Coapresta2000全自動凝血分析儀檢測CRP的可行性探索

解學龍，陳昌花

(1.四川省宜賓市第二人民醫院檢驗科　644000；2.西南醫科大學，四川瀘州 646000)

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·論著·

Coapresta2000全自動凝血分析儀檢測CRP的可行性探索

解學龍1，陳昌花2

(1.四川省宜賓市第二人民醫院檢驗科644000；2.西南醫科大學，四川瀘州 646000)

摘要:目的探索Coapresta2000全自動凝血分析儀檢測C反應蛋白(CRP)的可行性。方法測定Coapresta2000全自動凝血分析儀檢測血漿CRP時的準確度、線性、精密度、攜帶污染率及兩儀器(Ottoman全自動特定蛋白即時檢測分析儀與Coapresta2000全自動凝血分析儀)的相關性。結果Coapresta2000全自動凝血分析儀檢測血漿CRP時的3個批號試劑平均回收率為106.0%，準確度良好；批內精密度小于10%，日間精密度小于15%；攜帶污染率0.32%；Ottoman全自動特定蛋白即時檢測分析儀與Coapresta2000全自動凝血分析儀測定血漿CRP結果相關方程為Y=0.001 2X+0.489，相關指數r2=0.997 5，差異無統計學意義(P<0.01)，兩儀器測定血漿標本CRP結果高度相關；Coapresta2000全自動凝血分析儀檢測血漿CRP時的線性為0～200 mg/L。結論Coapresta2000全自動凝血分析儀檢測血漿CRP時批內精密度較好，攜帶污染率低，與Ottoman全自動特定蛋白即時檢測分析儀高度相關，有進一步研究價值。

關鍵詞:C反應蛋白;準確性;相關性;精密度;攜帶污染率

C反應蛋白(CRP)的檢測方法有膠乳凝聚試驗、金標法、化學發光、免疫比濁等，Coapresta2000自動凝血分析儀可以進行乳液比濁法等項目處理，為探索其檢測CRP的可行性，本文對Coapresta2000全自動凝血分析儀檢測CRP時的準確度、精密度、攜帶污染率及與Ottoman全自動特定蛋白即時檢測分析儀的相關性進行評價分析，現將結果報道如下。

1材料與方法

1.1試驗儀器日本積水Coapresta2000全自動凝血分析儀、上海奧普Ottoman全自動特定蛋白即時檢測分析儀。

1.2試驗試劑上海奧普生物醫藥有限公司提供的全程CRP定量檢測試劑，包括試劑Ⅰ(0.05 mol/L，pH7.2磷酸緩沖鹽溶液，表面活性劑)、試劑Ⅱ(CRP抗體包被的膠乳顆粒)、配套質控血漿及校準品。

1.3試驗標本宜賓市第二人民醫院臨床患者乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝血漿，上海奧普生物醫藥有限公司提供的全程CRP定量試劑校準品。

1.4試驗原理CRP抗體共價結合在聚苯乙烯膠乳微球表面，人體標本抗體中的CRP與結合在聚苯乙烯微球上的CRP抗體相遇后，形成抗原抗體復合物，在特定的緩沖體系中形成濁度。這些免疫復合物會使反應液產生混濁，使得透光度減少，吸光度增加，其濁度高低反映了血清(血漿)標本中的CRP濃度，通過已知濃度的校準品比較可以得到測定的結果。

1.5試驗方法

1.5.1準確度按EP5-A2文件[1]:取健康人EDTA-K2抗凝混合血漿分4份，在其中3份中按比例為1∶1分別加入濃度為10、50、200 mg/L CRP標準品，制成3個不同濃度的回收標本，另一份血漿為基礎標本，采用上海奧普的CRP試劑在Coapresta2000上對基礎標本進行2次重復測定，取其均值計算回收樣品的CRP濃度，測定并根據公式“回收率=[新樣品測定值-原樣品測定值]/已知加樣品濃度×100%”計算回收率，評估準確度。

