病毒感染免疫檢驗的研究進展

萬來春

【摘 要】 病毒感染免疫檢驗對疾病診斷、預防接種及治療、發病機制的判斷等具有非常重要的作用。由于免疫檢驗不僅能夠明確待檢物病毒類型，且對特定抗體濃度也可進行測定，因此它在病毒檢驗中占據著非常重要的地位。本研究基于早期病毒檢驗技術到新興病毒檢驗技術的變更，對病毒感染免疫檢驗的研究進展進行了分析，以期對病毒檢驗技術的改進有所幫助。

【關鍵詞】 病毒； 機制； 感染； 免疫檢驗

[Abstract] Virus infection immunity test plays a very important role in disease diagnosis， vaccination and treatment， judgment of pathogenesis. Immune test can not only determine the virus type of analyte， and it can be used for the determination of specific antibody concentration， so it occupies a very important position in virus testing. This study is based on the change from early virus detection technology to new virus detection technology， analysis of the research progress of virus infection immunity test， in order to improve the virus detection technology.

[Key words] Virus； Mechanism； Infection； Immunity test

大量實驗證實，病毒感染是許多疾病的主要誘發因素[1-2]。由于病毒通常于人體細胞內寄存、繁殖、變異，因此采用傳統檢驗方法根本不能達到對病毒感染檢驗與疾病診斷的基本要求。隨著醫療技術水平的提升，免疫檢驗法的出現有效地彌補了傳統檢驗方法的弊端。有研究發現，通過免疫檢驗法對人體免疫細胞數量、抗體類型及濃度等進行測定，可在較短時間內明確病毒種類，對疾病診斷、免疫治療等極具意義[3]。

1 病毒損害機體的機制

病毒具有結構簡單、體積微小等特點，可損壞人體宿主細胞功能，從而誘發免疫病理變化，主要表現在以下兩個方面：第一，免疫抑制。宿主細胞感染病毒后，會減少人體免疫分子的合成，損壞機體免疫應答系統。第二，免疫損害。宿主細胞遭到病毒侵襲后，會誘發病理性免疫性應答作用，導致人體非免疫組織與臟器系統損傷。

病毒感染引發免疫損害的作用機制與以下幾點密切相關，具體為：1）宿主細胞感染病毒后，會減少人體免疫分子的合成，損壞機體免疫應答系統，從而對免疫系統產生抑制作用，引發宿主細胞感染。2）宿主細胞遭到病毒侵襲后，會誘發病理性免疫性應答作用，導致人體非免疫組織與臟器系統損傷機體。3）蛋白質表達主要由病毒合成，在細胞毒作用的介導下，可導致細胞損傷。4）特異性CTL可對此類膜抗原進行識別，從而提升病毒殺傷力。5）基膜與血流速度較慢區域沉積有大量的病毒抗原及抗體，可對基膜及血流區域造成嚴重損害。6）補體被激活后，會引發一系列炎性反應，使細胞受損。7）交叉免疫反應造成的組織、器官損傷。

2 早期病毒免疫檢驗方法

早期病毒免疫檢驗方法主要包括ELISA、免疫熒光法、RIA、血細胞凝集法等，由于早期檢測技術水平有限，因此這些方法多操作繁瑣、特異性與敏感性較差、用時長、安全性低。

2.1 ELISA

該方法產生于酶聯吸附試驗中，稱為酶聯免疫法。酶聯免疫法是一種結合了酶催化放大與免疫特異性的檢驗技術，主要由捕獲法、競爭法、間接法及雙抗夾心法等構成，其中在早期病毒免疫檢測中應用最為頻繁的方法即為雙抗夾心法。大量研究證實，酶聯免疫法是用于檢驗豬偽狂犬病、植物病毒、丙型肝炎病毒、藍舌病等病毒的標準方法[4-5]。

2.2 免疫熒光法

該方法是屬于一種免疫標記檢驗法，主要包括了熒光抗體、熒光抗原兩種技術。由于在免疫熒光試驗中產生的熒光色素不僅可與抗體球蛋白相結合，還可與蛋白質相結合，因此可用于對抗體、抗原的定位和檢測。免疫熒光法雖具有一定的靈敏性、特異性及高效性，但因其實驗操作環節較多，過程繁瑣，因此檢驗結果的客觀性有失偏頗。

