丙型肝炎患者血清HCV-RNA拷貝數(shù)與甲胎蛋白異質(zhì)體百分比的相關(guān)性分析*

楊自力，馬永能，彭秀娟，劉慧玲，張　潔

(綿陽市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川綿陽 621000)

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·論著·

丙型肝炎患者血清HCV-RNA拷貝數(shù)與甲胎蛋白異質(zhì)體百分比的相關(guān)性分析*

楊自力，馬永能，彭秀娟，劉慧玲，張潔

(綿陽市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川綿陽 621000)

摘要:目的探討丙型肝炎病毒(HCV)患者HCV-RNA與甲胎蛋白異質(zhì)體百分比(AFP-L3/AFP)的相關(guān)性，分析丙型肝炎引起的肝硬化向肝癌發(fā)展的進(jìn)程中HCV-RNA與AFP-L3/AFP變化特點(diǎn)。方法收集臨床已確診的單純HCV患者80例，其中44例為肝硬化患者，36例為丙型肝炎肝癌組，肝硬化組進(jìn)行3、6個(gè)月的隨訪，隨訪結(jié)果分為轉(zhuǎn)移肝癌組及治療有效組，選取60例健康人群作為對照組,采用病例對照研究。不同組間HCV-RNA及AFP-L3/AFP比較采用t檢驗(yàn)。結(jié)果肝硬化組平均HCV-RNA、AFP-L3/AFP為7.15×103 copy/mL、44.3%，與對照組比較(400 copy/mL、1.1%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。肝硬化組平均HCV-RNA、AFP-L3/AFP為8.33×109 copy/mL、3.35%、與丙型肝炎肝癌組(5.71×107 copy/mL、94.33%)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。肝硬化患者3個(gè)月隨訪有4例發(fā)展為肝癌，6個(gè)月后有8例發(fā)展為肝癌。結(jié)論對HCV引起的肝硬化患者應(yīng)聯(lián)合、動態(tài)檢測HCV-RNA與AFP-L3/AFP，以便早期及時(shí)發(fā)現(xiàn)肝癌。

關(guān)鍵詞:丙型肝炎病毒；甲胎蛋白異質(zhì)體百分比；相關(guān)性

HCV-RNA是判斷病毒復(fù)制，傳染性及治療效果的良好指標(biāo)[1-2],甲胎蛋白(AFP)由于其特異度和敏感度低等問題[3]，2010版美國肝病研究學(xué)會(AASLD)指南已不將AFP作為篩查指標(biāo)[4]。甲胎蛋白異質(zhì)體(AFP-L3)2005年已被美國食品和藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)用于肝癌的臨床診斷[5]。丙型肝炎病毒(HCV)感染與肝硬化及肝癌有著密切的關(guān)系[6],但HCV-RNA與甲胎蛋白異質(zhì)體百分比(AFP-L3/AFP)比值在肝硬化或肝癌中有無相關(guān)性及由肝硬化發(fā)展為肝癌的過程中AFP-L3/AFP及HCV-RNA變化，目前還未見相關(guān)報(bào)道。本研究測定80例丙型肝炎患者的血清AFP-L3/AFP及HCV-RNA，同時(shí)對44例肝硬化患者隨訪3、6個(gè)月測定AFP-L3/AFP及HCV-RNA水平。現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料收集2011年1月至2014年12月期間在本院被臨床確診為HCV患者80例，其中男56例，女24例，年齡為15～80歲。按臨床診斷將其分為單純HCV感染者引起的肝硬化患者44例(肝硬化組)，單純HCV感染引起的肝癌患者36例(丙型肝炎肝癌組)，將肝硬化組進(jìn)行3、6個(gè)月的隨訪，隨訪結(jié)果分為轉(zhuǎn)移肝癌組及治療有效組。80例丙型肝炎病毒感染者的確診，依據(jù)是丙型肝炎抗體及HCV-RNA同時(shí)陽性，且均排除乙型肝炎、慢性酒精性肝炎、藥物性肝炎、自身免疫性肝炎、遺傳性肝病等其他肝病引起的肝臟損傷；臨床診斷肝癌的標(biāo)準(zhǔn)符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2011年版)》。同時(shí)選擇取60例健康體檢者的血清作為對照組，年齡為18～80歲。所有的患者都被告知試驗(yàn)?zāi)康牟⒑炇鹬橥鈺?/p>

