傣藥“雅解沙把”對大鼠慢性酒精性胃黏膜損傷的保護作用

郭沛鑫，李奕融，鄭進，陳普，張超

(云南中醫學院，昆明650500)

·基礎研究·

傣藥“雅解沙把”對大鼠慢性酒精性胃黏膜損傷的保護作用

郭沛鑫，李奕融，鄭進，陳普，張超

(云南中醫學院，昆明650500)

目的 探討傣藥“雅解沙把”對大鼠慢性酒精性胃黏膜損傷的保護作用。方法 選擇SD大鼠32只，隨機分為空白對照組、模型對照組、“雅解沙把”低劑量組、“雅解沙把”高劑量組，每組8只。除空白對照組外，其余三組采用乙醇灌胃法(連續12周)建立慢性酒精性胃黏膜損傷模型。造模第2周開始,“雅解沙把”低、高劑量組分別給予“雅解沙把”水提液灌胃(含“雅解沙把”生藥分別為0.27、2.43 g/kg)，空白對照組及模型對照組等量蒸餾水灌胃，每日1次。末次灌胃2 h，采用毛細管眶內取血，檢測血清巨噬細胞趨化蛋白1(MCP-1)。取血后處死大鼠，取胃組織，測量胃潰瘍面積，計算潰瘍指數；制作胃組織切片，HE染色，光鏡下觀察胃黏膜組織病理變化。結果 空白對照組無胃潰瘍形成。模型對照組及“雅解沙把”低、高劑量組均有胃潰瘍形成，模型對照組胃潰瘍面積及潰瘍指數明顯高于“雅解沙把”低、高劑量組(P<0.05或<0.01)，“雅解沙把”低、高劑量組比較差異無統計學意義(P均>0.05)。組織病理切片觀察發現，“雅解沙把”低、高劑量組胃黏膜損傷程度明顯輕于模型對照組，“雅解沙把”高劑量組胃黏膜損傷程度低于“雅解沙把”低劑量組，但差別不大。空白對照組血清MCP-1水平為(472.33±96.11)pg/mL，模型對照組為(676.55±157.92)pg/mL，“雅解沙把”低劑量組為(348.58±55.58)pg/mL，“雅解沙把”高劑量組為(350.58±93.77)pg/mL。模型對照組血清MCP-1水平明顯高于其余三組(P均<0.01)，“雅解沙把”低、高劑量組及空白對照組兩兩比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。結論 傣藥“雅解沙把”對大鼠慢性酒精性胃黏膜損傷具有保護作用；其作用機制可能與降低血清MCP-1水平有關。

酒精性胃黏膜損傷；傣藥；雅解沙把；巨噬細胞趨化蛋白1；大鼠

傣藥“雅解沙把”全方由葛根、百樣解、傣百解、大黃藤等組成，對乙醇所致的胃脘痛有較好的治療效果[1，2]。本課題組前期研究發現，“雅解沙把”能延長小鼠醉酒潛伏期、縮短醉酒持續期，降低小鼠重度酒精中毒的病死率[3，4]。但其對胃黏膜損傷是否具有保護作用，目前尚無相關研究。2015年7～10月，我們觀察了“雅解沙把”對乙醇所致的大鼠慢性胃黏膜屏障損傷的保護作用。現分析結果，并探討其作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料 SPF級SD大鼠32只，雌雄各半，7～8周齡，體質量180～220 g，由四川醫學科學院實驗動物研究所提供，動物許可證號：SCXK(川)2013-12；飼養于云南中醫學院SPF級動物房。“雅解沙把”(商品名百解膠囊)，云南省西雙版納州傣醫醫院院內制劑，滇藥制字(Z)20082252K，規格：0.2 g/粒。實驗前由本實驗室提取膠囊內容物(以下稱“雅解沙把”水提液)。共提取3次，第1次加3倍水，提取30 min；第2、3次均加2倍水，提取20 min；合并3次提取液，濃縮至含1 g生藥/mL，臨用前配制至所需濃度。M200 PRO酶標儀，北京博宇騰輝科貿有限公司。無水乙醇，天津市致遠化學試劑有限公司；巨噬細胞趨化蛋白1(MCP-1)測試盒，南京建成生物工程研究所。其余試劑均為國產分析純。

