肝細(xì)胞肝癌患者外周血中T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的變化

李曉云　于曉輝　王維　戴飛　武承鳳　孫延榮

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肝細(xì)胞肝癌患者外周血中T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的變化

李曉云于曉輝王維戴飛武承鳳孫延榮

730050甘肅蘭州蘭州軍醫(yī)蘭州總醫(yī)院醫(yī)務(wù)部(李曉云，孫延榮)，消化科(于曉輝，王維，武承鳳)，統(tǒng)計(jì)室(戴飛)

【摘要】目的探討肝細(xì)胞肝癌(HCC)外周血中T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞含量的變化，進(jìn)一步了解HCC患者的免疫功能狀況。方法收集181例HCC患者作為試驗(yàn)組，其中小HCC 39例、中等HCC 64例、大HCC 46例、巨塊型HCC 32例；有肝硬化基礎(chǔ)的HCC 150例，其中乙型肝炎肝硬化96例、丙型肝炎肝硬化49例、酒精性肝硬化3例、自身免疫性肝硬化2例。無(wú)肝硬化基礎(chǔ)的HCC 31例，其中乙型肝炎病毒感染20例、丙型肝炎病毒感染8例、無(wú)原因的3例。對(duì)150例有肝硬化基礎(chǔ)的患者按Child-Pugh分成A、B、C三級(jí)，其中A級(jí)37例、B級(jí)47例、C級(jí)66例。選擇46名健康人群作為正常對(duì)照組。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩組患者血清中CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的含量。結(jié)果隨著HCC體積的增大，外周血中CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的含量明顯降低，而CD8+T細(xì)胞含量升高，與正常對(duì)照組比較，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；有肝硬化基礎(chǔ)的HCC患者，隨著Child-Pugh分級(jí)的增加， CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的含量也明顯降低，而CD8+T細(xì)胞含量升高，與正常對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論HCC患者的T細(xì)胞和NK細(xì)胞的變化不但與腫瘤大小相關(guān)，還與HCC的肝硬化背景及分級(jí)相關(guān)。HCC患者機(jī)體免疫狀況的變化，對(duì)判斷HCC患者的免疫功能、病情及預(yù)后具有重要的臨床意義。

【關(guān)鍵詞】肝細(xì)胞肝癌；CD3+T細(xì)胞；CD4+T細(xì)胞；CD8+T細(xì)胞；NK細(xì)胞

肝細(xì)胞肝癌(HCC)在我國(guó)是惡性腫瘤導(dǎo)致死亡的主要疾病之一。HCC多有病毒性肝炎背景，而病毒性肝炎患者多存在免疫功能紊亂等狀況，如T淋巴細(xì)胞亞群比例失調(diào)，容易并發(fā)嚴(yán)重的繼發(fā)感染，加重肝功能損害易導(dǎo)致病情惡化或死亡。本研究就針對(duì)181例HCC患者外周血中CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的含量進(jìn)行檢測(cè)，從而進(jìn)一步了解HCC的大小、肝硬化背景與患者機(jī)體免疫狀況的關(guān)系，對(duì)指導(dǎo)臨床治療、病情評(píng)估及預(yù)后具有重要參考價(jià)值。

資料和方法

一、一般資料

全部病例來(lái)源于2005年11月-2015年11月蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院消化科、肝膽外科及腫瘤科的住院患者，收集181例HCC患者作為試驗(yàn)組，其中小HCC 39例、中等HCC 64例、大HCC 46例、巨塊型HCC 32例。有肝硬化基礎(chǔ)的HCC 150例，其中乙型肝炎肝硬化96例、丙型肝炎肝硬化49例、酒精性肝硬化3例、自身免疫性肝硬化2例。無(wú)肝硬化基礎(chǔ)的31例，其中乙型肝炎病毒感染20例、丙型肝炎病毒感染8例、無(wú)原因的3例。對(duì)150例有肝硬化基礎(chǔ)的患者按Child-Pugh分成A、B、C三級(jí)，其中A級(jí)37例、B級(jí)47例、C級(jí)66例。試驗(yàn)組男101例，女39例，年齡25～79歲，平均年齡(50.0±7.5)歲。選擇46名健康人群作為正常對(duì)照組，男38例，女8例，年齡20～61歲，平均年齡(48.0±6.3)歲。所有患者均排除患有其他疾病，如糖尿病、腎病、硬皮病等；對(duì)照組系在消化科工作的醫(yī)護(hù)人員志愿者，均無(wú)心、肝、腎等重要臟器疾患，無(wú)肝炎、血吸蟲(chóng)病史。

二、儀器

FACS Cali bur 流式細(xì)胞儀為美國(guó)Becton- Kickin-son (BD) 公司生產(chǎn)，激發(fā)波長(zhǎng)188 nm。

三、試劑

鼠IgG1-FITC/Ig GPE (陰性對(duì)照)，CD4-FITC/CD8-PE，CD3-FLTC，pH7.2磷酸鹽緩沖溶液(PBS)，均為北京中衫金橋公司產(chǎn)品。

四、方法

所有患者均在晨起空腹抽取靜脈血5 mL 管，以EDTA-Na2(乙二胺四乙酸二鈉) 抗凝，利用 FACS Calibur流式細(xì)胞儀及 Cell Quest 軟件(均由 BD 公司提供)對(duì)血樣進(jìn)行測(cè)定和分析。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié)果

隨著HCC體積增大及Child-Pugh分級(jí)增加，外周血中CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的含量明顯降低，而CD8+T細(xì)胞含量升高，與正常對(duì)照組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。但小HCC和Child-Pugh A級(jí)患者外周淋巴細(xì)胞含量與正常對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1和表2。

