鼻咽癌組織中XIAP的表達與放療預后的相關性

項振飛，方建晨，林麗，陸妙珍，許權

（1.寧波市醫療中心李惠利醫院　放療科，浙江　寧波　315040；2.寧波市醫療中心李惠利醫院　病理科，浙江　寧波　315040；3.寧波市鄞州區人民醫院 血液科，浙江　寧波　315040）

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鼻咽癌組織中XIAP的表達與放療預后的相關性

項振飛1，方建晨2，林麗3，陸妙珍1，許權1

（1.寧波市醫療中心李惠利醫院放療科，浙江寧波315040；2.寧波市醫療中心李惠利醫院病理科，浙江寧波315040；3.寧波市鄞州區人民醫院 血液科，浙江寧波315040）

［摘 要］目的：觀察放療后鼻咽癌（NPC）組織中X染色體連鎖的凋亡抑制蛋白（XIAP）的表達，評估XIAP 在NPC患者放療預后的診斷價值。方法：回顧性分析2010年1月至2012年12月收治的94例NPC患者的臨床及病理資料，所有患者均接受放療。采用免疫組織化學法檢測患者鼻咽部病理標本中XIAP蛋白表達，臨床隨訪并分析其與放療預后關系。結果：XIAP在NPC組織中總的陽性表達率為69.15%（65/94）。XIAP陽性表達率與p-TNM分期和腫瘤分化呈負相關（均P＜0.05）。單因素生存分析表明，XIAP高表達、高p-TNM分期以及腫瘤低分化程度均與NPC患者存活率下降明顯相關（均P＜0.05）。多因素Cox回歸分析顯示XIAP表達、p-TNM分期以及腫瘤分化程度是影響NPC患者放療生存的獨立危險因素。結論：XIAP在放療的NPC組織中高表達，XIAP表達、p-TNM分期以及腫瘤分化程度是影響NPC患者放療生存的獨立危險因素。

［關鍵詞］X染色體連鎖的凋亡抑制蛋白；鼻咽癌；放療；蛋白表達；預后；免疫組織化學

鼻咽癌（nasopharyngeal cancer，NPC）是一種發生在頭頸區域的癌癥，主要位于鼻咽表面的鱗片狀表皮細胞，以及咽腔部分的細胞組織［1］。NPC在中國的發病率和死亡率分別為3.16/10萬和1.53/10萬［2］。因疾病早期缺乏典型的臨床表現，且病變位置隱蔽，早期腫瘤較難發現，NPC患者的5年生存率僅有47.96%［3］。對于NPC的治療，傳統的放療治療法是較為常見的。然而放療也容易產生不良反應，需要對其放射強度等細節進行控制才能達到較好的腫瘤治療效果［4］。因此，確定一些與NPC相關的因子作為判斷NPC放療預后效果的診斷指標，將能夠更主動且有效地治療NPC。

近年來，有研究報道［5-7］顯示，下調X染色體連鎖的凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apop-tosis protein，XIAP）表達，能夠調節癌癥細胞的增殖、遷移和侵襲。因此，XIAP與癌細胞的增殖情況具有相關性，推測XIAP可能可以作為評估NPC患者放療預后的效果的重要診斷依據［8］。然而，到目前為止，并沒有直接證據證明此觀點，因此，本研究通過檢測NPC患者γ射線照射后XIAP的表達水平，來探討XIAP與NPC臨床病理特征關系以及療效評價中的作用，以期為臨床決策及預后判斷提供參考依據。

1　資料和方法

1.1一般資料 研究對象為寧波市醫療中心李惠利醫院2010年1月至2012年12月接受放射治療的NPC患者94例。入選標準：①均經病理組織學確診為局部晚期NPC，病理類型均為非分化型非角化性NPC，并可獲取病理組織標本進行XIAP表達檢測；②活檢前均未進行放化療；③體能狀態評分（ECOG PS）≤1分，預計生存期≥3個月；④至少有1個可經CT或MRI測量的腫瘤病灶；⑤無明顯的主要器官功能損害；⑥無其他惡性腫瘤病史。排除標準：①治療前即有遠處轉移；②合并嚴重內科疾病；③雙重癌；④曾接受放化療。NPC分期按UICC（2003年）和AJCC聯合制定的TNM分期分類進行［9］；NPC腫瘤病理分類參考WHO（1991年）的腫瘤組織學分類法［10］進行。

1.2放療方法 所有患者均采用模擬定位機定位，面罩固定頭頸肩部，均進行常規分割劑量的放療，每次2 Gy，每周5次。第1段采用面頸聯合左右對穿野和下頸前切線野，照射DT 36 Gy；第2段避脊髓，照射DT 50 Gy；第3段避腦干，照射DT 66 Gy；第4段照射至根治量，鼻咽部劑量70～76 Gy，陽性淋巴結劑量66 Gy，復查有殘留再加量至70 Gy。