1.5.2不精密度按照EP5-A2文件[1]方法：取2.5、50.0、200.0 mg/L的標準品，每天做2次測試，測試間隔時間不少于4 h，每次對同一樣品測試2次，共做20 d。從中計算出精密度。

1.5.3線性范圍參考EP6-A文件[2]評估線性范圍：取濃度為0、5.0、10.0、25.0、50.0、100.0、200.0 mg/L標準液各1份，每個濃度標準液做4次重復測定，對試驗數據進行統計處理，評估其線性。

1.5.4Ottoman全自動特定蛋白即時檢測分析儀與Coapresta2000全自動凝血分析儀測定CRP的比對：隨機取68份EDTA抗凝血血漿，分別于兩儀器測得標本CRP值，做相關回歸分析。

1.5.5攜帶污染率取高值和低值血清各1份，先測3次高值(H1、H2、H3),再測3次低值(L1、L2、L3)，根據公式計算攜帶污染率。

1.6統計學處理采用SPSS19.0進行統計學分析，相關性采用相關分析，兩組數據相關分析差異檢驗采用t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1上海奧普全程CRP試劑在日本積水Coapresta 2000血凝儀上評估。

2.1.1準確度3個不同濃度EDTA-K2抗凝混合血漿分析測試2次，平均回收率為 104.5%、105.8%、107.8%，3個批號總平均回收率水平為 106.0%。準確度良好。

2.1.2不精密度批內精密度檢測結果見表1。日間精密度檢測結果見表2。

表1　Coapresta2000全自動凝血分析儀檢測血漿CRP批內精密度結果

表2　Coapresta2000全自動凝血分析儀檢測血漿CRP日間精密度結果

2.2線性范圍線性范圍 0～200 mg/L，線性回歸方程：Y=3.56+2.84X-0.015X2+0.000 026X3。

2.3與參比儀器檢測CRP的比對結果Ottoman全自動特定蛋白即時檢測分析儀的CRP檢測結果為(35.71±3.97)mg/L，Coapresta2000全自動凝血分析儀的CRP檢測結果為(35.03±3.92)mg/L，對兩儀器測得的結果進行相關分析。結果表明，相關方程為Y=0.001 2X+0.489，相關指數r2=0.997 5，差異無統計學意義(P<0.01)，Ottoman全自動特定蛋白即時檢測分析儀與Coapresta2000全自動凝血分析儀測定血漿標本CRP結果高度相關。

2.4攜帶污染率Coapresta2000全自動凝血分析儀檢測CRP攜帶污染率為0.32%。見表3。

表3　Coapresta2000全自動凝血分析儀檢測CRP攜帶污染率結果(mg/L)

3討論

CRP是一種急性時相反應蛋白，其在健康人體內水平甚微，當人處于創傷、心肌梗死、炎癥、感染、外科手術、癌腫浸潤等狀態時，CRP濃度迅速上升，病變消退后又迅速下降致正常。其在鑒別細菌與病毒感染、病情監測、術后感染監控、抗菌藥物療效觀察等時起重要作用，并在預測心血管疾病時起到一定作用[3]。早期，由于操作繁瑣、靈敏度低、未能定量等方法學的局限性，CRP在臨床中一直未能得到足夠的重視和應用，大部分感染性疾病、組織損傷的診斷、療效觀察依賴于傳統的白細胞計數與分類及紅細胞沉降率等檢查項目。直到80年代，隨著試驗方法和儀器的進步，急性時相反應蛋白尤其是CRP與急性感染、組織損傷等之間的關系越來越受到臨床醫師的重視[4-7]。CRP上升速度、幅度，持續時間與病情及組織損傷密切相關，且不受放療、化療、皮質激素等治療手段的影響[8-9]，再加上其檢測結果的定量化、簡便化、微量化、快速化，使CRP在臨床應用中的價值遠遠超過了傳統的檢查項目[10]。目前常用于CRP測定的方法有酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、免疫比濁法、金標法等[8-9]。免疫比濁法具有試劑穩定、標本用量少、準確度精密度高、操作簡便快捷、可自動化、易推廣等優點，此種方法在臨床應用中越來越廣泛[11-14]。

