米非司酮服用后不同時點早孕婦女絨毛組織形態及雌、孕激素受體表達觀察

韓華，趙紅偉，李潔，閆萍

(河北省人民醫院，石家莊050051)

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米非司酮服用后不同時點早孕婦女絨毛組織形態及雌、孕激素受體表達觀察

韓華，趙紅偉，李潔，閆萍

(河北省人民醫院，石家莊050051)

摘要：目的觀察米非司酮服用后不同時點人早孕絨毛組織形態及雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)表達變化。方法自愿要求終止早期妊娠的女性80例，隨機分為對照組、12 h組、24 h組、48 h組各20例。12 h組、24 h組、48 h組口服米非司酮150 mg，分別于服藥12、24、48 h后施行負壓吸引術，留取各組吸宮術后的絨毛組織。對照組未服用任何藥物，直接采用常規負壓吸引術終止妊娠。光鏡、透射電鏡下觀察四組絨毛組織形態學及超微結構改變，采用免疫組化法檢測各組絨毛組織中的ER、PR。結果12 h組、24 h組、48 h組絨毛滋養層細胞變性、壞死甚至脫落，炎癥細胞浸潤，絨毛間質水腫，細胞超微結構破壞。對照組、12 h組、24 h組、48 h組絨毛組織中ER相對表達量分別為0.182 4±0.007 2、0.119 1±0.005 9、0.120 8±0.011 0、0.121 2±0.007 3，各組絨毛組織中PR相對表達量分別為0.179 0±0.008 2、0.132 7±0.007 0、0.128 5±0.006 5、0.126 2±0.010 9，12 h組、24 h組、48 h組ER、PR相對表達量與對照組相比，P均<0.05。結論 米非司酮作用后12 h絨毛組織發生變性壞死，ER、PR表達受到抑制。

關鍵詞：米非司酮；雌激素受體；孕激素受體；絨毛組織

目前比較成熟的藥物流產方案主要為米非司酮口服并48 h后米索前列醇口服，完全流產率90%以上[1，2]。但這種方法所需時間較長，若能將兩藥間隔時間縮短，可大大方便患者。米非司酮通過與孕激素受體(PR)結合阻斷孕激素作用，引起蛻膜絨毛組織變性壞死，誘發流產。米非司酮的作用機制涉及到多個方面[3]，其中包括對絨毛組織中雌激素受體(ER)和PR表達的調節。我們觀察了米非司酮服用后不同時點早孕絨毛組織形態及ER、PR表達變化，探討縮短米非司酮與米索前列醇用藥間隔的可行性。

1資料與方法

1.1臨床資料河北省人民醫院婦產科門診自愿要求終止早期妊娠的孕婦80例，年齡18~40歲；停經<49 d；經婦科檢查、尿妊娠試驗及B超證實為宮內早孕；平時月經規律，經量正常；半年內未服用激素類藥物，無生殖系統炎癥及腫瘤。將80例研究對象隨機分為對照組、12 h組、24 h組、48 h組，每組20例。本研究已獲得患者及家屬知情同意。

1.2米非司酮用法及絨毛組織的獲取12 h組、24 h組、48 h組均口服米非司酮(25 mg/片，浙江仙居制藥股份有限公司)150 mg，分別于服藥12、24、48 h后進行負壓吸引術。對照組未服用任何藥物，直接采用常規負壓吸引術終止妊娠。吸宮術后分別留取各組新鮮絨毛組織。

1.3絨毛組織形態觀察取新鮮絨毛組織，4%多聚甲醛固定，24 h后常規梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟浸透、包埋，制成蠟塊，6 μm厚切片，取4片蠟帶分別裱于涂有蛋白甘油的載玻片上，HE染色，光鏡下觀察絨毛組織形態。將收集的絨毛組織切成約1 mm3的小塊放入4%戊二醛中前固定，PBS清洗，加入1%鋨酸中后固定，乙醇梯度脫水，丙酮脫水，先后用丙酮與樹脂配比分別為3∶1、1∶1、1∶3的混合液浸透，純樹脂浸透，包埋、聚合，制作50 nm厚的超薄切片，醋酸鈾、檸檬酸鉛室溫染色，日立H-7500型透射電子顯微鏡觀察、照相。

