結直腸癌組織中ITGβ-4表達及其臨床意義

宦大為，惠林萍，王星，高宏建，孫潔，孫虓，王翠芳

(1 沈陽醫學院附屬中心醫院，沈陽110024；2 沈陽市婦嬰醫院；3 中國醫科大學附屬第四醫院；4 沈陽市肛腸醫院)

結直腸癌組織中ITGβ-4表達及其臨床意義

宦大為1，2，惠林萍3，王星1，高宏建4，孫潔1，孫虓1，王翠芳1

(1 沈陽醫學院附屬中心醫院，沈陽110024；2 沈陽市婦嬰醫院；3 中國醫科大學附屬第四醫院；4 沈陽市肛腸醫院)

目的 探討整合素β-4(ITGβ-4)在結直腸癌發生、發展中的作用。方法 選擇結直腸癌組織125例份(腸癌組)及配對正常結直腸組織75例份(正常組)，另選結直腸腺瘤組織28例份(腺瘤組)。采用免疫組化法檢測各組ITGβ-4表達；分析結直腸癌組織中ITGβ-4表達與患者臨床病理參數及生存期(OS)的關系。結果 正常組、腺瘤組及腸癌組ITGβ-4高表達率分別為6.67%(5/75)、14.29%(4/28)、40.00%(50/125)，腸癌組ITGβ-4高表達率明顯高于正常組及腺瘤組(P均<0.01)，而正常組與腺瘤組比較無統計學差異(P>0.05)。結直腸癌組織中ITGβ-4高表達與患者腫瘤組織分化程度、TNM分期、浸潤深度有關(P均<0.05)，與腫瘤發病部位、淋巴結轉移、5年內預后無關(P均>0.05)。有5年以上預后隨訪資料的66例患者中，ITGβ-4高表達者36例，平均OS為71.8個月；ITGβ-4低表達者30例，平均OS為74.5個月；二者比較P>0.05。結論 結直腸癌組織中ITGβ-4表達升高，其異常表達在結直腸癌的發生、發展過程中起促進作用。

結直腸癌；整合素β-4；免疫組織化學；生存分析

近年來結直腸癌的發病率呈明顯上升趨勢，但其發病機制目前尚未完全闡明。整合素是廣泛存在于動植物細胞表面的一類細胞跨膜糖蛋白。有研究發現，整合素對多種腫瘤細胞的增殖、侵襲、轉移過程具有重要作用，其中整合素β-4(ITGβ-4)可能與結直腸癌的發生、發展有關[1]。本研究探討ITGβ-4在結直腸癌發生、發展中的作用。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2000年7月～2015年9月沈陽醫學院附屬中心醫院手術切除的原發性結直腸癌組織標本125例份(腸癌組)，均經術后組織病理檢查明確診斷。患者男61例、女64例，年齡36～84(64.78±10.36)歲；組織學類型：腺癌99例，黏液腺癌14例，印戒細胞癌12例；分化程度：99例腺癌中，高分化29例、中分化56例、低分化14例；TNM分期：Ⅰ 期24例，Ⅱ 期54例，Ⅲ 期47例；無淋巴結轉移者78例，有淋巴結轉移者47例。配對選擇癌組織遠切端正常組織(距離癌邊緣>5 cm，經組織病理檢查證實無癌細胞浸潤)75例份(正常組)，收集同期手術切除的腺瘤組織28例份(腺瘤組)，均經術后組織病理學檢查證實。所有患者術前未行放化療。

