Th17/Treg細胞因子在乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者中的表達及意義

施文娟　賈瑾堂　李彩東　王慧芬

730046　甘肅　蘭州市第二人民醫院傳染科(施文娟，賈瑾堂，李彩東)；解放軍第三○二醫院(王慧芬)

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·論著·

Th17/Treg細胞因子在乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者中的表達及意義

施文娟賈瑾堂李彩東王慧芬

730046甘肅蘭州市第二人民醫院傳染科(施文娟，賈瑾堂，李彩東)；解放軍第三○二醫院(王慧芬)

【摘要】目的探討乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者(HBV-ACLF)血清中Th17/Treg細胞因子(IL-17/IL-35)的表達及其臨床意義。方法收集蘭州市第二人民醫院2010年12月至2013年12月收治的HBV-ACLF患者共33例 (HBV-ACLF 組)，選取同期住院的慢性乙型肝炎(CHB)患者42 例(CHB組)和20 例健康體檢者(健康對照組)。采用ELISA 法檢測3組病例血清中IL-17與IL-35水平，同時檢測各項肝功能指標。結果HBV-ACLF組與CHB組患者IL-17、IL-35水平分別為(137.47±60.81)、(242.39±81.80)、(121.63±57.25)、(212.05±123.98) pg/mL，均高于健康對照組(16.37±8.47)、(33.6±24.63) pg/mL，(t=6.496、6.136、5.857、5.441，P<0.01)；HBV-ACLF組與CHB組IL-17、IL-35水平差異無統計學意義(t=0.987、1.034，P>0.05)。結論IL-17、IL-35的高水平表達可能與乙型肝炎慢加急性肝功能衰竭的發生有關。

【關鍵詞】慢加急性肝衰竭；慢性乙型肝炎；Th17/Treg細胞因子

在慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)基礎上發生的慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure，ACLF)是我國傳染病死亡的重要原因之一。目前很多研究證實Th17參與到急性或慢性肝損害的炎性反應中，其分泌的IL-17能夠調控粒細胞的生成，阻斷細胞外病原體的入侵，同時和自身免疫性疾病關系密切，IL-17還能刺激細胞因子IL-6、TNF-α、IL-1β的表達，因此，IL-17在HBV感染過程中能夠促進肝臟炎性反應，導致肝功能衰竭[1]。調節性T細胞(Treg)是一組自然存在或來自于誘導性T細胞的細胞亞群，可以通過控制炎性反應(如暴發性肝炎、自身免疫性肝炎)來減輕肝損傷，IL-35作為唯一由Treg細胞特異性分泌的抑制性細胞因子，在機體抗感染、維持自身免疫耐受及避免自身免疫性疾病的發生等方面均有重要作用[2]。為進一步研究HBV-ACLF患者中Th17與Treg細胞因子的變化，研究比較了HBV-ACLF患者和CHB患者血清IL-17與IL-35的水平，現報道如下。

資料和方法

一、研究對象

選擇2010年12月至2013年12月蘭州市第二人民醫院的HBV-ACLF患者33例，其中男性28例，女性5例，年齡18～63歲，平均年齡(35.1±12.3)歲；選取同期住院的CHB患者42例，其中男性36例，女性6例，年齡19～61歲，平均年齡(35.7±10.1)歲；健康對照組為健康體檢者20名，其中男性16名，女性4名，年齡29～48歲，平均年齡(32.6±4.8)歲。CHB診斷標準參照《慢性乙型肝炎防治指南》[3]。HBV-ACLF 診斷標準參照《肝衰竭診療指南》[4]。排除其他病毒感染、免疫相關性疾病和免疫調節劑使用者導致的肝功能衰竭。

二、標本采集與檢測

收集患者和健康對照人群清晨空腹靜脈血5 mL, 分離血清, -80℃冰箱保存備用。細胞因子IL-17、IL-35檢測采用雙抗體夾心ELISA法, 試劑盒由美國R&D公司生產，上海尚樂生物技術有限公司分裝，具體操作按說明書進行。

三、統計學方法

結果

一、臨床資料

3組研究對象性別構成比與年齡均值經統計學分析差異無統計學意義(χ2=0.035，P=0.983；F=0.523，P=0.596)；HBV-ACLF組與CHB組ALT、AST差異無統計學意義(P>0.05)，TBil、Alb、PTA、INR、TC差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

HBV-ACLF組33例患者最終有26例完成隨訪，治愈好轉14例(早期5例，中期7例，晚期2例)，12例患者死亡，7例因病情加重放棄治療出院，9例患者住院期間合并細菌、真菌等感染。CHB組患者42例均臨床治愈或好轉出院。

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注：HBV-ACLF為乙型肝炎病毒相關慢加急性肝衰竭；CHB為慢性乙型肝炎；ALT為丙氨酸氨基轉移酶；AST為天冬氨酸氨基轉移酶；TBil為總膽紅素；Alb為白蛋白；PTA為凝血酶原活動度；INR為國際標準化比值；TC為總膽固醇

二、HBV-ACLF組、CHB組患者與HC 組IL-17、IL-35水平比較

3組研究對象IL-17、IL-35水平經單因素方差分析，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表2；3組研究對象組間進行LSD-t檢驗分析，結果顯示，ACLF組與CHB組患者IL-17、IL-35水平均高于健康對照組(P<0.05)，ACLF組與CHB組患者IL-17、IL-35水平差異無統計學意義(P>0.05)，見表3。

