弓形蟲病診斷方法研究進(jìn)展

馮嘉軒，趙永坤，孟繁平，吳澤民，劉　智，李　娜，劉　全

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弓形蟲病診斷方法研究進(jìn)展

馮嘉軒，趙永坤，孟繁平，吳澤民，劉智，李娜，劉全

［摘要］弓形蟲病是由弓形蟲感染引起的一種嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲病，對(duì)人類健康造成極大威脅。本文對(duì)弓形蟲病診斷技術(shù)，包括不依賴DNA檢測(cè)診斷方法、血清學(xué)檢測(cè)以及基于寄生蟲核酸的分子生物學(xué)方法進(jìn)行綜述，為弓形蟲病診斷技術(shù)和方法的發(fā)展提供新的思路。

［關(guān)鍵詞］弓形蟲病；分子生物學(xué)；診斷

DOI∶ 10.3969/j.issn.1007-8134.2016.03.004

弓形蟲是可以感染包括人在內(nèi)的絕大多數(shù)溫血?jiǎng)游锏膶Ｐ约?xì)胞內(nèi)寄生蟲，屬于頂端復(fù)合物亞門、孢子蟲綱、真球蟲目、弓形蟲科、弓形蟲屬。弓形蟲生活史分為速殖子（又稱滋養(yǎng)體）、包囊、裂殖體、配子體和卵囊，前3期為無(wú)性生殖，后2期為有性生殖，僅在終宿主腸黏膜上皮細(xì)胞內(nèi)發(fā)育造成局部感染。一般情況下，人感染弓形蟲后無(wú)明顯癥狀，但是免疫力低下或患免疫功能缺陷病時(shí)，可引起弓形蟲病。弓形蟲病是一種重要的人獸共患寄生蟲病，具有流行范圍廣、感染率較高、臨床癥狀復(fù)雜等特點(diǎn)，全世界約有20億人感染過(guò)弓形蟲，對(duì)人類健康造成極大威脅［1-3］。

弓形蟲病分為先天性弓形蟲病和獲得性弓形蟲病。患病的孕婦通過(guò)胎盤屏障將弓形蟲傳染給胎兒，妊娠早期感染可導(dǎo)致流產(chǎn)、畸形、死胎等，妊娠晚期可導(dǎo)致新生兒隱性感染，新生兒出生時(shí)即可出現(xiàn)腦內(nèi)病變、消化道癥狀和皮膚癥狀等。雖然患先天性弓形蟲病的新生兒存活率較高，但絕大多數(shù)伴精神發(fā)育障礙、視力發(fā)育障礙甚至運(yùn)動(dòng)障礙，患病新生兒最常見的死亡原因是融合性肺炎［4-5］。獲得性弓形蟲病是由于食用半生或全生的含有弓形蟲包囊的肉類食品，與寵物（主要是貓）或家畜家禽密切接觸后，弓形蟲可經(jīng)黏膜和損傷皮膚進(jìn)入人體。獲得性弓形蟲病病情輕重不一，淋巴結(jié)腫大在免疫功能正常的患者中最為多見，免疫缺陷者如AIDS和惡性腫瘤患者等常有顯著全身癥狀如高熱、全身疼痛、嘔吐甚至合并腦炎、心肌炎等，最嚴(yán)重可導(dǎo)致死亡［6］。

弓形蟲病對(duì)人類健康、優(yōu)生優(yōu)育、公共衛(wèi)生及畜牧業(yè)發(fā)展都有極大的威脅，對(duì)弓形蟲檢測(cè)及診斷的研究愈發(fā)受到關(guān)注，本文對(duì)此進(jìn)行綜述。

1　病原學(xué)診斷

1.1顯微鏡鏡檢傳統(tǒng)顯微鏡可檢測(cè)到糞便、水、環(huán)境和組織樣本中的弓形蟲，但靈敏度低，結(jié)果可靠性不高。糞便、水和環(huán)境中的卵囊須從大量樣本中過(guò)濾之后才能進(jìn)行顯微鏡觀察。組織樣本中的包囊可直接通過(guò)染色與宿主細(xì)胞鑒別，吉姆薩染色和HE染色通常為染色包囊的主要方法，簡(jiǎn)便有效；糖原染色可將裂殖子的支鏈淀粉酶顆粒染色，但相對(duì)費(fèi)時(shí)，同時(shí)要求操作熟練才能得到比較滿意的結(jié)果。此外，電鏡可直接檢測(cè)到小鼠大腦內(nèi)和貓小腸組織的包囊，但該法不適用于常規(guī)檢測(cè)［7-8］。

1.2動(dòng)物接種通過(guò)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)弓形蟲進(jìn)行分離鑒定是弓形蟲病診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，小鼠和貓是分離弓形蟲常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物［9］，分泌物、排泄物、血液、淋巴結(jié)、肌肉和腦組織都是須要獨(dú)立檢測(cè)的樣本。為提高分離鑒定的成功率，常采用對(duì)弓形蟲更具有易感性的INF-γ基因敲除小鼠，或通過(guò)自由飲用地塞米松的方式對(duì)正常小鼠進(jìn)行免疫抑制。貓的肌肉組織中可檢測(cè)到少量有活性的弓形蟲。雖然通過(guò)動(dòng)物接種診斷弓形蟲的方法可靠性高，但由于檢測(cè)周期較長(zhǎng)，不適用于大量樣本篩查。