1.2 ITGβ-4表達檢測 采用免疫組化SP法。取手術切除的組織標本，10%中性甲醛液固定，石蠟包埋后，4 μm厚切片。切片經二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫苯、水化。在pH 6.0的檸檬酸中高溫、高壓修復，3%過氧化氫孵育15 min阻斷內源性過氧化物酶活性，血清封閉，加入ITGβ-4抗體(1∶100)4 ℃濕盒內孵育過夜；次日PBS洗3次，滴加生物素標記的二抗；PBS洗3次，鏈霉菌素抗生物素蛋白-過氧化物酶孵育；PBS洗3次，DAB顯色，蘇木素復染，鹽酸乙醇分化，自來水返藍，中性樹膠封片。以PBS代替一抗作為陰性對照。結果判斷：陽性著色主要定位于細胞質，呈淡黃色至棕黃色。染色結果采用雙評分半定量法，高倍鏡下根據染色強度和陽性細胞所占比例綜合判定。染色強度：不著色0分，淡黃色1分，黃色2分，棕黃色3分。陽性細胞比例：≤25%為0分，>25%～≤50%為1分，>50%～≤75%為2分，>75%為3分。兩項評分之和0～2分為低表達，≥3分為高表達。

1.3 結直腸癌組織中ITGβ-4表達與患者生存期(OS)的關系 術后電話隨訪，每6個月隨訪1次，隨訪截至2011年12月。OS設定為從手術當日至患者死亡或隨訪截至時間。分析有5年以上預后隨訪資料患者ITGβ-4表達與OS的關系。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件。計數資料比較采用非參數秩和檢驗。生存分析采用Kaplan Meier法，Log-rank檢驗進行比較。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組ITGβ-4表達比較 腸癌組ITGβ-4高表達50例(40.00%)，腺瘤組織ITGβ-4高表達4例(14.29%)，正常組ITGβ-4高表達5例(6.67%)。腸癌組ITGβ-4高表達率明顯高于腺瘤組及正常組(P均<0.01)，而正常組與腺瘤組比較無統計學差異(P>0.05)。

2.2 結直腸癌組織中ITGβ-4高表達與患者臨床病理參數的關系 結直腸癌組織中ITGβ-4高表達與患者TNM分期、腫瘤浸潤深度和組織分化程度有關(P均<0.05)，與患者性別、年齡、組織學類型、發病部位、淋巴結轉移、復發及5年內預后無關(P均>0.05)。見表1。

表1 結直腸癌組織中ITGβ-4高表達與患者臨床病理參數的關系

2.3 結直腸癌組織中ITGβ-4表達與患者OS的關系 有5年以上預后隨訪資料的66例患者中，ITGβ-4高表達者36例，平均OS為71.8(95%CI為55.6～88.0)個月；ITGβ-4低表達者30例，平均OS為74.5(95%CI為55.1～93.9)個月。二者比較P>0.05。

3 討論

整合素是由α和β兩個亞單位經非共價鍵連接組成的異源二聚體。現已發現18種α亞單位和8種β亞單位，它們按不同的組合構成二十多種整合素[2]。近年研究發現，整合素的異常表達與腫瘤轉移密切相關[3]。在腫瘤細胞中，可出現整合素異常的高或低表達，或出現新的整合素表達[4]。異常表達的整合素可通過細胞內外信號轉導通路，一方面影響腫瘤細胞與基質的黏附，從而使其更具侵襲性；另一方面整合素與其配體結合后，通過介導FAK/Ras/MAPK、FAK/PI3K、FAK/STAT等多條信號通路，向細胞內傳遞信號，影響腫瘤細胞ERK、AKT等基因表達，進而影響腫瘤細胞的增殖和凋亡等生物學行為。此外，整合素還可激活VEGF信號通路誘導腫瘤血管生成[5]，在腫瘤轉移過程中發揮至關重要的作用。

整合素β亞單位的特點是胞外域含有胱氨酸的重復序列，胞內域較長，可通過與紐帶蛋白等結合完成細胞內外雙向信號的傳遞[6]。研究發現，整合素β亞單位是整合素家族的重要一員，生理狀態下介導細胞與胞外基質的黏附及細胞內外信號的轉導，病理狀態下參與多種腫瘤的侵襲和轉移[7～10]。Ni等[11]研究發現，結腸癌組織中ITGβ-4表達高于正常結腸組織；體外細胞試驗發現，結腸癌細胞系中癌基因c-Myc可促進ITGβ-4表達，而ITGβ-4又通過ras通路進一步促進c-Myc表達，形成正反饋，從而促進結腸癌的演進。

