體液細胞計數(shù)自動化檢測影響因素的研究

滕士階，周　彥△，徐承來，劉小林，賈　嶸，夏正萍，王　琨

(連云港市第二人民醫(yī)院：1.檢驗科；2.呼吸內(nèi)科，江蘇連云港 222023)

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體液細胞計數(shù)自動化檢測影響因素的研究

滕士階1，周彥1△，徐承來1，劉小林1，賈嶸2，夏正萍1，王琨1

(連云港市第二人民醫(yī)院：1.檢驗科；2.呼吸內(nèi)科，江蘇連云港 222023)

摘要:目的研究體液標本采集后不同的因素對檢測結(jié)果的影響。方法比較同一體液標本采集后是否使用抗凝劑、抗凝劑種類的選擇、樣本采集后的保存溫度、放置不同時間后結(jié)果的穩(wěn)定性，對結(jié)果進行分析，得出不同因素對檢測結(jié)果的影響。結(jié)果腦脊液標本是否選用抗凝劑對結(jié)果無明顯不同；胸腹腔積液采用EDTA-K2抗凝，所有的檢測項目結(jié)果都比較穩(wěn)定，而未使用抗凝劑和使用肝素鋰抗凝的標本保存2 h后有核細胞計數(shù)結(jié)果降低，特別是單個核細胞計數(shù)值明顯降低；體液標本分別在室溫、4 ℃中保存1 h后，數(shù)據(jù)開始有變動，單個核細胞計數(shù)值有減少的趨勢，紅細胞計數(shù)不論在室溫還是4 ℃保存結(jié)果都很穩(wěn)定。結(jié)論排除上述影響因素的干擾，體液常規(guī)檢查自動化可為臨床提供快速、可靠的數(shù)據(jù)。

關(guān)鍵詞:診斷儀器和設備；體液常規(guī)檢查；抗凝劑；保存溫度；保存時間

胸腹腔積液、腦脊液等體液標本在進行常規(guī)檢查時存在速度慢、重復性差、缺乏生物安全保護等缺點，之前有過關(guān)于用尿沉渣分析儀和血細胞分析儀進行體液細胞計數(shù)的報道[1-2]，現(xiàn)階段出現(xiàn)了具有專門針對體液細胞計數(shù)、分類功能的血細胞分析儀，實現(xiàn)了體液細胞計數(shù)、分類的自動化和標準化。本文將進一步了解體液樣本采集有無使用抗凝劑、抗凝劑種類的選擇、樣本采集后的保存溫度、放置不同時間結(jié)果的穩(wěn)定性等方面因素對檢測結(jié)果的影響，從而將各影響因素降到最低，為臨床診療工作提供可靠數(shù)據(jù)[3]。

1材料與方法

1.1儀器Sysmex XT-4000i全自動血細胞分析儀(以下簡稱XT-4000i，日本希森美康株式會社)；真空采血管(成都普什醫(yī)藥塑料包裝有限公司)；三洋冰箱(日本原裝)。

1.2試劑XT-4000i所用試劑均由日本希森美康株式會社提供。稀釋液(EPK)批號為G0530，嗜堿細胞溶血劑(FB)批號為R0025，白細胞分類溶血劑(FFD)批號為R0034，血紅蛋白溶血劑(SLS)批號為A0036,染色液(FFS)批號為A0008，均為原裝配套試劑。

1.3方法

1.3.1標本采集由臨床醫(yī)師采集體液標本，分別注入未抗凝、EDTA-K2抗凝、肝素鋰抗凝的真空管至標定刻度，立即送檢。

1.3.2標本檢測體液標本采集時分為未抗凝、EDTA-K2抗凝、肝素鋰抗凝3管。標本采集后立即上機進行檢測，記錄細胞計數(shù)、分類結(jié)果，通過將3管結(jié)果的比較來發(fā)現(xiàn)標本有無使用抗凝劑、抗凝劑種類的選擇對檢測結(jié)果的影響；再將每管標本分成2份，1份于室溫保存，1份4 ℃保存，分別在1、2、3、4 h上機檢測，記錄結(jié)果，觀察同一標本在不同的保存溫度、放置不同的時間后結(jié)果的穩(wěn)定性。

1.4統(tǒng)計學處理因細胞數(shù)在正常范圍內(nèi)標本對本研究無意義，故選擇采用直線相關(guān)和回歸分析。

2結(jié)果

2.1抗凝劑的選擇對檢測結(jié)果的影響選取的26份腦脊液標本分為未使用抗凝劑、使用EDTA-K2抗凝、使用肝素鋰抗凝3管，采集后立即上機檢測，將測定的有核細胞計數(shù)、分類[單核細胞(MN)絕對值、MN百分比]及紅細胞計數(shù)結(jié)果進行比較，未發(fā)現(xiàn)結(jié)果有明顯不同，見表1；選取的50份胸腹腔積液標本經(jīng)EDTA-K2抗凝保存后，所有的檢測項目結(jié)果都比較穩(wěn)定，而未使用抗凝劑和使用肝素鋰抗凝的標本保存2 h后有核細胞計數(shù)[多核白細胞(PMN)絕對值、PMN百分比]結(jié)果降低，特別是多個核細胞計數(shù)結(jié)果明顯降低，見表2。

2.2不同保存溫度、不同時間對檢測結(jié)果的影響無論在室溫或4 ℃中保存1 h后，體液單個核細胞數(shù)及百分比有減少趨勢；相對的，多個核細胞數(shù)及百分比有增高趨勢。體液紅細胞計數(shù)不論在室溫還是4 ℃保存結(jié)果都很穩(wěn)定,見表3。