1.2方法

1.2.1采集樣本及保存所有研究對象均空腹采集外周血，分離血清標(biāo)本后于-80 ℃保存，統(tǒng)一檢測。

1.2.2AFP-L3檢測親和微量離心柱系統(tǒng)及試劑由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供。總AFP與AFP-L3由美國雅培公司提供，儀器為美國雅培i2000全自動化學(xué)發(fā)光儀。AFP-L3/AFP正常參考值為小于10%。

1.2.3HCV-RNA檢測采用FQ-PCR技術(shù)，試劑由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供，儀器為美國PE公司生產(chǎn)的PE 5700核酸擴(kuò)增儀，先提取HCV-RNA后，在Light Cycler熒光PCR擴(kuò)增儀Roche公司上進(jìn)行檢測。試劑配制，樣本處理和循環(huán)擴(kuò)增條件嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后由電腦自動分析計(jì)算出定量結(jié)果。HCV-RNA的最低檢測下限為80 copy/mL。

1.3研究隨訪肝硬化組分別進(jìn)行3、6個(gè)月的隨訪，且每隔1周檢測HCV-RNA與AFP-L3/AFP，同時(shí)為隨訪者檢查B超和肝功能試驗(yàn)，當(dāng)懷疑發(fā)展為肝癌時(shí)，采取計(jì)算機(jī)斷層掃描(CT)和磁共振成像(MRI)作進(jìn)一步檢查，如果通過醫(yī)學(xué)成像技術(shù)無法確證時(shí)，采用細(xì)針穿刺技術(shù)確證。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17．0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。不同組間HCV-RNA及AFP-L3/AFP比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1丙型肝炎患者與對照組HCV-RNA、AFP-L3/AFP比較80例單純HCV患者血清平均HCV-RNA及AFP-L3/AFP分別為7.15×103copy/mL、44.3%，與對照組比較(400 copy/mL、1.1%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2相關(guān)性比較80例單純HCV患者的HCV-RNA與AFP-L3/AFP呈正相關(guān)。 HCV-RNA<103copy/mL的4例，AFP-L3/AFP平均比值為2.50%；1035.0×107copy/mL的8例，AFP-L3/AFP平均比值為72.50%。

2.3兩組HCV-RNA、AFP-L3/AFP比較肝硬化組平均HCV-RNA、AFP-L3/AFP分別為8.33×109copy/mL、3.35%與丙型肝炎肝癌組(5.71×107copy/mL、94.33%)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.4隨訪情況44例肝硬化患者3個(gè)月隨訪有4例發(fā)展為肝癌，6個(gè)月后有8例發(fā)展為肝癌。動態(tài)監(jiān)測HCV-RNA、AFP-L3/AFP發(fā)現(xiàn)，HCV-RNA降低，AFP-L3/AFP升高是肝硬化發(fā)展為肝癌的警戒點(diǎn)，比影像學(xué)早發(fā)現(xiàn)6～12個(gè)月。HCV-RNA降低，AFP-L3/AFP比值降低或不變是病情治療有效的標(biāo)志。見表1。

表1　對肝硬化組隨訪3、6個(gè)月HCV-RNA及AFP-L3/AFP變化分析

3討論

丙型肝炎是隱匿的疾病，慢性丙型肝炎患者可能發(fā)展為肝硬化、肝癌。早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是提高丙型肝炎肝癌患者的最佳途徑。本研究丙型肝炎患者患肝癌的風(fēng)險(xiǎn)比健康人群高。HCV患者的HCV-RNA與AFP-L3/AFP呈正相關(guān)。這表明肝細(xì)胞癌變與丙型肝炎病毒血癥有關(guān)。即在一定程度內(nèi)HCV-RNA越高，HCV復(fù)制傳染性越強(qiáng)，丙型肝炎患者患肝癌的風(fēng)險(xiǎn)越大。

本研究丙型肝炎肝癌組平均HCV-RNA水平(5.71×107copy/mL)低于肝硬化組HCV-RNA水平(8.33×109copy/mL),與董西華等[7]研究報(bào)道一致。這一現(xiàn)象的能原因如下：(1)丙型肝炎由肝硬化進(jìn)展到肝癌，大量肝細(xì)胞發(fā)生癌變壞死，丙型肝炎病毒復(fù)制活躍性減弱甚者停止復(fù)制；(2)在疾病治療過程中，患者接受抗病毒免疫，HCV病毒復(fù)制受限或患者血清中存在PCR抑制劑[7]；(3)在疾病進(jìn)展過程中，由于藥物治療或HCV自身等因素，HCV發(fā)生機(jī)構(gòu)基因的改變。

