邯鄲地區漢族人群酰基輔酶A:膽固醇酰基轉移酶1位點rs1044925基因多態性與冠心病患者血脂代謝的相關性研究

李 琴，王 倩，李玉玲，馮海斌，信栓力，劉吉祥，常 超，孟利民

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·論著·

邯鄲地區漢族人群酰基輔酶A:膽固醇酰基轉移酶1位點rs1044925基因多態性與冠心病患者血脂代謝的相關性研究

李 琴，王 倩，李玉玲，馮海斌，信栓力，劉吉祥，常 超，孟利民

056002河北省邯鄲市第一醫院

【摘要】目的探究酰基輔酶A：膽固醇酰基轉移酶1(ACAT-1)位點1044925基因多態性與冠心病患者血脂代謝的相關性。方法選取2015年邯鄲市第一醫院心內一科收治的冠心病住院患者396例作為冠心病組，另選擇同期冠狀動脈造影檢查正常者428例作為對照組。采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性分析法(PCR-RFLP)對兩組患者ACAT-1位點rs1044925基因多態性進行分析。比較兩組受試者體質指數(BMI)、血脂指標、ACAT-1位點rs1044925基因型及等位基因分布情況，分別比較兩組不同基因型受試者血脂指標。結果冠心病組患者BMI及血清三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、非高密度脂蛋白膽固醇(nHDL-C)、脂蛋白(a)水平均高于對照組，血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平低于對照組(P<0.05)；兩組受試者血清載脂蛋白A1(ApoA1)、載脂蛋白B(ApoB)水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。兩組受試者基因型和A、C等位基因分布情況比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。對照組不同基因型受試者血清TC、TG、LDL-C、nHDL-C、LDL-C、ApoA1、ApoB及脂蛋白(a)水平比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。冠心病組不同基因型患者血清TC、TG、nHDL-C、ApoA1、ApoB及脂蛋白(a)水平比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；AA基因型患者血清HDL-C水平低于AC/CC基因型患者，血清LDL-C水平高于AC/CC基因型患者(P<0.05)；采用協方差分析校正性別、年齡和BMI，結果顯示冠心病組AA基因型患者血清HDL-C水平低于AC/CC基因型患者，血清LDL-C水平高于AC/CC基因型患者(P<0.05)。結論邯鄲地區漢族人群ACAT-1位點rs1044925基因多態性與冠心病患者血清LDL-C和HDL-C水平有關，ACAT-1位點rs1044925基因多態性可能通過影響血脂代謝而參與冠心病的發生和發展。

【關鍵詞】冠心病；酰基輔酶A：膽固醇酰基轉移酶1；多態性,單核苷酸；血脂；邯鄲

李琴，王倩，李玉玲，等.邯鄲地區漢族人群酰基輔酶A:膽固醇酰基轉移酶1位點rs1044925基因多態性與冠心病患者血脂代謝的相關性研究[J].實用心腦肺血管病雜志，2016，24(7)：51-55.[www.syxnf.net]

LI Q，WANG Q，LI Y L，et al.Correlation between ACAT-1 rs1044925 gene polymorphism and blood lipid metabolism of patients with coronary heart disease in han population in Handan[J].Practical Journal of Cardiac Cerebral Pneumal and Vascular Disease，2016，24(7)：51-55.

酰基輔酶A：膽固醇酰基轉移酶(acyl-coenzyme A:cholesterol acyltransferase,ACAT)是目前發現的細胞內唯一的可催化游離膽固醇和長鏈脂酰輔酶A合成膽固醇酯的酶[1]。ACAT包括ACAT-1和ACAT-2兩種同工酶[2-3]。ACAT-1廣泛表達于人體各種組織和細胞內，其主要作用是維持細胞內外膽固醇平衡[3-4]。研究表明，ACAT與動脈粥樣硬化的發生發展密切相關[5]，ACAT-1位點rs1044925基因多態性可以影響血脂代謝，并與冠心病發生風險降低有關[6]。迄今為止，國內有關ACAT-1位點rs1044925基因多態性與冠心病相關性的研究僅見于廣西地區漢族人群，而關于北方漢族人群的研究尚未見報道。本研究旨在探討邯鄲地區漢族人群ACAT-1位點rs1044925基因多態性與冠心病患者血脂代謝的相關性，現報道如下。

