鈉尿素受體A在乳腺癌中的表達及臨床意義*

陜西省榆林市第二醫院(榆林 719000)

李冠雄　曲敬琨△　趙　旭　馬任遠　楊中民　房宏林　段小藝△　王健生△▲

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·臨床研究·

鈉尿素受體A在乳腺癌中的表達及臨床意義*

陜西省榆林市第二醫院(榆林 719000)

李冠雄曲敬琨△趙旭馬任遠楊中民房宏林段小藝△王健生△▲

摘要目的：觀察乳腺癌組織中鈉尿素受體A(NPRA)的表達及與臨床病理資料間的關系。方法：采用免疫組化方法對符合條件的乳腺癌50例及癌旁正常組織46例進行NPRA染色，并結合臨床病理資料分析兩者之間的相關性。結果：符合納入標準的乳腺癌組織50例，癌旁正常組織46例；NPRA在TNM I和II期中NPRA蛋白的強陽性表達率為36.8%(7/19)，在TNM III期和Ⅳ期中NPRA的強陽性表達率為80.6%(25/31)，組間比較具有統計學差異。NPRA蛋白表達水平與患者的發病年齡、腫瘤部位、淋巴結轉移、組織分化程度、腫瘤直徑大小間比較無統計學差異。結論：NPRA在乳腺癌組織中高表達，且與患者TNM分期相關。

主題詞 乳腺腫瘤/病理學@鈉尿素受體A腫瘤分期

研究發現，之前長期被認為跟心臟功能及血壓調節有關的鈉尿素受體A(Natriuretic peptide receptor A，NPRA)在多種人類惡性腫瘤細胞系及組織內都有不同程度的表達，并為一種癌基因參與了黑色素瘤、肺癌、前列腺癌等惡性腫瘤的發生與發展[1-4]。我們前期在胃癌組織中也觀察到NPRA高表達[5]。乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，有關乳腺癌組織內NPRA蛋白的表達情況尚未見報道。我們應用免疫組化方法對乳腺癌組織中的NPRA的表達進行了檢測，并與患者的臨床病理資料進行統計分析，現報告如下。

資料與方法

1材料收集陜西榆林市第二醫院2007年1月至2009年12月期間手術切除的組織病理石蠟標本共計130例，其中乳腺癌組織80例，癌旁組織50例。入組標準：①女性患者；②被病理醫師確診為乳腺導管癌；③術前均未行化學治療、放射治療及免疫治療；④病例資料和隨訪資料齊全。排除標準：①男性患者；②所取的癌旁組織已經被腫瘤侵犯；③組織為其他亞型的乳腺癌標本。

2免疫組化方法石蠟組織常規切片，按試劑說明行免疫組化染色，以PBS代替一抗的切片作為陰性對照，使用Motic公司顯微鏡觀察結果。染色陽性結果呈棕黃色或棕褐色顆粒，每張標本隨機選取10個視野，各視野采用半定量評分方法。依據染色強度積分，分為4個等級：0分：無著色；1分：淺黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。參照陽性細胞率評分：0分：無陽性細胞或陽性細胞<10%；1分：陽性細胞10～25%；2分：陽性細胞25～50%；3分:陽性細胞50～75%；4分：陽性細胞>75%。 將染色強度和陽性細胞率的積分相乘作為最終判定結果：0分為陰性(-)，1～4為弱陽性(+)；5～8為陽性()；9～12為強陽性()。

3統計學方法應用SPSS19.0 統計學軟件，計數資料組間比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法，以P<0.05為差異具有統計學意義。

