2013年長春市兒童醫院HFMD患兒病原特點分析

黃艷智，王麗雪，趙艷玲，馬　巖，劉　穎，孫利偉，孟婷玉，張曉杰，田玉玲，馬英偉 ，賀　巖

(長春市兒童醫院，吉林 長春130051)

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2013年長春市兒童醫院HFMD患兒病原特點分析

黃艷智，王麗雪，趙艷玲，馬巖，劉穎，孫利偉*，孟婷玉，張曉杰，田玉玲，馬英偉 ，賀巖

(長春市兒童醫院，吉林 長春130051)

摘要：目的分析2013年長春市兒童醫院住院手足口病(HFMD)患兒病原學特點，了解住院HFMD患兒病原的變化。方法分析2013年長春市兒童醫院住院的1111例HFMD患兒一般情況；應用熒光定量PCR方法檢出糞便腸道病毒通用型(EV)、新型腸道病毒71型(EV71)、柯薩奇病毒A16型(CoxA16)和柯薩奇病毒A6型(CoxA6)核酸；在1111份糞便標本中隨機抽取10份進行CoxA6型核酸序列檢測及分析。結果2013年長春市兒童醫院住院HFMD患兒發病高峰年齡段13-24月齡，流行高峰季節6-8月份。引發HFMD的病原有EV、EV71、CoxA16、CoxA6等，以EV和CoxA6為主，陽性檢出率分別為50.21%和46.00%；EV和CoxA6流行的高峰季節6月份，CoxA16在10月現流行高峰，EV71未出現流行高峰季節。隨機抽取10份進行測序,有7份序列與CoxA6序列的同源性為96%-98%；CoxA6型系統發生學分析顯示：其中4份同源性高，位于基因樹的同一分支。結論2013年長春市兒童醫院住院HFMD患兒病原流行優勢型為CoxA6；HFMD的病原趨于多樣性和多種型別共流行的狀態。監測HFMD病原的特點對于其預防、臨床診治及預后評估有重要警示作用。

關鍵詞：兒童；手足口病；柯薩奇病毒A6型

(ChinJLabDiagn,2016,20:0431)

手足口病(Hand-foot-mouth disease，HFMD)是由多種腸道病毒引起的常見的丙類傳染病，以嬰幼兒發病為主。以發熱和手、足、口腔等部位的皮疹或皰疹為主要特征。少數患者可并發無菌性腦膜炎、腦炎、急性弛緩性麻痹、呼吸道感染和心肌炎等。不同型別病原所致危重癥臨床表現各異，早期明確病原診斷及早給予有效治療非常重要。本研究分析了2013年長春市兒童醫院住院HFMD患兒糞便標本腸道病毒通用型(EV)、新型腸道病毒71型(EV71)、柯薩奇病毒A16型(CoxA16)和柯薩奇病毒A6型(CoxA6)DNA的檢出情況及部分CoxA6陽性DNA的核酸序列。

1對象與方法

1.1對象2013年1-12月長春市兒童醫院住院確診的HFMD患兒1111例，年齡 3月28天-6歲，平均 (23.95±14.31)月齡 ；男 690例，女421 例。

1.2診斷標準參照國家衛計委《HFMD診療指南2010年版》[1]。

1.3方法

1.3.1標本采集患兒住院當天留取糞便標本約3-5 ml，立即送檢。

1.3.2核酸提取采用離心柱法核酸提取試劑盒(中山大學達安基因股份有限公司產品)，按試劑盒說明書提取糞便標本核酸。

1.3.3實時熒光定量PCR檢測試劑為中山大學達安基因股份有限公司的腸道病毒通用型(EV)/腸道病毒71型(EV71)/柯薩奇病毒A16型(Cox 16)和A6型(Cox 6)核酸檢測試劑盒，儀器為美國ABI 7500實時熒光定量PCR儀，檢測項目為EV/EV71/Cox 16/Cox 6核酸。PCR反應體系、循環參數嚴格按試劑盒說明書進行。

