真菌性角膜炎流行病學(xué)、病原學(xué)分析和主要病原菌的快速檢測(cè)

王　敏, 劉　意, 馬　宇, 周利曉

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真菌性角膜炎流行病學(xué)、病原學(xué)分析和主要病原菌的快速檢測(cè)

王敏1, 劉意1, 馬宇2, 周利曉2

角膜炎/流行病學(xué)、病因?qū)W； 眼感染，真菌性/流行病學(xué)、病因?qū)W； 真菌； 細(xì)胞學(xué)技術(shù)； 細(xì)胞診斷學(xué)； 顯微鏡檢查，共焦

真菌性角膜炎于1878年首次由Leber報(bào)告，是一種常見的、較頑固的、可致盲的角膜真菌感染，可致角膜潰瘍，最終導(dǎo)致視力受損，嚴(yán)重者可引起失明。近年來(lái)，由于我國(guó)中原農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)地區(qū)產(chǎn)業(yè)的崛起，加上抗生素、皮質(zhì)類激素、免疫抑制劑的廣泛應(yīng)用，真菌性角膜發(fā)病率有逐年增加的趨勢(shì)，在有些地區(qū)已經(jīng)成為角膜感染的致病菌之首[1]。對(duì)于越來(lái)越多的真菌感染，治療真菌性角膜炎的有效藥物卻比較少，治療棘手。因此，掌握該病的病理學(xué)特點(diǎn)及流行規(guī)律，建立主要致病菌的鑒定技術(shù)，將有利于該病的早期診斷、治療，改善其預(yù)后。現(xiàn)對(duì)198例臨床診斷患者進(jìn)行病原學(xué)分析及細(xì)胞學(xué)檢查、真菌培養(yǎng)、角膜共焦顯微鏡檢查，通過(guò)流行病學(xué)分析及真菌培養(yǎng)，為真菌性角膜炎預(yù)防、治療提供依據(jù)。

1　臨床資料

1.1對(duì)象收集2008年1月-2012年12月在筆者醫(yī)院角膜病區(qū)住院的患者，排除細(xì)菌、病毒等其他微生物的感染，經(jīng)姬姆薩染色法顯微鏡下檢查菌絲、真菌培養(yǎng)或新型成像檢查法，三者中至少一項(xiàng)陽(yáng)性確診為真菌性角膜炎患者共198例。

1.2方法

1.2.1流行病學(xué)調(diào)查內(nèi)容包括年齡、性別、職業(yè)、易感因素、初次診斷、藥物治療史及有無(wú)角膜接觸鏡史。

1.2.2直接涂片鏡檢查法1%鹽酸奧布卡因滴眼液(日本參天公司)點(diǎn)3次，5 min后置開瞼器，于裂隙燈下用消毒的針頭刮取病灶邊緣組織，均勻涂于已消毒的載玻片上，行姬姆薩染色，30 min后檢查菌絲和真菌孢子。

1.2.3真菌培養(yǎng)法取病灶組織置于馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基，置于25 ℃溫箱孵化培養(yǎng)，根據(jù)菌落的特征及鏡下的特點(diǎn)，將菌株進(jìn)行初步鑒定，在培養(yǎng)2～4 d后，觀察真菌菌落的外觀特征，鏡下菌絲、孢子及菌細(xì)胞形態(tài)。

1.2.4新型成像檢查法1%鹽酸奧布卡因滴眼液點(diǎn)3次，5 min后置開瞼器，共焦顯微鏡40倍水浸式圓錐物鏡均勻涂上羧甲基纖維素，將鏡頭輕輕前移，使人工淚液與角膜病變區(qū)接觸，快速記錄角膜各層結(jié)構(gòu)，觀察其中的微生物形態(tài)，采用圖像分析軟件對(duì)每張圖像進(jìn)行測(cè)量和分析。

1.3結(jié)果

1.3.1基本情況198例中，男性117例59.1%；女性81例(40.9%)。職業(yè)分布：農(nóng)民143例(72.2%)，工人21例(10.6%)，學(xué)生9例(4.6%)，其他25例(12.6%)(表1)。

表1　真菌性角膜炎患者的職業(yè)分布

表中數(shù)據(jù)為n(%).