結果

1 一般資料 按入組標準篩選后有滿足要求的乳腺癌組織50例，癌旁組織46例。患者年齡26～77歲，中位年齡49歲，其中<60歲40例(80.0%)，≥60歲10例(20.0%)。淋巴結轉移情況：伴有淋巴結轉移的40例(80.0%)，不伴有淋巴結轉移的10例(20.0%)。組織學分化程度：高分化的11例(22.0%)，中分化的23 例(46.0%)，低分化的16例(32.0%)。按國際TNM 分期標準(2009年版) 分期后，I期0例，II期19例(38.0%)，III期的29例(58.0%)Ⅳ期2例(4.0%)。腫瘤部位：外上象限35例(70.0%)，外下象限8例(16.0%)，內上象限4例(8.0%)，內下象限3例(6.0%)。腫瘤直徑：2～5cm 45例(90.0%)，>5cm 5例(10.0%)。

2免疫組化染色結果在乳腺導管癌組織的細胞中可見到NPRA蛋白密集性的分布在細胞質與胞膜中，而在癌旁組織的上皮細胞中很少發現有NPRA蛋白的表達，陰性對照切片中也很少發現黃色的表達。在乳腺導管癌組織中NPRA蛋白的強陽性率約為64%，與癌旁組織中NPRA蛋白的強陽性率(26.1%)相比明顯增高，且組間差異具有統計學意義(P<0.05)。見表1，附圖。

表1　NPRA蛋白在人乳腺導管癌組織與

注：與癌旁組織比較，*P<0.05

附圖a： 乳腺導管癌細胞中可見呈密集分布的棕黃色顆粒(SP法 200×)；b：乳腺導管癌細胞中可見密集分布的棕黃色或淡黃色顆粒，且主要位于細胞質和胞膜中，胞核基本不染色(SP法 400×)；c：癌旁組織中呈淡黃色(SP法 200×)；d：陰性對照(SP法 200×)

3NPRA在乳腺癌組織中的表達與臨床病理學特征的關系NPRA蛋白表達水平與患者的發病年齡、淋巴結轉移、組織分化程度、腫瘤部位、腫瘤直徑大小等臨床特征無統計學意義(P>0.05)；NPRA在TNM I和Ⅱ期中NPRA蛋白的強陽性表達率為36.8%(7/19)，在TNM Ⅲ期和Ⅳ期中NPRA的強陽性表達率為80.6%(25/31)，組間差異具有統計學意義(χ2=9.810，P<0.05),見表2。

表2　人乳腺導管癌組織中NPRA的表達與

討論

NPRA作為心房鈉尿肽受體家族(NPRA、NPRB及NPRC)中的一員，具有信號轉導酶激活活性。NPRA基因位于1號染色體長臂2區l帶和2帶(1q21～q22)，編碼一條含有約1057個氨基酸的多肽，包括四個結構域，通過與ANP或BNP的結合進而發揮其病理和生理作用[1]。以往對NPRA的研究大多集中在心血管系統，主要與高血壓、心肌肥大、心力衰竭等有關。有研究顯示，NPRA在人類多種癌組織或細胞中高表達，且其表達水平與癌惡性程度有關，剔除NPRA基因可以抑制前列腺癌、肺癌、黑素瘤、卵巢癌等腫瘤的形成[2-4]。本課題組前期在胃癌的研究中也觀察到癌組織中NPRA高表達[5]。陳華云等在胃癌細胞株中檢測到NPRA mRNA表達上調[6]。本研究觀察到，NPRA在人乳腺導管癌組織中明顯高表達，且主要表達在細胞質和細胞膜內，NPRA在人乳腺導管癌中的強陽性率為64%，與癌旁組織中的強陽性率(26.1%)相比，差異有統計學意義(P<0.05)。這與Wang X等在前列腺癌中的研究類似[4]。

王等發現NPRA在正常人體內和良性前列腺增生患者增生細胞中的表達非常低，顯著低于前列腺癌和前列腺高級上皮內瘤變組織，同樣在低級的上皮內瘤變中也是如此，這提示NPRA在腫瘤的發展過程中有一定的促進作用[4]。本研究結果顯示，NPRA在乳腺導管癌組織中高表達并與患者的TNM分期相關，即TNM分期越高的患者，其癌組織內NPRA基因表達越高，這提示NPRA在乳腺癌的發生發展過程中起著促進作用，NPRA可以作為判斷預后的一個分子指標。

