(3):331-333.

[3]穆紅梅,皮百木,李家臣,等.真菌性角膜炎的流行病學、臨床和微生物學特征分析[J].眼科新進展,2013,33(9):879-880.

[4]李慧,劉夢陽,鄭紅英,等.真菌性角膜炎的流行病學特征及病原學研究[J].山東醫(yī)藥,2012,52(43):26-28.

[5]賀丹.真菌性角膜炎的病原學分析及主要病原菌的快速檢測[D].長春：吉林大學,2012.

[6]賀丹,萬雪,高嵩,等.真菌性角膜炎的病原學分析及鑒定[J].中華微生物學和免疫學雜志,2014,34(1):19-22.

[7]鹿秀海,高彥,張莉,等.真菌性角膜炎334例的病原學分析[J].中華眼科雜志,2013,49(1)：12-15.

(編輯:張慧茹)

2015-12-13

1.鄭州鐵路職業(yè)技術(shù)學院 醫(yī)學技術(shù)系，鄭州450052；

2.鄭州大學 第五附屬醫(yī)院眼科，鄭州450052

王敏(1974-)女，實驗師

劉意.Email：824569815@qq.com

R322.91； R379； R771.2； R772.21

B

1672-4194(2016)02-0141-02