1.3.4核酸序列檢測及分析測序引物由中山大學達安基因股份有限公司設計，一步法RT-PCR，PCR產物核酸序列檢測，在線分析。

2結果

2.1HFMD年齡分布

2013年長春市兒童醫院住院HFMD患兒中7-48月齡患兒占94.59%，7-24月齡占67.59%,其中13-24月齡占45.09%，為發病高發年齡段，詳見表1、圖1。

表1　HFMD患兒年齡分布

圖1　長春市2013年HFMD患兒發病年齡分布

2.2HFMD季節分布

2013年長春市HFMD一年四季均有發病，高峰季節為6-8月份，見圖2。

圖2　HFMD患兒發病季節分布

2．32013年長春市HFMD病原特點

2.3.1不同病原的陽性檢出率2013年長春市兒童醫院住院HFMD患兒1111例，分別進行病原學檢查，結果EV和CoxA6陽性檢出率分別為50.21%和46%，詳見表2；其中臨床確診為手足口病但病原檢測非EV/EV71/CoxA16/CoxA6的為451例，占40.59%(451/1111)。

表2　2013年長春市HFMD糞便標本EV/EV71/

2.3.2不同季節各種病原的陽性檢出率2013年長春市兒童醫院住院HFMD患兒EV陽性檢出率6、7、8月為高峰季節；EV71陽性檢出率全年均不高，最高月份為9月，僅為10.42%；CoxA 16陽性檢出率，6、7、8、9月在1.25%-3.45%，10月份突然增至44.44%；CoxA 6僅在8、9、10月進行檢測，陽性檢出率分別為55.56%、35.14%和33.33%，見圖3。

圖3　HFMD病原的季節分布

2.4CoxA 6型VP1區核酸序列分析

本研究共對10例熒光PCR檢測濃度較低的樣本進行了測序，結果顯示有7例(5號、10號、14號、19號、22號、23號、24號)核酸序列與COXA6核酸序列的同源性為96%-98%，證實為COXA6型病毒。

2.5CoxA 6型系統發生學分析

在GeneBank 中選取部分CoxA6的VP1序列做系統發生學分析，結果14號、19號、22號、23號與廣東、上海和溫州等地流行株同源性高，位于基因樹的同一分支；5號位于基因樹的另一支，與湖南株同源性最高。

3討論

HFMD是全球性傳染病，世界大部分地區均有此病流行的報道。1957年新西蘭首次報道，1959年提出HFMD 命名。我國自1980年在廣東始見本病[2]，以后上海、北京、河北、天津、福建、吉林、山東、湖北、西寧等十幾個省市均有報道，HFMD已經成為全球性的重要公共衛生問題。2006年世界衛生組織公布該病在須申報疾病(法定染病)的發病率中居第四位。我國2008年5月2日衛生部將HFMD列入《中華人民共和國法定傳染病防治法》規定的丙類傳染病[3]。

本文分析了2013年長春市兒童醫院住院HFMD患兒共計1111例，發病高峰年齡段為13-24月齡;6月以內患兒占4.5%,大于4歲患兒僅為0.9%,6-48月齡患兒占94.59%。發病率的年齡差異與國內外報道接近[4-6]。HFMD人群普遍易感，成人和少年兒童感染后多不發病，可獲得保護性抗體。由于生后6月內嬰兒體內有較高母傳抗體水平，6月以后這種抗體逐漸減少，到13-24月齡母傳抗體水平最低，故為發病高峰年齡段。

在長春地區HFMD一年四季均可發病，但存在明顯的季節性， 6-8月份為高峰季節。長春市地處中國東北平原腹地，地勢平坦開闊，屬北溫帶大陸性季風氣候區，在全國干濕氣候分區中，介于東部山地濕潤與西部平原半干旱區之間的過渡帶,屬溫帶大陸性半濕潤類型，6-8月為最炎熱的季節，利于腸道病毒的繁殖，有研究顯示HFMD發病率隨溫度和濕度增加而增加[7]。