2.3 RIA

RIA即為放射免疫技術，由二十世紀 60年代德國的一位科學家所發明，屬于一種體外微量檢驗技術，主要通過聯合2種抗原（未經同位素標記、經標記），使其與抗體相結合并產生競爭抑制反應，從而獲取試驗結論。該方法具有操作簡便、特異性高、靈敏性強等特點，但由于其所產生的放射物質不僅可對參與試驗者的健康造成危害，還易受外界環境干擾而發生假陽性反應，因此在病毒感染免疫檢驗使用中受到了一些限制[6]。通常放射免疫技術多用于對乙型肝炎病毒的檢驗分類。

2.4 血細胞凝集法

多項研究證實，部分病毒存在促進紅細胞凝集的性能，而此種性能則被稱之為血凝[7]。血細胞凝集法就是基于此種特性所研制出的一種病毒檢驗技術。對此種病毒檢驗技術具有輔助作用的血凝抑制試驗也是基于病毒促進紅細胞凝集的能力可能被相應抗體抑制的這種特性而研制出來。血細胞凝集法僅適用于對梅毒的確診[8]，因此多用于對梅毒螺旋體的檢測，但對梅毒療效的檢測卻并不適用。

2.5 中和試驗法

該方法主要由固定血清-稀釋病毒法、固定病毒-血清稀釋法兩部分組成，可用于檢測病毒感染力。通過分析與血清結合后的病毒所剩余的感染力，來判斷免疫血清對病毒感染所產生的抑制能力。該方法在臨床上多用于對病毒抗原性與類型進行鑒別。

2.6 免疫電泳法

該方法結合了抗原抗體帶電的作用原理，使帶電物體在電場的作用下進行運動。試驗者通過對該物質的數量、運動的快慢等進行觀察，來判斷病毒類型[9]。

2.7 其他檢驗技術

除了ELISA、免疫熒光法、RIA、血細胞凝集法、中和試驗法及免疫電泳法之外，還有對流電泳法、沉淀法等也可用于測定病毒感染，但這些檢驗技術程序復雜或結果客觀性差等原因，在臨床上應用較少。

3 新興病毒感染免疫檢驗方法

隨著臨床檢驗技術的發展，發光免疫鑒定技術、膠體金技術等新興病毒檢驗方法的出現及應用，使得臨床病毒感染免疫檢驗結果更為精準。與早期病毒感染免疫檢測方法相比，新興病毒檢測方法具有操作簡便、高特異性與靈敏性、用時短、安全性強等優點，更能滿足臨床檢驗的需求。

3.1 發光免疫鑒定

該技術是結合了發光系統與免疫反應用于進行抗原、抗體檢驗的新型技術，具有高特異性、高敏感性等優點。和熒光免疫法不同的是，該方法結合了發光劑與發光系統，應用的標記物為發光劑，且常于安全環境下進行病毒感染免疫檢驗，所以該技術具有高穩定性、無毒無害性的特點。發光免疫鑒定技術用于檢測病毒時，耗時非常短，可快速檢驗病毒類型，明確疾病診斷，是用于臨床檢驗的優質技術，具有非常好的發展前景[10]。

3.2 膠體金技術

該技術的示蹤物質為膠體金，是用于對抗體、抗原進行標記、檢驗的新型技術，不僅安全、操便，且具有良好的敏感性與特異性。當前，在臨床中多用于檢測血清內的甲胎蛋白、艾滋病病毒。

3.3 重組免疫試驗

重組免疫試驗主要通過使抗原以橫線條式吸附于含有硝酸纖維素膜的膜條上，并于長條凹槽反應盤內和標本抗體反應、洗滌，加入底物顯色，觀察條帶可發現血清內存在的特異性抗體，從而對抗體效價進行估計的一種檢驗技術。該方法非常適用于對復雜病原體抗體的檢驗。

筆者結合臨證分析發現，重組免疫試驗可用于檢測丙肝抗體、艾滋病病毒抗體。有研究表明，該方法還可用于對動物口蹄疫病毒的檢測[11]。

4 結語

以往臨床多用傳統檢驗技術進行病毒感染免疫檢驗，由于其特異性與靈敏性較弱，因此缺乏一個相對客觀的檢驗結果。隨著科技的進步，為臨床病毒感染檢驗技術的發展帶來了新的契機，越來越多的新興技術逐漸將傳統技術所取代。由于新興的病毒感染免疫檢驗技術具有高效、簡便、安全、靈敏等特點，因此得到了廣大試驗人員的肯定，但不可忽略的是，仍有各種問題存在于整個檢驗過程中，這主要由參與者本身的差異性與生物學差異性所致。此外，一些技術上的誤差、標本選取時間、操作方法不當等也會對檢驗結果產生影響。因此，我們應嚴格控制病毒感染免疫檢驗過程與各種因素，以取得一個客觀的檢驗結果。

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