2　影像學(xué)診斷

成像技術(shù)包括CT、MRI和超聲波，成像技術(shù)便于診斷弓形蟲病定位病灶，可作為輔助診斷弓形蟲病的方法，但監(jiān)測(cè)治療效果不具有特異性［10］。CT可對(duì)免疫缺陷患者感染弓形蟲后發(fā)生腦炎和腦膿腫進(jìn)行最初步的檢測(cè)，也可檢測(cè)弓形蟲病嬰兒彌散性腦積水和腦鈣化。MRI常用于檢測(cè)損傷程度及范圍。超聲波是先天性弓形蟲病產(chǎn)前診斷的重要方法之一。

3　血清學(xué)診斷

多數(shù)個(gè)體在感染弓形蟲時(shí)無(wú)明顯特異性的臨床表現(xiàn)，診斷多依靠血清學(xué)檢測(cè)。不同的血清學(xué)檢測(cè)方法可用于檢測(cè)不同的抗原或抗體。IgM可檢測(cè)出1周到幾個(gè)月甚至數(shù)年的感染，所以不能作為急性感染的有效指標(biāo)；IgA檢測(cè)比IgM出現(xiàn)更早，可以持續(xù)幾個(gè)月，因此可以作為急性感染的診斷指標(biāo)；IgE出現(xiàn)的時(shí)間較短，可做為正在感染期間的判斷標(biāo)準(zhǔn)；IgG的出現(xiàn)只能提示有感染發(fā)生，但是不能確定感染時(shí)間［11-12］。

3.1染色試驗(yàn)（dye test， DT）DT可稱為最經(jīng)典的特異性血清方法，速殖子在有致活因子的參與下與樣本的特異性抗體發(fā)生作用，導(dǎo)致蟲體表面膜被破壞，可被美蘭染色。鏡檢蟲體被藍(lán)染為陰性，反之為陽(yáng)性。但其主要缺點(diǎn)是必須要求活的寄生蟲體和健康人血清，具有較高的危險(xiǎn)性，檢測(cè)具有一定的局限性［13］。DT過(guò)程中使用細(xì)胞培養(yǎng)的方式獲得速殖子，會(huì)出現(xiàn)一定比例的假陰性結(jié)果，因此直接從小鼠體內(nèi)獲得速殖子具有準(zhǔn)確性。

3.2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA）ELISA由于操作簡(jiǎn)便，可用于大規(guī)模樣本的自動(dòng)檢測(cè)，反應(yīng)體系包括固相的抗原或抗體、酶標(biāo)的抗原或抗體及酶反應(yīng)底物。ELISA主要分為3類：①間接ELISA，該方法可檢測(cè)到抗弓形蟲IgG、IgM和IgA，常用的包被抗原是速殖子裂解抗原（tachyzoite lysate antigen， TLA）。隨著技術(shù)的不斷改進(jìn)，將精確的抗原與蛋白質(zhì)重組并標(biāo)準(zhǔn)化形成重組蛋白，可在大腸桿菌及酵母中表達(dá)，抗原種類包括致密性顆粒抗原（GRA1、GRA2、GRA4、GRA6、GRA7和 GRA8）、弓形蟲棒狀體蛋白（ROP1和ROP2）、基質(zhì)蛋白MAG1、微線體蛋白（MIC2、MIC3、MIC4和MIC5）以及表面抗原（SAG1和SAG2）［14-19］。重組抗原的結(jié)果與單一抗原比較，更具敏感性和特異性。例如SAG2A、GRA2、GRA4、ROP2、GRA8和GRA7可用于檢測(cè)人體由于近期感染出現(xiàn)的IgG；ROP1、SAG1、GRA7、GRA8和GRA6可檢測(cè)IgM；GRA7和GRA8可檢測(cè)IgA。②雙抗體夾心法ELISA，可檢測(cè)弓形蟲循環(huán)抗原，使用TLA的雙抗體夾心ELISA檢測(cè)人體內(nèi)的IgM比間接熒光抗體試驗(yàn)法更敏感，急性感染時(shí)使用P35檢測(cè)IgM比使用TLA更有特異性。使用由2個(gè)不同物種制備的抗MIC10抗體檢測(cè)MIC10循環(huán)抗原，可為早期弓形蟲病提供診斷依據(jù)［20-21］。③Dot-ELISA法，抗原抗體結(jié)合在聚苯乙烯板的硝酸纖維膜上，與常規(guī)ELISA相比操作更簡(jiǎn)單，無(wú)需特殊儀器。