1.4絨毛組織中ER、PR檢測采用免疫組化法檢測ER、PR，每次染色均同步設有陽性對照和陰性對照，按試劑盒說明書操作。ER、PR陽性染色為細胞內出現棕黃色顆粒。每張切片在光鏡(400×)下隨機選取5個不同的視野，圖像輸入電子計算機后，經Motic Med6.0數碼醫學圖像分析系統處理，在相同放大倍數下，以陽性目標平均光密度值(OD值)代表蛋白相對表達量。

2結果

2.1各組絨毛組織形態學改變對照組絨毛滋養層細胞結構清晰，外層為合體滋養細胞，內層為細胞滋養細胞；為單層立方形細胞，細胞界限清晰，胞質透明，核圓、淺染；絨毛間質疏松，可見毛細血管及梭形結締組織細胞。12 h組絨毛滋養層細胞變性、壞死甚至脫落，并見炎癥細胞浸潤，絨毛間質水腫，內有血液淤積和纖維素沉積。24 h組、48 h組變化基本同12 h組(見圖1)。

注：A為對照組；B為12 h組；C為24 h組；D為48 h組。

圖1各組絨毛組織形態學變化

2.2各組絨毛組織超微結構改變對照組絨毛組織合體滋養細胞表面有大量微絨毛，細胞核形不規則，常染色質豐富，核仁明顯，胞質內含有豐富的粗面內質網、線粒體和游離核糖體，可見少量脂滴；細胞滋養細胞位于基膜之上，呈橢圓形，胞質內細胞器較少；合體滋養細胞與細胞滋養細胞之間呈橋粒連接。12 h組合體滋養細胞表面微絨毛數量減少，細胞質高度水腫，胞質內粗面內質網輕度擴張，線粒體部分嵴融合、消失，游離核糖體減少，可見脂滴；細胞滋養細胞變扁、變小，細胞輪廓不清，粗面內質網高度不規則擴張，腔內有分泌物，有輕度脫顆?，F象；合體滋養細胞與細胞滋養細胞之間的連接結構松弛，細胞間隙增寬。24 h組、48 h組超微結構改變與12 h組相近(見圖2)。

注：A1、A2為對照組；B1、B2為12 h組；C1、C2為24 h組；D1、D2為48 h組。

圖2各組絨毛組織超微結構改變

2.3各組絨毛組織中ER、PR表達比較對照組絨毛組織中ER相對表達量為0.182 4±0.007 2，12 h組、24 h組、48 h組分別為0.119 1±0.005 9、0.120 8±0.011 0、0.121 2±0.007 3，12 h組、24 h組、48 h組與對照組相比，P均<0.05。對照組絨毛組織中PR相對表達量為0.179 0±0.008 2，12 h組、24 h組、48 h組分別為0.132 7±0.007 0、0.128 5±0.006 5、0.126 2±0.010 9，12 h組、24 h組、48 h組與對照組相比，P均<0.05。

3討論

藥物流產作為一種非手術終止早期妊娠的途徑，簡便、安全、高效，在臨床得到廣泛應用。其中，以米非司酮配伍米索前列醇方案應用最多[4，5]。

既往文獻報道，米非司酮能明顯增強妊娠子宮對外源性前列腺素的敏感性，尤其在服用米非司酮后36~48 h最敏感，且臨床研究發現當米非司酮與米索前列醇用藥間隔為48 h時流產效果最好[6]，因而國內外藥物流產方案中米非司酮與米索前列醇的用藥間隔一般為48 h。但從米非司酮的代謝特點來看，其半衰期在24~48 h，提示將米非司酮與米索前列醇的用藥間隔縮短至24~48 h也可能達到相同的流產效果。研究[7]表明，米非司酮(100 mg)用藥后24 h陰道放置米索前列醇對終止<63 d的妊娠是可行的。有學者[8]比較了口服米非司酮(200 mg)后6~8 h陰道放置米索前列醇與服藥后24 h放置米索前列醇的效果，發現兩種方案效果近似，且前者惡心、嘔吐、陰道大量出血等不良反應發生率更低。目前國內外已進行多項有關縮短用藥間隔的臨床研究[9]，但尚缺乏充足的理論依據。