有研究表明，在腫瘤的發生、發展過程中，NPRA作為癌基因可能是通過促進炎癥的發生，調控抑癌基因pRb和VEGF的表達而發揮作用，但其具體作用機制還有待進一步探索[7]。調控NPRA的表達可使得ANP分子與血管壁黏性降低，從而阻止脫落的癌細胞黏附在血管壁上，降低腫瘤的復發和轉移，通過對NPRA基因及其上下游調控因子的進一步研究，將有助于找到治療腫瘤的有效分子生物靶點，為臨床上有效治療腫瘤、降低腫瘤復發轉移、改善預后開辟一條新的途徑。

參考文獻

[1]Stryjewski P J, Nessler B, Cubera K,etal. Natriuretic peptides. History of discovery, chemical structure, mechanism of action and the removal routes. Basis of diagnostic and therapeutic use [J]. Przegl Lek, 2013, 70(7): 463-467.

[2]Vesely D L. New anticancer agents: Hormones made within the heart[J]. Anticancer Res, 2012, 32(7):2515-2521.

[3]Kong X, Wang X, Xu W,etal. Natriuretic peptide receptor a as a novel anticancer target[J]. Cancer Res, 2008, 68(1): 249-56.

[4]Wang X, Raulji P, Mohapatra SS,etal. Natriuretic peptide receptor a as a novel target for prostate cancer[J]. Mol Cancer, 2011, 10: 56.

[5]張佳，趙志龍， 陳敬信，等.NPR-A在胃腺癌中的表達及意義[J].現代腫瘤醫學，2013,21(12):2744-2746.

[6]陳華云， 楊東杰， 張常華,等. 胃癌細胞株中NPRA基因啟動子區CpG島的甲基化分析[J]. 解剖學研究,2012,34(5): 355-357.

[7]Wang JC，Fiscus RR．Essential roles of the nitric oxide(no)/cGMP/protein kinase G type-Iα(PKG-Iα)signaling pathway and the atrial natriuretic peptide(ANP)/cGMP /PKG-Iαautocfine loop in promoting proliferation and cell survival of OP9 bone marrow stromal cells[J]. J Cell Biochem，2011，l12(3)：829-839.

(收稿：2015-05-17)

Expression of natriuretic peptide receptor A and its clinical significance in the breast carcinomas

Department of General Surgery, The Second Hospital of Yulin (Yulin719000)

Li GuanxiongQu Li JingkunZhao Xuet al

ABSTRACTObjective：To observe the expression of Natriuretic Peptide Receptor A (NPRA) and its relationship with clinicopathological data clinical significance in the Breast Carcinomas. Methods：Using immunohistochemical technique to investigate the NPRA protein in eligible human breast ductal cancer and para-carcinoma specimens, and analyze the relationship between NPRA expression and clinical pathological features. Results：Including 50human breast ductal cancer and 46 para-carcinoma specimens in the standard, the positive expression of NPRA was 36.8%(7/19)in patients of TNM I and TNM Ⅱ,the positive expression of NPRA was 80.6%(25/31)in patients of TNM Ⅲand TNM Ⅳ, statistical significance was found between groups. While the expression of NPRA showed no statistically significant among the association of age, lymph node metastasis, tumer size, histologic differentiation and tumer position. Conclusion: NPRA is highly expressed in patients with human breast ductal cancer, the higher positive expression of NPRA was correlation with TNM Stages.

KEY WORDSBreastneoplasms/Pathology@Natriuretic peptide receptor ANeoplasm staging

【中圖分類號】R737.9

【文獻標識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.03.009

*國家自然科學基金資助項目(81471710)

陜西省科技攻關項目(2009K2-02)

△西安交通大學第一附屬醫院

▲通訊作者