Yes相關(guān)蛋白通過Wnt/β?catenin信號(hào)通路調(diào)控軟骨細(xì)胞Sox9表達(dá)的研究

鮑遠(yuǎn)　黃俊明　吳穎星　陳琨　程鵬　郭風(fēng)勁　陳安民

·實(shí)驗(yàn)研究論著·

Yes相關(guān)蛋白通過Wnt/β?catenin信號(hào)通路調(diào)控軟骨細(xì)胞Sox9表達(dá)的研究

鮑遠(yuǎn)黃俊明吳穎星陳琨程鵬郭風(fēng)勁陳安民

目的研究Yes相關(guān)蛋白（Yes?associated protein，YAP）通過Wnt/β?catenin信號(hào)通路調(diào)控軟骨細(xì)胞Sox9表達(dá)的機(jī)制。方法用siRNA分別沉默YAP基因和Lats1基因來調(diào)控YAP的活性，通過Real?time PCR檢測(cè)軟骨特異性基因和Wnt/β?catenin信號(hào)通路下游基因的表達(dá)；通過Westernblot檢測(cè)GSK3β的磷酸化水平、活化β?catenin的蛋白水平以及Sox9的蛋白水平；并通過阿利新藍(lán)染色檢測(cè)軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的分泌情況。用siRNA沉默YAP基因后，再用氯化鋰干預(yù)細(xì)胞，通過Westernblot檢測(cè)Sox9的表達(dá)和GSK3β的磷酸化水平。結(jié)果沉默YAP基因后，磷酸化GSK3β和活化β?catenin的蛋白水平減少，c?Myc 和Nanog基因表達(dá)減少，Sox9、Col2和Aggrecan基因表達(dá)升高，并且軟骨細(xì)胞分泌基質(zhì)增多；沉默Lats1基因后，磷酸化GSK3β和活化β?catenin的蛋白水平增加，c?Myc和Nanog基因表達(dá)上調(diào)，Sox9、Col2和Aggre?can基因表達(dá)減少，并且軟骨細(xì)胞分泌基質(zhì)減少。此外，氯化鋰可以阻斷沉默YAP引起的Sox9表達(dá)上調(diào)。結(jié)論YAP通過Wnt/β?catenin信號(hào)通路調(diào)控軟骨細(xì)胞Sox9的表達(dá)。

軟骨細(xì)胞；細(xì)胞分化；Yes相關(guān)蛋白；信號(hào)傳導(dǎo)；基因表達(dá)調(diào)控

關(guān)節(jié)軟骨缺乏血管、神經(jīng)、淋巴管和軟骨前體細(xì)胞，再生修復(fù)能力十分有限［1，2］。創(chuàng)傷導(dǎo)致的關(guān)節(jié)軟骨缺損若長期存在，易進(jìn)展為骨性關(guān)節(jié)炎并引起關(guān)節(jié)疼痛和功能障礙。近年來，軟骨組織工程興起，為關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)帶來新的希望［3］。然而，研究發(fā)現(xiàn)軟骨細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)很容易發(fā)生去分化而成為肥大軟骨細(xì)胞，移植后由于失去分泌軟骨基質(zhì)的功能，無法形成正常的軟骨組織［4］?！?br>