我們通過光鏡觀察發現，正常早孕絨毛組織結構發育良好，外層為合體滋養細胞，內層為細胞滋養細胞，細胞界限清楚，間質疏松。服用米非司酮后，絨毛滋養層細胞有廣泛變性、壞死甚至脫落，絨毛間質水腫。本研究中三個用藥組均具備上述特征。這表明在米非司酮作用后12 h絨毛組織就已發生形態改變，細胞變性、壞死。進一步通過透射電鏡觀察絨毛組織超微結構，我們發現正常早孕絨毛組織表面有大量微絨毛，而米非司酮作用后12 h微絨毛減少、脫落，細胞內粗面內質網擴張，有脫顆粒現象，這說明米非司酮作用后12 h體內PR生物活性便受到抑制，絨毛組織細胞脫落，引發流產。

米非司酮可拮抗PR的生物學效應，對胚胎及其支持組織的代謝和形態結構產生多方面影響[10~12]，其中對ER、PR的影響最為重要[13]。早期研究認為米非司酮不能直接作用于絨毛組織，其可通過引起蛻膜組織壞死、出血、脫落，使絨毛血供不足，發生退行性變；近年研究發現，米非司酮可直接作用于絨毛組織，改變ER/PR正常生理平衡，抑制滋養細胞增殖，誘導并促進其凋亡，導致絨毛蛻膜組織不同程度變性、壞死[14~16]。我們發現，正常早孕絨毛組織中存在中等強度表達的ER、PR，經米非司酮作用后ER、PR雖仍有表達，但表達水平較對照組明顯下降，提示米非司酮可抑制絨毛組織中ER、PR的表達。三個用藥組之間，ER、PR相對表達量差異無統計學意義，提示服用米非司酮后12 h對絨毛組織即有抑制作用，絨毛滋養細胞變性、壞死，從而達到流產的目的。

綜上所述，米非司酮作用后12 h就可對早孕絨毛組織產生影響，將米非司酮與米索前列醇用藥間隔縮短至12 h的方案理論上是可行的。若能經過大量臨床試驗證實并推廣應用，有望簡化服藥流程。

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Changes in morphology of chorion tissue and expression of estrogen receptor and progesterone receptor in early pregnant women at different time points after taking mifepristone

HANHua,ZHAOHongwei,LIJie,YANPing

(HebeiGeneralHospital,Shijiazhuang050051,China)

Abstract:ObjectiveTo observe the changes in morphology of chorion tissue and expression of estrogen receptor (ER) and progesterone receptor (PR) in early pregnant women at different time points after taking mifepristone. MethodsEighty women who desire to terminate the early pregnancy were randomly divided into the control group, 12-hour group, 24-hour group and 48-hour group, and each group contained 20 cases. Women in the 12-hour group, 24-hour group and 48-hour group took 150 mg mifepristone. Negative pressure suction were performed after 12, 24 and 48 hours respectively in the three groups. The chorion tissue were collected after suction. We observe the morphological change of chorion tissue by light microscope and transmission electron microscope. Detecting the expression of ER and PR in the chorion tissue by immunohistochemistry. ResultsThree medication groups showed the cell degenerated, some were necrotic, even fell off, the inflammatory cell infiltrated, the chorion interstitial had edema and the ultrastructure was damaged. The relative expression levels of ER in the control group, 12-hour group, 24-hour group and 48-hour group were 0.182 4±0.007 2, 0.119 1±0.005 9, 0.120 8±0.011 0 and 0.121 2±0.007 3. The relative expression levels of PR were 0.179 0±0.008 2, 0.132 7±0.007 0, 0.128 5±0.006 5 and 0.126 2±0.010 9. Significant differences were found in the ER and PR between the three medication groups and control group (all P<0.05). ConclusionThe chorion tissue degenerates and shows necrosis and the expression of ER and PR is inhibited after taking mifepristone twelve hours.

Key words:mifepristone; estrogen receptor; progesterone receptor; chorion tissues

(收稿日期：2015-11-17)

中圖分類號：R715.2

文獻標志碼：A

文章編號：1002-266X(2016)07-0007-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.07.003

作者簡介：第一韓華(1982-)，女，碩士，主治醫師，主要研究方向為婦產科計劃生育。E-mail: 323242844@qq.com