1.2 動物分組及藥物處理 隨機將SD大鼠分為空白對照組、模型對照組、“雅解沙把”低劑量組(含“雅解沙把”生藥0.27 g/kg)、“雅解沙把”高劑量組(含“雅解沙把”生藥2.43 g/kg)，每組8只。參照文獻[5，6]方法，除空白對照組外，其余三組給予乙醇灌胃造模，1次/d，共12周。第1～4周每日灌胃40%乙醇10.00 mL/kg，第5～8周每日灌胃50%乙醇11.25 mL/kg，第9～12周每日灌胃50%乙醇12.50 mL/kg。造模第2周開始，“雅解沙把”低、高劑量組分別給予“雅解沙把”水提液灌胃，生藥含量分別為0.27、2.43 g/kg；空白對照組和模型對照組等量蒸餾水灌胃；均每日1次。末次給藥后，眶內取血2 mL，保存備檢；取血后，頸椎脫臼處死大鼠，取胃組織。

1.3 相關指標觀察

1.3.1 胃黏膜損傷情況 取各組胃組織，以游標卡尺測量胃潰瘍面積，計算潰瘍指數；按Guth標準進行胃黏膜損傷評分[7]：正常胃黏膜為0分，點狀損傷計1分，病損<1 mm計2分，病損≥1～<2 mm計3分，病損≥2～<4 mm計4分，病損≥4 mm計5分。損傷寬度>2 mm，損傷指數計分×2。潰瘍指數即全胃各病灶計分的總和。

1.3.2 胃黏膜組織病理觀察 取各組胃組織，沿胃小彎至胃大彎切取1條胃黏膜組織(寬約10 mm)，10%甲醛固定，石蠟包埋，5 μm厚切片，HE染色，光鏡下觀察胃黏膜組織病理改變。

1.3.3 血清MCP-1檢測 取眶內血2 mL，3 000 r/min離心10 min，分離血清。采用ELISA法檢測血清MCP-1。

2 結果

2.1 各組胃黏膜損傷情況比較 空白對照組無胃潰瘍形成。模型對照組及“雅解沙把”低、高劑量組均有胃潰瘍形成；模型對照組胃潰瘍面積及潰瘍指數明顯高于“雅解沙把”低、高劑量組(P<0.05或<0.01)，而“雅解沙把”低、高劑量組比較差異無統計學意義(P均>0.05)。各組胃潰瘍面積及潰瘍指數比較見表1。

表1 各組胃潰瘍面積及潰瘍指數比較

注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.2 各組胃黏膜組織病理觀察 空白對照組胃黏膜光滑，黏膜上皮完整，腺體排列整齊，未見出血、糜爛、潰瘍，皺襞光整，未見明顯隆起。模型對照組胃黏膜明顯充血、水腫，有新鮮出血附著，可見點灶狀糜爛及條線狀潰瘍，黏膜變白，皺襞隆起；黏膜結構排列紊亂失去完整性及連續性，可見黏膜上皮脫落，黏膜下層血管擴張充血，大量炎性細胞浸潤。“雅解沙把”低劑量組有少量點狀及線狀潰瘍，充血水腫較輕，有黏膜上皮脫落，可見炎性細胞浸潤。“雅解沙把”高劑量組胃黏膜上皮細胞清晰，充血水腫較輕，可見少量黏膜上皮脫落及中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞浸潤。模型對照組胃黏膜損傷情況明顯重于“雅解沙把”低、高劑量組。“雅解沙把”高劑量組胃黏膜損傷程度低于“雅解沙把”低劑量組，但差別不大。見插頁Ⅱ圖4。

2.3 各組血清MCP-1水平比較 空白對照組血清MCP-1水平為(472.33±96.11)pg/mL，模型對照組為(676.55±157.92)pg/mL，“雅解沙把”低劑量組為(348.58±55.58)pg/mL，“雅解沙把”高劑量組為(350.58±93.77)pg/mL。模型對照組血清MCP-1水平明顯高于其余三組(P均<0.01)，“雅解沙把”低、高劑量組及空白對照組兩兩比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。