1　對象與方法

1.1研究對象選取2015年邯鄲市第一醫院心內一科收治的冠心病患者396例作為冠心病組，均為漢族，經選擇性冠狀動脈造影確診為冠心病(其中1支及以上血管管徑狹窄率≥50%)，且均是初次診斷為冠心病。396例患者中男239例，女157例；平均年齡(61.4±7.3)歲。另選擇同期冠狀動脈造影檢查正常者428例作為對照組，其中男257例，女171例；平均年齡(61.0±8.2)歲。兩組患者性別(χ2=0.008)、年齡(t=0.737)比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。排除標準：先天性心臟病、心臟瓣膜疾病、腎臟疾病、嚴重高血壓、肝臟疾病、內分泌及代謝性疾病患者，入院時正在服用降脂藥物患者。所有患者對本研究知情同意。

1.2基因多態性檢測采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性分析法(PCR-RFLP)分析兩組患者ACAT-1位點rs1044925基因多態性，具體如下。

1.2.1DNA提取取空腹8～12 h后外周靜脈血2 ml，按照ERLICH等微量DNA全血提取法提取標本基因組DNA，置于-20 ℃保存備用[7]。

1.2.2聚合酶鏈反應(PCR)擴增參照文獻[8]合成引物：上游引物：5′-TAT ATT AAG GGG ATC AGA AGT-3′；下游引物：5′-CCA CCT AAA AAC ATA CTA CC-3′。PCR反應體系總體積為25 μl，含0.2 μmol/L引物、2.0 mmol/L氯化鎂(MgCl2)、200 μmol/L脫氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、0.2 μg脫氧核糖核酸(DNA)模板、2.0 U Taq DNA聚合酶，進行PCR擴增。

1.2.3PCR擴增產物的酶切鑒定取6 μl PCR擴增產物直接加入限制性內切酶RsaI進行酶切，酶切產物經瓊脂糖凝膠電泳后于紫外光下觀察、拍照并分型。

1.2.4ACAT-1位點rs1044925基因型的鑒定ACAT-1位點rs1044925基因多態性是指A/C多態性。C等位基因有限制性內切酶RsaI的酶切位點，而A等位基因無限制性內切酶RsaI的酶切位點，故當該位點為CC基因型時顯示279 bp和110 bp兩條帶；當該位點為AA基因型時顯示389 bp一條帶；當該位點為雜合子AC基因型時顯示389 bp、279 bp和110 bp 3條帶。ACAT-1位點rs1044925基因多態位點酶切電泳圖見圖1。

1.3血脂指標檢測方法抽取空腹8～12 h后外周靜脈血，在邯鄲市第一醫院檢驗科進行檢測。采用終點比色法檢測血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平，并計算非高密度脂蛋白膽固醇(nHDL-C)水平，nHDL-C=TC-HDL-C；采用免疫透射比濁法檢測載脂蛋白A1(ApoA1)、載脂蛋白B(ApoB)、脂蛋白(a)水平，試劑盒均購自南京匯標生物科技有限公司。

注：M為DNA分子量標準，1、3為AA基因型，2為CC基因型，4、5為AC基因型

圖1ACAT-1位點rs1044925電泳圖(PCR-RFLP)

Figure 1Electrophoretogram of ACAT-1 rs1044925 gene polymorphism

1.4觀察指標比較兩組受試者體質指數(BMI)、血脂指標、ACAT-1位點rs1044925基因型及等位基因分布情況，分別比較兩組不同基因型受試者血脂指標。

2　結果

2.1兩組受試者BMI及血脂指標比較冠心病組患者BMI及血清TG、TC、LDL-C、nHDL-C、脂蛋白(a)水平均高于對照組，血清HDL-C水平低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；兩組受試者血清ApoA1、

ApoB水平比較，差異無統計學意義(P>0.05，見表1)。

2.2兩組受試者基因型及等位基因分布情況比較邯鄲地區漢族人群ACAT-1位點 rs1044925基因型分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。兩組受試者基因型及等位基因分布情況比較，差異均無統計學意義(P>0.05，見表2)。

表2兩組患者基因型和等位基因分布情況比較〔n(%)〕

Table 2Comparison of genetype and allele distribution between the two groups

組別例數基因型AA AC CC等位基因A C對照組428311(72.7)100(23.4)17(3.9)722(84.3)134(15.7)冠心病組396291(73.6)96(24.2)9(2.2)678(85.6)114(14.4)χ2值1.9680.682P值0.3740.409