表2　抗凝劑的選擇對胸腹腔積液檢測結(jié)果的影響(n=50)

表3　不同保存溫度、不同時間對檢測結(jié)果的影響

3討論

腦脊液是存在于腦室及蛛網(wǎng)膜下腔中的無色透明液體，主要功能是保護腦和脊髓免受外力震蕩損傷、調(diào)節(jié)顱內(nèi)壓、運送營養(yǎng)物質(zhì)并運出代謝產(chǎn)物等；漿膜腔積液是胸腔積液、腹腔積液、心包腔積液和關(guān)節(jié)腔積液的總稱，一般情況下，漿膜腔內(nèi)僅含有少量的液體起潤滑作用，病理情況下，漿膜腔內(nèi)有大量的液體潴留而形成漿膜腔積液。根據(jù)產(chǎn)生的原因及性質(zhì)不同，將漿膜腔積液分為漏出液和滲出液。

體液的細胞計數(shù)及有核細胞分類對于相關(guān)疾病的診斷和治療有著十分重要的意義。腦脊液紅細胞計數(shù)增多常見于穿刺損傷或出血性病變；有核細胞計數(shù)增多一般見于各種類型的腦膜炎；腦脊液中發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞對于中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤有確診價值，其陽性率為15%～40%，轉(zhuǎn)移性腫瘤的陽性率高于原發(fā)性腫瘤；漿膜腔積液紅細胞計數(shù)對于鑒別漏出液和滲出液意義不大，但惡性腫瘤引起的積液中血性積液占50%～85%，如能排除外傷因素，漿膜腔積液紅細胞計數(shù)增多最常見的原因是惡性腫瘤；有核細胞計數(shù)對于鑒別漏出液和滲出液有一定參考價值，漏出液中有核細胞數(shù)量常在100×106/L以下，滲出液中有核細胞數(shù)量常在500×106/L以上。積液中嗜酸性粒細胞增多是指嗜酸性粒細胞計數(shù)超過白細胞總數(shù)10%以上。引起胸腔積液嗜酸性粒細胞增多的最常見原因是血胸和氣胸，以及寄生蟲感染、過敏綜合征等，引起腹腔積液嗜酸性粒細胞增多最常見的原因有慢性腹膜透析、充血性心力衰竭、血管炎、淋巴瘤等。間皮細胞在人工有核細胞分類時通常歸入“單個核細胞”中，主要出現(xiàn)在漏出液中，增多常提示漿膜受刺激或漿膜損傷。

對于胸腹腔積液、腦脊液等體液標本來說，一直以來都是沿用人工方法進行細胞計數(shù)、分類，檢測結(jié)果易受主觀因素的影響，結(jié)果的準確性、重復性是不容易保證的，而且存在速度慢、重復性差、操作人員缺乏生物安全保護等缺點。多功能血液體液分析一體機實現(xiàn)了體液細胞計數(shù)、分類的自動化和標準化，但是儀器必須在使用前，對由儀器、試劑、校準品、質(zhì)控品共同組成的檢測系統(tǒng)進行充分和正確的應用評價[4-5]。對于XT-4000i所報告的“高熒光強度細胞”(HF-BF,即可疑幼稚細胞)不可輕易報告，應人工在顯微鏡下進行確認[6]。本文通過人為地設置一些影響因素來對XT-4000i在體液自動化檢測方面進行評價，得出“體液標本采集后必須用EDTA-K2抗凝(腦脊液標本可不使用抗凝劑)并立即進行檢驗”的結(jié)論。將可能影響分析前質(zhì)量保證的因素(如體液樣本采集有無使用抗凝劑、抗凝劑種類的選擇、樣本采集后的保存溫度、不同時間結(jié)果的穩(wěn)定性等)降到最低[7]，XT-4000i可以準確、快速地進行體液細胞計數(shù)及分類，為臨床診療工作提供快速、真實、可靠的數(shù)據(jù)。

參考文獻

[1]章文.UF-100尿沉渣分析儀在小兒腦脊液及漿膜腔積液檢查中的應用[J].國外醫(yī)學臨床生物化學與檢驗學分冊,2004，25(3)：281.

[2]胡曉衛(wèi)，白雯.自動化分析儀在胸腹水細胞計數(shù)及分類中的應用[J].陜西醫(yī)學雜志,2009,20(7)：928-929.

[3]陳德東，陳燕，陳忠明.影響血液、體液常見臨床標本分析前質(zhì)量的因素及控制措施[J].福建醫(yī)藥雜志,2006,28(4)：99-101.

[4]魏昊，叢玉隆.醫(yī)學實驗室質(zhì)量管理與認可指南[M].北京：中國計量出版社，2004：59-63.

[5]徐承來，張麗.CD-3500型全自動血細胞分析儀性能評價[J].蚌埠醫(yī)學院學報,2011,36(11)：1257-1259.

[6]中華醫(yī)學會檢驗分會全國血液學復檢專家小組，中國檢驗醫(yī)學雜志編輯委員會.全國血液學復檢專家小組工作會議紀要暨血細胞自動計數(shù)復檢標準釋疑[J].中華檢驗醫(yī)學雜志，2008，31(4)：380-382.

[7]榮愛紅，余文波.影響臨床檢驗結(jié)果的常見因素及控制方法[J].中國實驗診斷學,2005,9(3)：469.

(收稿日期：2016-01-28)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.064

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)09-1290-03

△通訊作者,E-mail：xclzlxch@163.com。

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