3 討論

胃脘痛是指上腹胃脘部近心窩處經常發生疼痛為主癥的病證，可伴脘腹脹滿，噯腐吞酸，惡心嘔吐，不思食，大便或結或溏等脾胃癥狀，以及神倦乏力、面黃消瘦、浮腫等全身癥狀。胃潰瘍、急慢性胃炎、胃黏膜脫垂等均可出現胃脘痛，其主要原因為胃黏膜屏障損傷[8，9]。目前多數學者認為，胃黏膜屏障受損與胃黏膜攻擊因子和防御因子的平衡失調有關[10，11]。攻擊因子主要包括胃酸、胃蛋白酶、幽門螺桿菌、酒精、炎癥等，防御因子主要包括黏膜屏障、碳酸氫鹽屏障及黏膜下血流屏障等。減弱攻擊因子或增強防御因子均能達到保護胃黏膜屏障的作用[12，13]。

胃黏膜屏障損傷過程往往伴隨炎癥反應的發生。在此過程中，胃黏膜肥大細胞釋放出5-羥色胺、白介素、血管活性腸肽、一氧化氮等炎性介質，使毛細血管通透性增加，大量蛋白滲漏，胃黏膜血流減少，導致胃黏膜微循環障礙，同時炎癥介質可介導淋巴細胞、單核細胞和中性粒細胞的聚集、黏附、浸潤，導致胃黏膜損傷[14，15]。另外，胃黏膜肥大細胞可釋放組胺與胃黏膜壁細胞H2受體結合，刺激胃酸分泌，加重胃黏膜損傷[16，17]。MCP-1屬于趨化因子家族成員之一。以往研究認為，MCP-1由單核細胞、巨噬細胞和成纖維細胞分泌[18]。近年研究發現，胃黏膜肥大細胞顆粒中纖維蛋白溶酶可促進人內皮細胞MCP-1表達增加[19，20]。MCP-1可通過不同的跨膜信號轉導通路，激活與細胞運動、侵襲和存活等相關的各種基因的轉錄；通過趨化作用，趨化白細胞亞群的召集和運輸；調控樹突狀細胞和淋巴細胞的發育成熟，與炎癥過程和免疫調節有關[21]。胃癌的發生、發展常伴隨著MCP-1高表達[22，23]。MCP-1對單核細胞、T細胞和NK細胞均有趨化作用，可誘導單核細胞、內皮細胞表達黏附分子，使各種炎性細胞尤其是單核細胞向病變部位聚集[24，25]。因此，血清MCP-1水平對評價藥物效果、病情發展和預后具有重要意義。

胃脘痛屬傣醫“攏接崩”的范疇，傣醫認為，該病的發生是由于體內“四塔”(風、火、水、土)、“五蘊”(色、識、受、想、行)功能失調(尤其是風、水、土失調)及“五蘊”受損引起。“雅解沙把”為傣藥復方制劑，全方由葛根、百樣解、傣百解、大黃藤等組成。該制劑通過調平“四塔”、“五蘊”，行氣破瘀，消食消脹，理氣止痛，對酒精性胃脘痛有較好的治療作用。因酒精性胃脘痛與胃黏膜屏障損傷及炎癥因子侵襲密切相關。因此推測，通過降低炎癥因子的表達、消除炎癥反應可保護胃黏膜屏障。本研究結果顯示，模型對照組及“雅解沙把”低、高劑量組均有胃潰瘍形成；其中，模型對照組胃潰瘍面積及潰瘍指數明顯高于“雅解沙把”低、高劑量組，但“雅解沙把”低、高劑量組比較差異無統計學意義；胃黏膜組織病理顯示，“雅解沙把”低、高劑量組胃黏膜損傷均輕于模型對照組，“雅解沙把”高劑量組胃黏膜損傷程度低于“雅解沙把”低劑量組，但差別不大；模型對照組血清MCP-1水平明顯高于空白對照組和“雅解沙把”低、高劑量組，“雅解沙把”低、高劑量組及空白對照組兩兩比較差異均無統計學意義。證實“雅解沙把”對乙醇導致的胃黏膜損傷具有保護作用。

綜上所述，“雅解沙把”對大鼠慢性酒精性胃黏膜損傷具有保護作用；其機制可能是通過降低血清MCP-1水平，繼而減少胃黏膜屏障的攻擊因子。

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國家自然科學基金資助項目(81160555)。

張超(E-mail： zhangc19@21cn.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.24.008

R573.3

A

1002-266X(2016)24-0026-03

2015-11-15)