1.3.2患者的易感因素分布植物性外傷66例(33.3%)，異物入眼21例(10.6%),利器傷16例(8.1%)，其他(眼部手術(shù)、化學(xué)農(nóng)藥損傷等)8例(4.0%),無(wú)明顯誘因87例(44.0%)。

1.3.3檢查方法比較在檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05/3=0.017下，新型成像檢查法與傳統(tǒng)檢查法(姬姆薩染色及真菌培養(yǎng)法)陽(yáng)性結(jié)果差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)合3種檢查方法的陽(yáng)性率，可以認(rèn)為新型成像檢查法陽(yáng)性率高于傳統(tǒng)檢查法。同樣，在檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05/3=0.017下，姬姆薩染色與真菌培養(yǎng)法陽(yáng)性結(jié)果差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，尚不能認(rèn)為二者的陽(yáng)性率不同(表2)。

表2　各種檢查方法比較

2　討　論

真菌性角膜炎是嚴(yán)重的致盲性眼病，嚴(yán)重危害人們的生活質(zhì)量[2]。本研究流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，真菌性角膜炎發(fā)病主要見于男性，與國(guó)內(nèi)外報(bào)道基本一致[3-4]。72.2%的患者職業(yè)是農(nóng)民，大多數(shù)患者都有明確的誘因，其中主要是植物性外傷如樹枝、玉米葉、花生葉等。異物入眼所占的比例在本研究中也達(dá)到10.6%，這部分患者在異物入眼后都在眼科門診就診，并使用了抗生素和糖皮質(zhì)激素，這也表明亂用抗生素和糖皮質(zhì)激素也是導(dǎo)致真菌性角膜炎的誘因之一[5]。出現(xiàn)真菌性角膜炎的9位學(xué)生中，8位均表示長(zhǎng)期佩戴眼鏡，甚至佩戴過(guò)夜，長(zhǎng)時(shí)間沒有規(guī)范進(jìn)行隱形眼鏡清洗、護(hù)理等，這說(shuō)明隱形眼鏡佩戴不規(guī)范易導(dǎo)致真菌性角膜炎。

目前，研究表明真菌性角膜炎的病原真菌多達(dá)56屬105種[6]。我國(guó)感染性角膜炎中，超過(guò)半數(shù)的病例是由于真菌引起的，大部分地區(qū)是以鐮刀菌為主，其中主要是茄病鐮刀菌；其次是曲霉菌、青霉菌等[7]。

本研究結(jié)果顯示，在真菌性角膜炎中的3種病原學(xué)診斷中,角膜共焦顯微鏡檢查診斷率最高(84.3%)。該方法可以早期診斷，且只需要短時(shí)間就可以對(duì)角膜進(jìn)行全層掃描，并且為無(wú)創(chuàng)性檢查，不需要直接接觸角膜病變區(qū)，不會(huì)對(duì)患者造成不必要的角膜損傷。

對(duì)于我國(guó)這樣的農(nóng)業(yè)大國(guó)，應(yīng)該加強(qiáng)農(nóng)民在農(nóng)業(yè)勞動(dòng)中的保護(hù)意識(shí)，必要時(shí)候采取防護(hù)眼鏡。一旦發(fā)現(xiàn)感染性角膜炎應(yīng)該選用共焦顯微鏡檢查盡早診斷。對(duì)于基層醫(yī)院，應(yīng)該盡早篩查進(jìn)行分流，使患者得到及時(shí)合理的處理，挽救視力。

[1]姜釗,趙桂秋,高昂,等.真菌性角膜炎的回顧性分析[J].中華臨床醫(yī)師雜志,2013,7(6)：2686-2688.

[2]王麗婭,楊子建,張?jiān)虑?等.河南地區(qū)真菌性角膜炎病因?qū)W及流行病學(xué)分析[J].中國(guó)實(shí)用眼科雜志,2011,24(3):331-333.

[3]穆紅梅,皮百木,李家臣,等.真菌性角膜炎的流行病學(xué)、臨床和微生物學(xué)特征分析[J].眼科新進(jìn)展,2013,33(9):879-880.

[4]李慧,劉夢(mèng)陽(yáng),鄭紅英,等.真菌性角膜炎的流行病學(xué)特征及病原學(xué)研究[J].山東醫(yī)藥,2012,52(43):26-28.

[5]賀丹.真菌性角膜炎的病原學(xué)分析及主要病原菌的快速檢測(cè)[D].長(zhǎng)春：吉林大學(xué),2012.

[6]賀丹,萬(wàn)雪,高嵩,等.真菌性角膜炎的病原學(xué)分析及鑒定[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2014,34(1):19-22.

[7]鹿秀海,高彥,張莉,等.真菌性角膜炎334例的病原學(xué)分析[J].中華眼科雜志,2013,49(1)：12-15.

(編輯:張慧茹)

2015-12-13

1.鄭州鐵路職業(yè)技術(shù)學(xué)院 醫(yī)學(xué)技術(shù)系，鄭州450052；

2.鄭州大學(xué) 第五附屬醫(yī)院眼科，鄭州450052

王敏(1974-)女，實(shí)驗(yàn)師

劉意.Email：824569815@qq.com

R322.91； R379； R771.2； R772.21

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1672-4194(2016)02-0141-02