miRNA-31-5p在過量維甲酸抑制C2C12細胞增殖中的調控機制研究

唐　燚，劉　波，李　楠，叢　蔚，肖　晶

(大連醫科大學 口腔醫學院 口腔基礎教研室，遼寧 大連 116044)

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miRNA-31-5p在過量維甲酸抑制C2C12細胞增殖中的調控機制研究

唐燚，劉波，李楠，叢蔚，肖晶

(大連醫科大學 口腔醫學院 口腔基礎教研室，遼寧 大連 116044)

[摘要]目的探討miRNA-31-5p在過量維甲酸(Retinoic acid，RA)抑制小鼠肌原細胞系C2C12增殖中的作用機制。 方法在10 μmol/L RA及無RA條件下，qPCR檢測C2C12細胞增殖過程中miRNA-31-5p及抗肌營養不良蛋白(dystrophine，Dmd)表達的水平；分別轉染miRNA-31-5p mimics(miRNA-31-5p mimics組)、miRNA-31-5p inhibitor(miRNA-31-5p inhibitor組)、Duplex N.C(Duplex N.C組)及N.C inhibitor(N.C inhibitor組)。用細胞增殖/毒性檢測實驗(CCK-8)檢測0 h，24 h,36 h及48 h的OD值， 5-溴脫氧尿嘧啶核苷摻入實驗(BrdU)檢測48 h細胞中BrdU陽性細胞比率。在10 μmol/L RA條件下，qPCR檢測C2C12細胞在下調miRNA-31-5p后，Dmd表達水平變化。 結果在10 μmol/L RA條件下，細胞中miRNA-31-5p在36 h及48 h的表達水平均明顯高于相同時間點正常條件下的表達水平，P<0.01；Dmd在36 h及48 h的表達水平均明顯低于相同時間點正常條件下的表達水平，P<0.01。CCK-8結果顯示在0 μmol/L RA條件下,miRNA-31-5p過表達抑制C2C12細胞增殖， 10 μmol/L RA條件下，細胞的增殖活性進一步降低；0 μmol/L RA條件下，miRNA-31-5p低表達促進C2C12細胞增殖，10 μmol/L RA作用下， miRNA-31-5p inhibitor組細胞增殖活性在第48 h顯著高于N.C inhibitor組，P<0.01。10 μmol/L RA的作用下，miRNA-31-5p mimics組細胞BrdU陽性率與Duplex N.C組比降低27.6%,P<0.05；miRNA-31-5p inhibitor組細胞BrdU陽性率與N.C inhibitor組相比升高24.1%,P<0.05。轉染48 h后，miRNA-31-5p inhibitor組Dmd的相對表達量較N.C inhibitor組明顯上調,P<0.01；在10 μmol/L RA作用下，miRNA-31-5p inhibitor組細胞Dmd的表達升高，與N.C inhibitor組相比差異具有顯著性意義。結論 miRNA-31-5p可參與10 μmol/L RA導致的C2C12細胞增殖抑制，而其可能的分子機制是通過對Dmd靶向作用實現的。

[關鍵詞]miRNA-31-5p；維甲酸； C2C12細胞；細胞增殖

[引用本文]唐燚，劉波，李楠，等.miRNA-31-5p在過量維甲酸抑制C2C12細胞增殖中的調控機制研究[J].大連醫科大學學報，2016,38(1)：6-11.

維甲酸(retinoic acid，RA)是維生素A的活性代謝產物之一，在脊椎動物的胚胎發育和器官形成中起重要作用。但在個體發育過程中，10 μmol/L RA能夠導致器官的畸形。本課題組前期研究結果顯示，對孕鼠進行RA灌胃可誘發胎鼠腭裂并伴發舌肌發育異常，舌肌細胞的增殖活性及肌向分化水平均受到抑制[1]。本研究前期結果表明：10 μmol/L RA能夠抑制小鼠肌原細胞系C2C12的增殖活性[2]，但具體作用機制尚缺乏系統研究。

microRNA作為新的調控因子，已顯示出在參與調控骨骼肌細胞增殖和分化中發揮著重要作用。已有報道miRNA-31-5p過表達會使人肺腺癌細胞周期阻滯在S期[3]。……