2.3不同基因型受試者血脂指標比較由于CC基因型攜帶者例數較少(對照組17例，冠心病組9例)，因此將AC基因型和CC基因型攜帶者合并為一組。對照組不同基因型受試者血清TC、TG、LDL-C、nHDL-C、LDL-C、ApoA1、ApoB及脂蛋白(a)水平比較，差異均無統計學意義(P>0.05，見表3)。冠心病組不同基因型患者血清TC、TG、nHDL-C、ApoA1、ApoB及脂蛋白(a)水平比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；冠心病組AA基因型患者血清HDL-C水平低于AC/CC基因型患者，血清LDL-C水平高于AC/CC基因型患者，差異有統計學意義(P<0.05，見表4)；采用協方差分析校正性別、年齡和BMI，結果顯示冠心病組AA基因型患者血清HDL-C水平低于AC/CC基因型患者〔(1.04±0.36)mmol/L比(0.92±0.22)mmol/L〕，血清LDL-C水平高于AC/CC基因型患者〔(4.25±0.43)mmol/L比(3.94±0.88)mmol/L〕，差異有統計學意義(t值分別為3.205、4.666，P<0.05)。

表1　兩組患者BMI及血脂指標比較±s)

注：BMI=體質指數，TC=總膽固醇，TG=三酰甘油，HDL-C=高密度脂蛋白膽固醇，LDL-C=低密度脂蛋白膽固醇，nHDL-C=非高密度脂蛋白膽固醇，ApoA1=載脂蛋白A1，ApoB=載脂蛋白B

表3　對照組不同基因型受試者血脂指標比較±s)

表4　冠心病組不同基因型患者血脂指標比較±s)

3　討論

冠心病即冠狀動脈粥樣硬化性心臟病,嚴重威脅人類健康。研究發現，冠心病是一種多基因遺傳病,即受多種基因-基因間和基因-環境間因素共同作用的影響。近年來,從基因水平闡釋冠心病的發病機制已成為研究熱點。臨床研究表明，高脂血癥是冠心病的重要危險因素之一，ACAT-1在調節機體血脂代謝平衡中起重要作用，且ACAT抑制劑可以調節血脂代謝[8],但ACAT-1位點rs1044925基因多態性與冠心病患者血脂代謝的關系尚不明確。

本研究對邯鄲地區824例漢族人ACAT-1位點rs1044925基因多態性進行分析，結果顯示，ACAT-1位點rs1044925基因型分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，說明該基因已達到遺傳平衡；且邯鄲地區漢族人中ACAT-1多態位點rs1044925 C等位基因頻率為0.157(對照組)，與中國北方漢族人群突變頻率(0.097)[9]、廣西壯族長壽子女突變頻率(0.117和0.127)[10]、廣西南丹漢族人群突變頻率(0.127)[11]、成都地區漢族健康人群和高脂血癥人群突變頻率(分別是0.137、0.153)相近[12]，但明顯低于廣西白褲瑤族(0.210)[11]及中部和南部歐洲人群(0.354)[13]。本研究結果顯示，冠心病組和對照組患者ACAT-1位點rs1044925 C等位基因出現頻率較低，且兩組間無差異，提示ACAT-1位點rs1044925 C等位基因對冠心病的影響較小。

本研究結果還顯示，對照組不同基因型受試者血清TC、TG、LDL-C、nHDL-C、LDL-C、ApoA1、ApoB及脂蛋白(a)水平間無差異，冠心病組不同基因型患者血清TC、TG、nHDL-C、ApoA1、ApoB及脂蛋白(a)水平間無差異，但冠心病組AA基因型患者血清HDL-C水平低于AC/CC基因型患者、血清LDL-C水平高于AC/CC基因型患者；且經協方差分析校正性別、年齡和BMI后顯示，冠心病組AA基因型患者血清HDL-C水平仍低于AC/CC基因型患者，血清LDL-C水平仍高于AC/CC基因型患者，提示邯鄲地區漢族人群ACAT-1位點rs1044925基因多態性對冠心病患者血清LDL-C和HDL-C水平有一定影響。臨床研究顯示，動脈粥樣硬化早期脂質條紋形成的病理機制主要是泡沫細胞在血管壁內聚積，而泡沫細胞內脂滴的主要成分是膽固醇酯，由ACAT-1催化而成。在肝臟和小腸細胞中,ACAT-1還參與了脂蛋白的裝配，而TG、膽固醇、膽固醇酯及磷脂又參與了脂蛋白之間的裝配,提示ACAT-1與血脂代謝關系密切，其在調節血脂平衡及轉化過程中具有重要作用。WU等[14]研究表明，ACAT-1位點rs1044925 C等位基因與冠心病及腦卒中發病風險降低有關。但ACAT-1基因多態性對動脈粥樣硬化的保護作用是否與直接或間接導致LDL水平下降、進而減少泡沫細胞形成、降低動脈粥樣硬化發生率有關，尚待今后進一步研究證實。