引發HFMD的病原均為微小核糖核酸科，人腸道病毒屬。這些病毒均來源于人體，能引起人體腸道暫時性感染；可由人體消化道和鼻咽部分離出病毒。本研究采集HFMD患兒糞便標本進行病原檢測，能夠代表HFMD的病原。HFMD可由多種腸道病毒引起，以往EV71和CoxA 16為常見病原，2013年長春市兒童醫院住院HFMD患兒EV71和CoxA 16陽性檢出率明顯低于EV和CoxA6。說明2013年HFMD病原，CoxA6取代EV71與CoxA 16成為感染優勢型。CoxA6作為HFMD的病原2010年在臺灣曾經爆發流行[8]；2013年湖南省郴州市HFMD病原CoxA6占41.55%[9]；2013年北京市昌平區HFMD咽拭子中CoxA6陽性檢出率為44.68%[10]；沈陽市報道2013年HFMD患兒糞便標本CoxA6核酸陽性檢出率16.2%[11]。本文對CoxA6核酸序列分析顯示：2013年長春市兒童醫院住院HFMD優勢病原CoxA6核酸序列在基因進化樹上分居在2枝上。14號、19號、22號、23號同源性高，與廣東、上海和溫州等地流行株位于基因樹的同一分支；5號位于基因樹的另一支，與湖南株同源性最高。近年來流行于世界各地的COXA6新變種同源性較高,而與原型株進化距離較遠。CoxA6在HFMD中的流行情況還應繼續監測并進行基因的朔源分析，將有重要意義。

HFMD的病原出現了腸道病毒型別不斷變化，趨于多樣性和多種型別共流行的狀態。而HFMD病原不同，其臨床表現輕重不同，研究顯示EV71 感染臨床多表現為重型[12，13]，CoxA6引發HFMD多為輕型[14，15]。監測HFMD病原的特點對于其預防及預后評估有重要警示作用。本研究還有40.59%為確診手足口病病例，但病原非EV/EV71/CoxA16/CoxA6，提示還有部分病原可以引發HFMD樣臨床表現，有待人們進一步研究證實。

參考文獻：

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Etiology Characteristics of Children with Hand-foot-mouth Disease in Changchun Children’s Hospital during 2013

HUANGYan-zhi,WANGLi-xue,ZHAOYan-ling,etal.

(ChangchunChildren’sHospital,Changchun130051,China)

Abstract:ObjectiveInvestigated the etiology characteristics of the inpatients with hand-foot-mouth disease in Changchun children’s hospital during 2013.MethodsThe statuses of 1111 children with HFMD were retrospectively analyzed.The genes of EV,EV71,CAV16 and CVA6 were detected by the method of fluorescent quantitative polymerase chain reaction.10 positive samples from 1111 fecal specimens were sequenced.ResultsMain onset ages of the inpatients with HFMD from Changchun children’s hospital were 13-24 months in 2013.Summer (6-8 month ) was the high incidence season.EV and CAV6 were major pathogens.The detection rates of the EV and CAV6 were 50.21% and 46.00%.The peak months of EV and CAV6 were 6 month.CAV16 was 10 month.The was no peak month of EV71.7 sequences had high identities to the CAV6.The homology in the VP1 region was 96%-98%.Number 14,19,22 and 23 which had the high homology located in the same branch on phylogenetic tree.Number 5 located in another branch.ConclusionCAV6 was the dominant genotype of HFMD in Changchun children’s hospital during 2013.There were different genotypes circulated among children.Monitoring Etiology characteristics of HFMD was important for early prevention,diagnosis,treatment,and prognosis.

Key words:children；HFMD；CoxA6

(收稿日期：2015-04-09)

文獻標識碼：A

中圖分類號：R725.1

文章編號：1007-4287(2016)03-0431-04

*通訊作者