本文研究的儀器為Coapresta2000全自動凝血分析儀，該儀器由日本積水醫療株式會社生產，具有處理標本速度快、可隨機追加標本、有急診位置、可長期存儲檢測數據、可閱讀二維碼等優點，更重要的是，Coapresta2000全自動凝血分析儀有乳膠比濁的檢測方法，并由此想到了其檢測CRP的可行性。宜賓市第二人民醫院檢驗科現有的CRP檢測儀器為Ottoman全自動特定蛋白即時檢測分析儀，其使用的試劑為上海奧普生物醫藥有限公司提供的全程CRP定量檢測試劑盒，檢測方法為免疫增強透射比濁法，故利用該試劑盒及其配套校準品調試、定標Coapresta2000全自動凝血分析儀后，進行一系列儀器性能評價試驗。

本次試驗數據顯示，Coapresta2000全自動凝血分析儀在檢測血漿CRP濃度時，其批內精密度小于10%，日間精密度小于15%；其測定血漿CRP時與Ottoman全自動特定蛋白即時檢測分析儀高度相關，相關指數r2=0.997 5；Coapresta2000全自動凝血分析儀檢測血漿CRP時的線性為0～200 mg/L。然而1臺儀器若要投入臨床應用，除了本文研究的幾個性能要優良外，還需要靈敏度高；噪聲、誤差小；分辨率、重復性好；響應迅速；穩定性好等。本研究結果顯示，Coapresta2000全自動凝血分析儀檢測血漿CRP時，不僅與宜賓市第二人民醫院檢驗科測定CRP濃度的儀器Ottoman1000高度相關，還有較好的精密度及線性，故Coapresta2000測定血漿CRP具有進一步研究價值。

研究時發現，Coapresta2000全自動凝血分析儀在檢測全血CRP時結果不理想，故本文只研究了其檢測血漿CRP時的一些性能。全自動分析儀檢測CRP時血漿用量較大，而一些采血困難的患者(如嬰幼兒)，測定CRP時需要采集末梢血，若要投入使用，這是一個需要考慮的問題。分析其檢測全血結果不理想可能原因，Coapresta2000為凝血分析儀雖有震蕩混勻方式但無混勻的攪拌棒，在反應杯中加入全血后可能無法使紅細胞充分溶解，從而使測定的全血CRP全血結果不穩定。

本文只研究了Coapresta2000全自動凝血分析儀檢測血漿CRP的準確性、批內精密度、日間精密度、相關性、線性、攜帶污染率，還需要進一步研究其抗干擾能力等。

除此之外，在評價該儀器線性時，達到最大濃度200 mg/L后，仍然顯示出良好的線性，思考該儀器檢測血漿CRP線性時高值是否可以再高一些，是否可以通過增加已知濃度標本用量，來觀察該儀器更高濃度的線性范圍。

Coapresta2000全自動凝血分析儀是宜賓市第二人民醫院檢驗科新引進的儀器，除了檢測凝血相關項目外，正在探索開發其能檢測的其他項目，CRP是其中1項。現目前研究表明，其檢測CRP有進一步研究價值，繼續研究后，若有投入臨床檢驗使用的機會，即增加了1臺CRP檢測儀器，又可以作為檢測CRP的備用儀器，儀器資源得到了充分利用。但由于該儀器沒有檢測CRP的配套試劑，還有許多沒有被發現的缺點，為了保證其得到準確、穩定的結果，仍然需要進一步探討。

參考文獻

[1]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods;approved guideline-second edition[S].PA,USA:CLSI,2004.

[2]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures:a statistical approach;approved guideline[S].PA,USA:CLSI,2003.