本研究腸癌組ITGβ-4表達明顯高于腺瘤組及正常組；結直腸癌組織中ITGβ-4高表達與患者腫瘤浸潤深度、TNM分期及組織分化程度有關。表明ITGβ-4表達異常與結直腸癌的發生、發展有關，可能參與其侵襲和進展過程。本研究還發現，結直腸癌組織中ITGβ-4高表達與患者性別、年齡、腫瘤組織學類型、發病部位、淋巴結轉移、復發和5年內預后無關，與患者OS亦無關。本研究按照WHO消化系統腫瘤(第4版)分類標準未對特殊類型腺癌(黏液腺癌和印戒細胞癌)分化程度進行分組，僅對99例普通腺癌分化程度進行分組；結果發現，ITGβ-4高表達與腫瘤組織分化程度有關，中分化者ITGβ-4高表達率明顯高于低分化與高分化者，即ITGβ-4在低分化腺癌中有表達下降的趨勢。Ni等[11]研究推測，伴隨腫瘤的演進ITGβ-4出現丟失和被抑制可能是由于蛋白水解活性下降造成的。

近年研究還發現，ITGβ-4可促進結直腸癌細胞的遷徙和上皮間質轉化[12]，而抑癌基因ARRDC3通過參與ITGβ-4的內在化、泛素化及降解，抑制乳腺癌的演進[13]；SIRT2參與ARRDC3啟動子的表觀遺傳沉默是基底細胞樣乳腺癌細胞出現侵襲性的重要原因之一[14]，因此SIRT2抑制劑作為抗癌藥使用的可能性正在被廣泛研究[15]。

總之，ITGβ-4在結直腸癌的發生、發展可能具有促進作用，但其具體作用機制仍需進一步研究探討。

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Expression and clinical significance of ITGβ-4 in colorectal cancer tissues

HUANDawei1,HUILinping,WANGXing,GAOHongjian,SUNJie,SUNXiao,WANGCuifang

(1ShenyangCentralHospitalAffiliatedtoShenyangMedicalCollege,Shenyang110024,China)

Objective To explore the role of integrin β-4 (ITGβ-4) in the occurrence and development of colorectal cancer. Methods The expression of ITGβ-4 in 125 cases of colorectal cancer tissues (cancer group, including 71 cases of colon cancer and 54 cases of rectal cancer), matching 75 cases of normal colorectal tissues (normal group), and 28 cases of colorectal adenomas (adenomas group) were detected by immunohistochemical method. We analyzed the relationship of ITGβ-4 expression with clinicopathological parameters and survival of colorectal cancer patients. Results The high expression rates of the normal group, adenomas group and cancer group were 6.67% (5/75), 14.29% (4/28) and 40.00% (50/125),respectively; and the high expression rate of ITGβ-4 in the colorectal cancer group was obviously higher than that of the normal group and adenoma group (allP<0.01). High expression of ITGβ-4 was closely associated with tumor differentiation, TNM stage and invasion depth (allP<0.05), but was not associated with tumor location, lymph node metastasis and survival time (allP>0.05). Among 66 patients with 5-year follow-up, the mean OS of 36 high expression cases was 71.8 months and the mean OS of 30 low expression cases was 74.5 months (P>0.05). Conclusion The expression of ITGβ-4 was increased in the colorectal cancer tissue and the abnormal expression might be associated with tumorigenesis and development of colorectal cancer.

colorectal carcinoma; Integrin β-4; immunohistochemistry; survival analysis

沈陽市科技計劃項目(F12-193-9-26)。

宦大為(1971-)，男，主任醫師，研究方向為腫瘤的病理診斷。E-mail： huan_dw@163.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.24.007

R735.3

A

1002-266X(2016)24-0023-03

2016-01-11)