1.3免疫組織化學檢測 兔抗人多克隆抗體XIAP IgG由美國Upstake公司生產。采用EnVision法進行免疫組織化學染色，EnVisionTM檢測試劑盒由丹麥DAKO公司生產。石蠟標本先做成3 μm厚的組織切片，常規脫蠟水化。滴加過氧化物酶阻斷液，室溫下孵育10 min。蒸餾水漂洗，置于PBS中10 min。組織抗原微波修復。滴加非免疫動物血清，室溫下孵育10 min。滴加XIAP一抗（工作濃度為1︰200），濕盒中37 ℃孵育60 min，PBS漂洗10 min。EnVisionTM孵育10 min，PBS漂洗10 min。色源底物溶液孵育10 min，蒸餾水漂洗。DAB顯色，蘇木精復染，中性

1.6統計學處理分析 采用SPSS19.0統計軟件進行數據分析。計量資料采用±s表示并進行正態性檢驗。2組間比較采用t檢驗。計數資料以Fisher’s精確檢驗。對可能影響預后的因素進行Kaplan-Meier法及log-rank檢驗，并通過Cox比例風險回歸模型將NPC患者的臨床病理因素納入進行多因素分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1XIAP在NPC組織的表達及與臨床病理指標的相關性 XIAP染色陽性表達主要定位于細胞質內，陽性表達細胞內可見棕黃色顆粒彌漫分布于整個細胞質，見圖1。XIAP在NPC組織中總的陽性表達率為69.15%（65/94）。Spearman相關性分析提示XIAP陽性表達率與p-TNM分期和腫瘤分化程度呈負相關（r=-0.235，r=-0.337；均P＜0.05），而與性別、年齡、雙側頸部淋巴結轉移、腫瘤大小、T-分期和N-分期無明顯相關性（均P＞0.05），見表1。

2.2NPC患者放療預后及其影響因素的單因素與多樹膠封片。用PBS代替一抗作陰性對照。

1.4免疫組織化學結果判定 在光學顯微鏡下觀察，XIAP在NPC組織中免疫組織化學染色以細胞質呈現棕黃色顆粒者為陽性，結果評分用雙盲法，在高倍鏡下計數500個癌細胞，結合陽性細胞百分率及陽性細胞染色強度2個方面計算XIAP免疫組織化學染色評分：①陽性細胞百分率：無陽性細胞為0分；陽性細胞0%～24%為1分；陽性細胞25%～49%為2分；陽性細胞50%～74%為3分；陽性細胞75%～100%為4分。②陽性細胞染色強弱：無色為0分；淡黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。2項的乘積為該患者的免疫組織化學評分：乘積0～1分為陰性（-）；乘積≥2分為陽性，2～4分為弱陽性（+），5～7分為中等陽性（++），≥8～12分為強陽性（+++）。

1.5隨訪 采用門診記錄、電話隨訪或信訪的方法進行隨診，每3個月復查1次，復查內容包括間接或直接鼻咽鏡、鼻咽和上頸CT或MRI檢查，以及胸片、B超、全身骨掃描等。取得有效數據，預測NPC放療預后的價值。總生存期（overall survival，OS）定義為從放療開始至死亡或最后隨訪的時間，隨訪截止時間為2015年1月，隨訪時間5～60個月，中位隨訪時間為45個月，失訪3人，隨訪率為96.81%。死亡40例，病死率為43.96%。存活51例，生存率為56.04%。因素生存分析 Kaplan-Meier分析計算臨床病理特征和XIAP表達對NPC患者生存情況的影響，見表2和圖2。單因素生存分析表明，XIAP高表達、高p-TNM分期以及腫瘤低分化程度均與NPC患者存活率下降明顯相關（均P＜0.05），而其他臨床病理變量均無統計學意義（均P＞0.05）。多因素Cox回歸分析顯示XIAP表達、p-TNM分期以及腫瘤分化程度是影響NPC患者放療生存的獨立危險因素（P＜0.05），見表3。

圖1　XIAP在NPC組織中的免疫組織化學特征

表1　XIAP表達與臨床特征的關系

表2　NPC患者放療預后及其影響因素的單因素分析（±s）

表2　NPC患者放療預后及其影響因素的單因素分析（±s）

變量　n　OS　P XIAP低表達　29　54.75±2.12　＜0.003高表達　65　40.10±2.75性別男61　45.62±2.64　＜0.247 女33　42.79±3.58年齡（歲）＜60　56　45.74±2.67　＜0.817 ≥60　38　42.93±3.49雙側頸部淋巴結轉移N0+單側轉移　61　48.60±2.35　＜0.082雙側轉移　33　37.17±3.92腫瘤大小（cm）＜5　49　48.22±2.64　＜0.182 ≥5　45　40.73±3.29 T-分期T3　55　43.44±257　＜0.307 T1-2　39　47.28±3.75 N-分期N0　37　48.86±3.25　＜0.054 N1　57　41.87±2.74 p-TNM分期I-II　39　54.21±2.20　＜0.001 III　55　37.77±2.96腫瘤分化程度良好/中等　36　50.79±2.95　＜0.022 低58　40.64±2.13

