對乙酰氨基酚誘導急性肝衰竭小鼠動物模型的建立

明雅南　李春敏　張靜怡　劉曉琳　茅益民

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·論著·

對乙酰氨基酚誘導急性肝衰竭小鼠動物模型的建立

明雅南李春敏張靜怡劉曉琳茅益民

200001上海交通大學醫學院附屬仁濟醫院消化內科，上海市消化疾病研究所

【摘要】目的通過腹腔注射高劑量對乙酰氨基酚(APAP)構建穩定的用于研究藥物導致急性肝衰竭的動物模型。方法本研究首先進行生存率實驗，取60只C57BL/6小鼠隨機分為4組，每組15只，分別腹腔注射0.9%氯化鈉溶液及不同劑量(300 mg/kg、500 mg/kg 、750 mg/kg)APAP后，觀察不同組別72 h內小鼠的精神、活動狀態和生存率。根據生存率分析結果，另選取180只C57BL/6小鼠，隨機分為3組,分別腹腔注射0.9%氯化鈉溶液、低劑量(300 mg/kg)和高劑量(750 mg/kg)APAP，每組分別在 0、1、3、6、12 h等時間點隨機選取12只小鼠，留取血清和肝組織，驗證小鼠的生化和組織學是否符合急性肝衰竭的表現。結果生存率實驗結果顯示，0.9%氯化鈉溶液組、300 mg/kg以及500 mg/kg組72 h內無小鼠死亡；750 mg/kg組72 h死亡率為100%，推測750 mg/kg組可能為急性肝衰竭導致的死亡。生化和組織學驗證實驗結果發現，對照組各時間點轉氨酶均無明顯升高；APAP處理的兩組動物模型ALT 3 h時開始升高，6 h時低劑量組ALT升高達到峰值[(6766.5±2001.27) IU/L]，而高劑量組ALT于12 h達到(11707.58±1882.45) U/L(P<0.01)。從HE病理染色來看，0.9%氯化鈉溶液組各時間點肝臟形態結構正常。APAP處理的兩組動物模型的肝組織學，主要表現為以中央靜脈為中心的肝細胞變性壞死，并隨時間延長，損傷范圍逐漸擴大。低劑量組壞死周圍界限清楚，匯管區肝細胞結構形態正常，12 h可見壞死區周圍肝細胞增生表現。高劑量組表現為典型的急性大片狀壞死特點，僅匯管區殘存少量變性的肝細胞，細胞快速壞死后，留下空的網狀纖維支架，肝竇淤積大量紅細胞，未見肝細胞增生。HAI評分結果顯示，高劑量組的HAI得分(7.33±1.5)顯著高于低劑量組(5.25±2.26，P<0.05)。結論C57BL/6小鼠腹腔注射高劑量APAP(750 mg/kg)后，生化和組織學改變與急性肝衰竭相似，本研究構建的動物模型對于探索APAP導致的AHF的發病及進展機制研究具有潛在的應用價值。

【關鍵詞】對乙酰氨基酚；肝衰竭；動物模型

藥物因素是臨床上引起急性肝衰竭(AHF)的重要原因之一，其中，對乙酰氨基酚(APAP)已成為歐美國家AHF的最主要病因，也是導致患者接受肝移植的第二大原因[1]。但目前對藥物導致AHF發病機制的認知仍非常有限，缺乏合適的動物模型是主要原因。APAP誘導的肝損傷模型穩定且重復性好，盡管尚存在劑量和時間依賴性，曾有研究報道應用過量APAP誘導AHF，但是否真正建模成功卻并不明確。……