表2　3組研究對象IL-17、IL-35水平比較的

三、HBV-ACLF患者治愈好轉組與無效死亡組IL-17、IL-35水平比較

HBV-ACLF患者中治愈好轉組與無效死亡組血清中IL-17、IL-35水平經t檢驗，差異無統計學意義(P>0.05)，見表4。

表3　3組研究對象IL-17、IL-35檢測結果的LSD-t檢驗分析

表4　HBV-ACLF 患者治愈好轉組與

討論

Th17是一類在分化、生物學作用等方面都不同于Th1和Th2細胞的輔助性T淋巴細胞，以分泌IL-17為主要特征，IL-17作為一種強致炎因子可能參與了ACLF免疫反應，通過誘導中性粒細胞、NK細胞等至肝臟炎性部位，加重肝臟損傷。目前很多研究證實，IL-l7參與急性或慢性肝損害的炎性反應。Lemmers等[5]研究發現，與健康對照組相比，酒精性肝病患者血漿IL-17水平明顯升高，外周血分泌IL-17的CD4+T淋巴細胞比例明顯升高，PBMC經PHA刺激后IL-17分泌細胞的比例也明顯增加。Yasumi等[6]發現，IL-17的水平在急性肝損害患者和暴發性肝衰竭患者顯著升高，而且IL-17水平與凝血酶原時間有關，并指出IL-17可以作為急性肝損傷程度的一項指標。

Treg和Th17來源于同一原始CD4+T細胞，發揮與Th17相反的作用，防止機體發生免疫過激反應， IL-35是2007年底由Lauren等[7]研究發現并命名，它是目前唯一發現的由Treg分泌的抑制性細胞因子，與多種自身免疫性疾病如類風濕性關節炎等密切相關[8]，IL-35在感染性疾病中亦具有重要的作用。在急性感染時，IL-35可以通過誘導Th1細胞的增殖來清除病原體，另一方面也可以通過抑制Th17細胞的分化從而阻止過度的免疫反應對機體的免疫損傷[9]；慢性感染時，IL-35可刺激調節性T細胞的增殖，抑制效應性T細胞對機體的免疫損傷，但同時也造成感染的慢性化如慢性HBV感染等[10]。Stoop等檢測23例健康對照和9例HBV急性感染恢復期患者外周血中的Treg數量和功能，發現慢性HBV感染患者外周血中Treg數量明顯高于非感染人群。

目前已知，人類感染HBV后預后差異性很大，患者病情的進展與機體特異性T細胞反應強弱密切相關。超強的免疫應答被認為是慢加急性肝衰竭的重要發病機制之一。為進一步研究Th17/Treg細胞因在HBV-ACLF中的免疫作用機制，本研究觀察了IL-17與IL-35在例患者血清中的表達，并與CHB患者和健康人群進行了比較，結果發現：HBV-ACLF與CHB患者血清中IL-17與IL-35水平明顯高于健康對照組，由此可推斷IL-l7與IL-35參與到慢性肝損害的炎性反應中，與目前的相關研究結論相符合[11-14]，但是HBV-ACLF與CHB兩組患者之間未見明顯差異，與陳麗等[2]的研究結果不符，可能與樣本量少有關。

總之，以上對IL-17與IL-35的研究提示Th17/Treg細胞因子與HBV-ACLF的發病有一定相關性，對IL-17與IL-35的研究有助于進一步了解Th17細胞與Treg細胞在慢性乙型肝炎以及慢加急性肝衰竭中的作用機制，并將為HBV-ACLF的免疫調控治療提供一定的理論基礎。

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(本文編輯：錢燕)

Study on serum levels of Th17/ Treg cytokines in HBV-related acute-on-chronic liver failure patientsSHIWen-juan，JIAJin-tang，LICai-dong，WANGHui-fen.DepartmentofInfectiousDiseases,theSecondPeople'sHospitalofLanzhou,Gansu730046,China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression levels of Th17/Treg cytokines in HBV-related acute-on-chronic liver failure (HBV-ACLF) patients and its clinical significance. MethodsNinety-five patients admitted in Lanzhou Second People's Hospital from December 2010 to December 2013 were enrolled, including 33 HBV-ACLF patients (HBV-ACLF group), 42 chronic hepatitis B patients (CHB group) and 20 healthy people (HC group). Enzyme-linked immune-sorbent assay (ELISA) was applied to detect the levels of IL-17 and IL-35 among groups, respectively. Meanwhile, measurement of liver function parameters was carried out. ResultsLevels of IL-17 and IL-35 in both HBV-ACLF group (137.47±60.81 and 242.39±81.80 pg/mL) and CHB group (121.63±57.25 and 212.05±123.98 pg/mL) were higher than those in HC group (16.37±8.47 and 33.6±24.63 pg/mL) (t=6.496, 6.136, 5.857 and 5.441, P<0.01), respectively. There were no significant differences in IL-17 and IL-35 levels between HBV-ACLF group and CHB group (t=0.987 and 1.034, P>0.05). ConclusionHigh expression levels of IL-17 and IL-35 might be associated with occurrence of HBV-ACLF.

【Key words】Acute-on-chronic liver failure；Chronic hepatitis B；Th17/Treg cytokines

(收稿日期：2015-09-18)