綜上所述，邯鄲地區漢族人群ACAT-1位點rs1044925基因多態性對冠心病患者血清LDL-C和HDL-C水平有一定影響，ACAT-1位點rs1044925基因多態性可能通過影響血脂代謝而參與冠心病的發生和發展。

作者貢獻：李琴進行實驗設計與實施、資料收集整理、撰寫論文、成文并對文章負責；王倩、李玉玲、馮海斌、信栓力、劉吉祥、孟利民進行實驗實施、評估、資料收集；常超進行質量控制及審校。

本文無利益沖突。

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(本文編輯：謝武英)

通信作者：常超，056002河北省邯鄲市第一醫院；E-mail：changchao9999@sina.com

【中圖分類號】R 541.4

【文獻標識碼】A

DOI:10.3969/j.issn.1008-5971.2016.07.014

(收稿日期：2016-02-25；修回日期：2016-06-24)

Correlation between ACAT-1 rs1044925 Gene Polymorphism and Blood Lipid Metabolism of Patients with Coronary Heart Disease in Han Population in Handan

LIQin，WANGQian，LIYu-ling，FENGHai-bin，XINShuan-li，LIUJi-xiang，CHANGChao，MENGLi-min.

TheFirstHospitalofHandan，Handan056002，ChinaCorrespondingauthor：CHANGChao，theFirstHospitalofHandan，Handan056002，China；E-mail：changchao9999@sina.com

【Abstract】ObjectiveTo investigate the correlation between ACAT-1 rs1044925 gene polymorphism and blood lipid metabolism of patients with coronary heart disease in Han population in Handan.MethodsIn 2015 in the First Department of Cardiology，the First Hospital of Handan，a total of 396 inpatients with coronary heart disease were selected as case group，a total of 428 subjects with normal coronary arteriography examination results were selected as control group.PCR-RFLP was used to analyze the gene polymorphism of ACAT-1 rs1044925.BMI，blood lipids index，gene types and allele distribution of ACAT-1 rs1044925 were compared between the two groups；blood lipids index was compared in patients and subjects with different gene types.ResultsBMI，serum levels of TG，TC，LDL-C，nHDL-C and lipoprotein(a)of case group were statistically significantly higher than those of control group，while serum HDL-C level of case group was statistically significantly lower than that of control group(P<0.05)；no statistically significant differences of serum level of ApoA1 or ApoB was found between the two groups(P>0.05).No statistically significant difference of gene type，A allele distribution or C allele distribution was found between the two groups(P>0.05).Of control group，no statistically significant differences of serum level of TC，TG，LDL-C，nHDL-C，LDL-C，ApoA1，ApoB or lipoprotein(a) was found in subjects with different gene types(P>0.05).Of case group，no statistically significant differences of level of TC，TG，nHDL-C，ApoA1，ApoB or lipoprotein(a) was found in patients with different gene types(P>0.05)；serum HDL-C level of patients with AA gene type was statistically significantly lower than that of patients with AC gene type or CC gene type，respectively，while serum LDL-C level of patients with AA gene type was statistically significantly higher than that of patients with AC gene type or CC gene type，respectively(P<0.05)；after correction of gender，age and BMI，covariance analysis results showed that，serum HDL-C level of patients with AA gene type was statistically significantly lower than that of patients with AC gene type or CC gene type，respectively，while serum LDL-C level of patients with AA gene type was statistically significantly higher than that of patients with AC gene type or CC gene type，respectively(P<0.05).ConclusionGene polymorphism of ACAT-1 rs1044925 is correlated with serum levels of LDL-C and HDL-C of patients with coronary heart disease in Han population in Handan，it may play an important role in the genesis and development of coronary heart disease through influencing the blood lipid metabolism.

【Key words】Coronary disease；Acyl-coenzyme A:cholesterol acyltransferase-1；Polymorphism，single nucleotide；Blood lipid；Handan