[3]尚紅，王毓三，申子瑜，等．全國臨床檢驗操作規程[M]．4版．北京：人民衛生出版社，2015：412-413．

[4]王前，鄭磊，曾方銀．超敏C-反應蛋白的研究現狀及臨床應用[J]．中華檢驗醫學雜志，2004，27(8)：542-544．

[5]余永芬．C反應蛋白檢測在急性胰腺炎嚴重程度及胰腺壞死評估中的意義[J]．國際檢驗醫學雜志，2015,36(3)：407-409．

[6]樂家新，王紅霞，叢玉隆，等．血細胞分析儀CRP測定性能的評價[J]．中華檢驗醫學雜志，2007，30(7)：810-813．

[7]馬增煌，胡芳，葉艷麗．免疫增強透射比濁法測定超敏C-反應蛋白的實驗研究[J]．檢驗醫學與臨床，2008，5(24)：1481-1482．

[8]趙榮澤，王愛紅．三種方法測得CRP的結果分析[J]．放射免疫學雜志，2010，23(1)：107．

[9]胡敏，李延武，胡永紅．免疫增強透射比濁法測定超敏C-反應蛋白的方法學評價[J]．湖南醫科大學學報，2003，28(4)：415-417．

[10]孫立芳，付新欣．CRP檢測的臨床應用及與其它臨床指標比較的臨床意義[J]．中國民康醫學，2011，23(7)：853-854．

[11]安有芬，唐仁滿，程安珍．定量檢測CRP的臨床價值[J]．西藏醫藥雜志，2002，23(3)：48-49．

[12]王慧，羅煒，陳濤．免疫透射比濁法CRP檢測試劑盒的性能評價[J]．中國熱帶醫學，2006，6(8)：1479-1480．

[13]易火春，顏水堤，朱建輝，等．免疫透射比濁法檢測CRP部分性能指標評價[J]．國際檢驗醫學雜志，2012，33(18)：2244-2245．

[14]常岐，姜美臣，王薇雅．C反應蛋白兩種常用檢測方法評價及臨床應用[J]．中國臨床研究，2014，27(4)：478-479．

作者簡介：解學龍,男，副主任技師，主要從事臨床基礎檢驗工作。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.13.021

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)13-1801-03

(收稿日期：2016-01-19修回日期：2016-03-30)

Study on feasibility of Coapresta2000 automatic coagulation analyzer for detecting CRP

XIEXuelong1,CHENChanghua2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,YibinMunicipalSecondPeople′sHospital,Yibin,Sichuan644000,China;2.SouthwestMedicalUniversity,Luzhou,Sichuan646000,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the feasibility of the Coapresta2000 automatic coagulation analyzer for detecting C-reactive protein(CRP).MethodsThe performance of the Coapresta2000 automatic coagulation analyzer for detecting CRP was analyzed,including accuracy,linearity,precision,carryover rate and the correlation between the Ottoman automatic special protein real time analyzer and the Coapresta2000 automatic coagulation analyzer.ResultsThe men recovery rate of 3 batches of reagent by the Coapresta2000 automatic coagulation analyzer for detecting CRP for detecting plasma CRP was 106.0% with better accuracy;the within-run precision was less than 10% and the inter-day precision was less than 15%;the carryover rate was 0.32%;the related equation in the Ottoman automatic special protein real time analyzer and the Coapresta2000 automatic coagulation analyzer for detecting plasma CRP was Y=0.001 2X+0.489,the correlation coefficient was r2=0.997 5,the difference was not statistically significant(P>0.05).The CRP results of plasma sample detected by these two instruments was highly correlative;the linearity in the Coapresta2000 automatic coagulation analyzer for detecting CRP was 0-200 mg/L.ConclusionThe Coapresta2000 automatic coagulation analyzer for detecting CRP has better within-run precision,low carryover rate,high correlation with the Ottoman automatic special protein real time analyze,which has a value for further study.

Key words:C-reactive protein;accuracy;correlation;precision;carryover rate