HCV引起肝硬化患者不能單一只看HCV-RNA變化。即HCV-RNA降低不一定提示治療病情控制，HCV-RNA升高也不一定是病情的加重。AFP-L3是原發(fā)性肝癌高度特異性及惡性標(biāo)志物，表達(dá)AFP-L3的肝癌細(xì)胞有早期血管侵襲和肝內(nèi)轉(zhuǎn)移的傾向[8]，對于肝硬化患者動態(tài)聯(lián)合檢測HCV-RNA、AFP-L3/AFP。肝硬化患者在一段時(shí)期內(nèi)HCV-RNA降低，AFP-L3/AFP比值降低或不變，提示病情治療有效。相反，HCV-RNA降低，AFP-L3/AFP比值升高，則提示患者有向肝癌發(fā)展的可能，此時(shí)有可能比其他影像技術(shù)提早6～12個(gè)月發(fā)現(xiàn)肝癌。

通過對肝硬化患者隨訪發(fā)現(xiàn)，動態(tài)監(jiān)測HCV-RNA及AFP-L3/AFP能比影像學(xué)早發(fā)現(xiàn)6～12個(gè)月的肝癌。與有研究表明AFP-L3可比超聲、影像早3～12個(gè)月檢出基本一致[9]。但與AFP-L3可比影像學(xué)提前3年半預(yù)警HCC發(fā)生不一致[10]。可能與調(diào)查人群的個(gè)體差異、精神壓力、臨床用藥及隨訪檢測的頻率等因素有關(guān)。

總之，丙型肝炎患者患肝癌的風(fēng)險(xiǎn)高，臨床醫(yī)生應(yīng)動態(tài)聯(lián)合檢測HCV-RNA、AFP-L3/AFP。可以比其他影像技術(shù)提早6～12個(gè)月發(fā)現(xiàn)肝癌。

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Hepatitis C patients serum HCV-RNA copy number and AFP-L3 percentage correlation analysis*

YangZili,MaYongneng,PengXiujuan,LiuHuiling,ZhangJie

(DepartmentofClinicalLaboratory,MianyangCitythethirdPeople′sHospitalofSichuanProvince,Mianyang,Sichuan621000,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the HCV patients with HCV-RNA and AFP different plastid percentage (AFP-L3/AFP) correlation,analysis of liver cirrhosis to liver cancer caused by hepatitis c in the process of the development of HCV-RNA and AFP-L3/AFP change characteristics.MethodsCollected clinical confirmed simple HCV patients 80 cases,including 44 patients with cirrhosis of the liver and 36 cases of HCV liver cancer group and liver cirrhosis group were followed up at 3,6 months,follow-up results are divided into transfer of liver cancer group and treatment group,in addition to choose 60 cases of healthy people as control group.Using case-control study.Between different groups of HCV-RNA and AFP-L3/AFP compared by t test.ResultsThe liver cirrhosis group average HCV-RNA,AFP-L3/AFP for 7.15×103 copy/mL,44.3%,compared with the control group 400 copy/mL,1.1%,the difference was statistically significant(P<0.05).Liver cirrhosis group average HCV-RNA,AFP-L3/AFP for 8.33×109 copy/mL,3.35%,and HCV liver cancer group (5.71×107 copy/mL,94.33%),the difference was statistically significant(P<0.05).3 months follow-up of patients with liver cirrhosis have 4 cases for the development of liver cancer,8 cases after 6 months for the development of liver cancer.ConclusionThe patients with cirrhosis caused by hepatitis c virus (HCV) should be combined,dynamic detection of HCV RNA and AFP -L3/AFP,in order to early discover the liver cancer.

Key words:hepatitis C virus；alpha fetal protein plastid percentage；correlation

(收稿日期：2015-12-25)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.009

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)09-1180-02

*基金項(xiàng)目：綿陽市級基金資助項(xiàng)目(201232)；綿陽市科技局基金資助項(xiàng)目(14S-ZC-06)。

作者簡介：楊自力，女，主管檢驗(yàn)技師，主要從事自身免疫、分子生物學(xué)研究。