圖2　Kaplan-Meier生存分析

3　討論

目前研究表明XIAP具有較強的抑制凋亡能力，特別在癌細胞中高表達，其可能是癌細胞惡性轉化的重要原因之一［11-13］。本研究通過觀察NPC患者放療后XIAP的蛋白表達水平變化，旨在探討XIAP與鼻咽癌臨床病理特征關系以及放療療效評價中的作用。

表3　NPC患者放療預后影響因素的Cox回歸分析

本研究結果顯示，XIAP在放療的NPC組織中高表達，在NPC組織中總的陽性表達率為69.15%，且XIAP的陽性表達率與NPC患者的p-TNM分期和腫瘤分化程度呈負相關。此外，單因素生存分析表明，XIAP高表達、高p-TNM分期以及腫瘤低分化程度與NPC患者存活率下降明顯相關，且多因素Cox回歸分析結果表明XIAP表達、p-TNM分期以及腫瘤分化程度是影響NPC患者放療生存的獨立危險因素。作為抗凋亡蛋白家族的重要成員，XIAP通過抑制Caspases酶原的激活以及成熟Caspases的催化活性，從而抑制細胞的凋亡［14-15］。研究［16］表明，在癌細胞接受放射治療后，XIAP的表達量都有較為明顯的增加，與本研究結果相一致。我們推測可能是由于細胞內的XAF1（XIAP associated factor 1）以及DIABLO （direct inhibitor of apoptosis-binding protein with low pl）的表達量減少所導致的［17-18］。此外，XAF1及DIABLO均可對XIAP的表達及其功能產生抑制作用，是調節細胞正常凋亡代謝的重要因子［19-20］。當細胞發生癌變的情況下，XAF1及DIABLO的表達量都會相應的減少［11，21］，其主要原因可能是癌變影響了這些因子的轉錄與翻譯過程。其中，XAF1在腫瘤細胞中，常因為其啟動子區域甲基化導致了轉錄水平的減少［19，21］。XIAP的表達水平增加，會抑制癌細胞凋亡，最終導致NPC的發生發展。此外，有研究［20］表明XIAP能夠通過促進NF-kB的表達而增強炎癥因子的產生，促進了癌細胞的增殖以及侵襲等過程，從而影響患者預后。同時，XIAP的表達量往往與高p-TNM分期與腫瘤低分化程度成負相關。因而，XIAP高表達可能與NPC患者的預后相關。對此，XIAP的蛋白表達水平是影響NPC患者預后的重要因素，對患者的預后判斷有一定的指導意義。

綜上所述，XIAP在放療的NPC組織中高表達，且XIAP的蛋白表達水平與NPC患者的p-TNM分期和腫瘤分化程度呈負相關，表明XIAP的高表達與NPC患者放療預后相關。同時，XIAP表達、p-TNM分期以及腫瘤分化程度是影響NPC患者放療生存的獨立危險因素。

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（本文編輯：吳昔昔）

Relationship between XIAP expression and radiotherapy prognosis in nasopharyngeal carcinoma

XIANG Zhenfei1， FANG Jianchen2， LIN Li3， LU Miaozhen1， XU Quan1. 1.Department of Radiotherapy，Ningbo Medical Treatment Center Lihuili Hospital， Ningbo， 315040； 2.Department of Pathology， Ningbo Medical Treatment Center Lihuili Hospital， Ningbo， 315040； 3.Department of Hematology， Ningbo Yinzhou People’s Hospital， Ningbo， 315040

Abstract：Objective： To investigate the relationship between X-linked inhibitor of apoptosis protein （XIAP） expression and prognosis of patients with nasopharyngeal cancer （NPC） that received radiotherapy. Methods： A retrospective analysis was performed with the data of 94 NPC patients from January 2010 to December 2012. The expression of XIAP in NPC tissues was detected with immunohistochemistry （IHC）， and analyzed the prognosis relevance after radiotherapy. Results： The overall XIAP positive expression rate in NPC tissues was 69.15% （65/94） and the XIAP positive expression rate was negatively correlated with the p-TNM staging and the tumor differentiation （all P＜0.05）. Kaplan-Meier analysis showed that the high XIAP expression， high p-TNM staging and poorly differentiated were signifi cantly correlated with decreased survival rate of NPC patients （all P＜0.05）. Multivariate Cox regression analysis showed that XIAP expression， p-TNM staging and degrees of differentiation were independent risk factors for the survival of NPC patients after radiotherapy. Conclusion： The high XIAP expression， p-TNM staging and degree of differentiation are independent risk factors for the survival of NPC patients after radiotherapy.

Key words：X-linked inhibitor of apoptosis protein； nasopharyngeal cancer； radiotherapy； protein expression；prognosis； immunohistochemistry

［中圖分類號］R762

［文獻標志碼］A

DOI：10.3969/j.issn.2095-9400.2016.04.007

收稿日期：2015-11-20

作者簡介：項振飛（1981-），男，浙江寧波人，主治醫師。