討論

HCC占原發(fā)性肝癌的90%以上， 其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)居第6位，而死亡率高居第3 位[1]。我國(guó)HCC的發(fā)病人數(shù)約占全球的50%以上[2]。HCC起病隱匿、早期臨床癥狀不顯著，大部分HCC確診時(shí)已進(jìn)展至中晚期，已失去根治性手術(shù)治療時(shí)機(jī)，多選擇微創(chuàng)介入或保守性病灶切除聯(lián)合化療、放療等姑息性治療措施，以期能夠提高生存率，改善患者預(yù)后。在患者病程中有較多因素可影響預(yù)后，如肝臟原發(fā)病灶大小、肝功能Child-Pugh分級(jí)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及血管浸潤(rùn)，同時(shí)機(jī)體免疫狀況變化對(duì)HCC的療效和預(yù)后也有重要影響[3]。

正常情況下，機(jī)體的免疫監(jiān)控機(jī)制可消滅大多數(shù)異常的細(xì)胞。而HCC在生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)釋放多種細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子能夠減弱或阻斷機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫識(shí)別、清除，獲得免疫逃逸能力，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖，腫瘤細(xì)胞增殖進(jìn)而分泌更多的細(xì)胞因子影響機(jī)體免疫功能，通過(guò)多種手段調(diào)控機(jī)體的免疫應(yīng)答[4]。淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要組成成分，在免疫反應(yīng)過(guò)程中各司其職，維持正常的免疫功能，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中既有殺傷型免疫細(xì)胞，如NK 細(xì)胞、CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞能直接或通過(guò)分泌細(xì)胞因子殺傷腫瘤細(xì)胞，抑制腫瘤生長(zhǎng)；也有某些抑制型免疫細(xì)胞，如CD8+T細(xì)胞不但不能清除腫瘤細(xì)胞，反而在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中抑制其他效應(yīng)細(xì)胞的抗腫瘤作用[5]。研究表明HCC患者外周血中CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)量明顯減低，CD8+T細(xì)胞的數(shù)量卻顯著升高，經(jīng)射頻消融或手術(shù)治療后檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CD4+T細(xì)胞、NK細(xì)胞的數(shù)量較治療前有所增加，CD8+T細(xì)胞的數(shù)量減低，CD4+T/CD8+T也有升高[6]。同樣，臨床研究[7-11]顯示在肺癌、乳腺癌、卵巢癌患者外周血及胃腸腫瘤患者腹水中CD4+T細(xì)胞、NK細(xì)胞增加與病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)，CD8+T細(xì)胞減少也與病情相關(guān)，在治療過(guò)程中監(jiān)測(cè)可發(fā)現(xiàn)CD4+T細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)量逐漸升高，而CD8+T細(xì)胞數(shù)量減少。研究表明[12-13]，特異性阻斷CD8+T細(xì)胞表達(dá)可增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫能力，提示CD8+T細(xì)胞可作為腫瘤免疫治療的新靶點(diǎn)。

表1　HCC患者外周血CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果(±s)

注：*P<0.05，▲P>0.05 (*表示中等、大及巨塊HCC與正常對(duì)照組比較，▲表示小HCC與正常對(duì)照組比較)

表2　Child-Pugh分級(jí)的HCC患者外周血CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果(±s)

注：*P<0.05，▲P>0.05 (*表示Child-Pugh B、C級(jí)肝硬化與正常對(duì)照組比較，▲表示Child-Pugh A級(jí)肝硬化與正常對(duì)照組比較)

本研究顯示隨著HCC病灶的增大及Child-Pugh分級(jí)的增加，外周血中CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的含量明顯降低，而CD8+T細(xì)胞含量升高，與正常對(duì)照組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。但小HCC和Child-Pugh A級(jí)患者外周淋巴細(xì)胞含量與正常對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。HCC病灶越大腫瘤細(xì)胞數(shù)量更大，分泌更多的細(xì)胞因子影響機(jī)體免疫調(diào)控，使得CD4+T細(xì)胞和NK細(xì)胞數(shù)量減低，而CD8+T細(xì)胞含量升高，進(jìn)一步加劇了機(jī)體失調(diào)的免疫調(diào)控機(jī)制，加重免疫損傷，進(jìn)而可能促進(jìn)病情進(jìn)展。Child-Pugh分級(jí)B、C級(jí)患者肝功能差，機(jī)體免疫力低下，免疫功能紊亂表現(xiàn)更為顯著，CD4+T細(xì)胞、NK細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞數(shù)量發(fā)生改變，也能發(fā)揮免疫逃逸作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖。而通過(guò)調(diào)節(jié)免疫功能的輔助治療在一定程度上有助于減輕HCC患者肝臟免疫損傷，改善肝功能，進(jìn)而可能提高其治療有效率、生存率，改善預(yù)后等。因此除外目前手術(shù)、介入、化療及放療等治療方法，免疫治療也是一種重要的輔助治療手段。

綜上所述，HCC的發(fā)生、發(fā)展、治療及預(yù)后均與機(jī)體免疫調(diào)控密切相關(guān)，消除HCC患者體內(nèi)抑制性T細(xì)胞如CD8+T細(xì)胞在腫瘤患者的異常增殖，消除其抗腫瘤免疫作用將成為免疫治療領(lǐng)域的重要研究方向，免疫治療的重要性不可忽視，因此需要開(kāi)展進(jìn)一步實(shí)踐與研究，以期獲得更為確切及規(guī)范的治療，為 HCC患者生存及預(yù)后提供更多保障。

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(本文編輯：賴榮陶)

通信作者：于曉輝，Email: yuxiaohui528@126.com

(收稿日期：2014-12-10)

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