3.3改良凝集試驗(yàn)（modified agglutination test，MAT）在MAT過(guò)程中，速殖子使用福爾馬林固定，將其加入U(xiǎn)型微量滴定板中，再加入稀釋過(guò)的待測(cè)血清進(jìn)行檢測(cè)。若在滴定孔中出現(xiàn)一層薄薄的片狀凝集物質(zhì)，血清樣本測(cè)定結(jié)果為陽(yáng)性；在孔底部出現(xiàn)由速殖子形成的致密顆粒沉淀，則結(jié)果為陰性。由于寄生蟲表面粘附有正常的IgM，會(huì)導(dǎo)致MAT的敏感性和特異性降低，所以在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中須向緩沖液中加入2-巰基乙醇，去除抗原表面非特異性的IgM［22-23］。通過(guò)MAT可檢測(cè)到大多數(shù)種屬宿主的IgG抗體，但是急性感染發(fā)生的早期可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。MAT操作簡(jiǎn)便，與DT相比更具有特異性和敏感性，廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室診斷及流行病學(xué)調(diào)查。

3.4乳膠凝集試驗(yàn)（latex agglutination test， LAT）LAT是將乳膠顆粒包被可溶性抗原，并加入待檢測(cè)血清中觀察凝集現(xiàn)象，若感染弓形蟲則會(huì)出現(xiàn)凝集反應(yīng)。LAT可方便快速地檢測(cè)抗弓形蟲IgG抗體，通常做為一種流行病學(xué)的篩查方法。若出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，則需要其他血清學(xué)檢測(cè)以便進(jìn)一步檢查。

改良LAT可檢測(cè)抗弓形蟲IgM抗體，由此判斷是否在近期感染弓形蟲。分離出微粒體抗原Sp-2可與抗弓形蟲抗體結(jié)合，與IgG和IgM的反應(yīng)隨濃度不同產(chǎn)生變化，只有當(dāng)乳膠顆粒濃度≤100 μg/mg抗原時(shí)，Sp-2抗原與IgM結(jié)合發(fā)生反應(yīng)［24］。根據(jù)該抗原的獨(dú)特反應(yīng)，可以利用蛋白酶-K處理的抗原包被的微粒建立LAT檢測(cè)人體IgM抗體，可有效排除IgG抗體、風(fēng)濕因子或抗核抗體的干擾［25］。

3.5間接血凝試驗(yàn)（indirect hemagglutination test，IHA）將抗體包被于紅細(xì)胞表面，成為致敏的載體，然后與弓形蟲的可溶性抗原結(jié)合并發(fā)生凝血，即為陽(yáng)性。IHA對(duì)弓形蟲急性感染和先天性感染比較不敏感，但I(xiàn)gG-IHA檢測(cè)簡(jiǎn)單快速，因此廣泛應(yīng)用于流行病學(xué)調(diào)查。通過(guò)建立IgM-IHA檢測(cè)模型，將弓形蟲可溶、堿性且具有熱穩(wěn)定性提取物包被于成熟穩(wěn)定的人類紅細(xì)胞，將該模型用于人類急性弓形蟲病的血清學(xué)檢測(cè)，其靈敏度達(dá)到100％，特異性達(dá)到98.5％［26］。

3.6間接熒光抗體試驗(yàn)（indirect fluorescent antibody test， IFAT）IFAT是檢測(cè)IgG和IgM抗體的簡(jiǎn)易試驗(yàn)，并廣泛應(yīng)用于檢測(cè)人及動(dòng)物的弓形蟲抗體。將已失去活性的弓形蟲速殖子置于血清中進(jìn)行培養(yǎng)，加入熒光抗物種抗體，通過(guò)熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。結(jié)果提示其靈敏度為80.4％～100％，特異度為91.4％～95.8％。熒光標(biāo)記的抗體在不同物種之間可以通用，該方法相對(duì)比較便宜，但是肉眼觀察可能導(dǎo)致結(jié)果有一定偏差［27-28］。

3.7免疫吸附凝集試驗(yàn)（immunosorbent agglutination assay， ISAGA）抗人IgM抗體包被微量滴定板，加入血清37 ℃孵育2 h，洗板后加入速殖子懸濁液，在37 ℃潮濕溫室中孵育過(guò)夜。人血清中的特異性IgM與抗人IgM和寄生蟲粘附固定抗原結(jié)合，該法比IgM-ELISA更簡(jiǎn)便易行，但要求大量的弓形蟲速殖子［29］。IgM-ISAGA通過(guò)使用弓形蟲速殖子代替乳膠顆粒包被可溶性抗原，可用于診斷弓形蟲急性感染和先天性感染。

3.8免 疫層析 法（immunochromatographic test，ICT）該法通過(guò)膠體金標(biāo)記抗原或抗體作為示蹤物，并使用纖維素膜作為固體支撐。待檢測(cè)的抗原或抗體滴在硝酸纖維膜的樣品板上，通過(guò)虹吸現(xiàn)象緩慢滲透共軛墊，抗原抗體復(fù)合物呈現(xiàn)出膠體金反應(yīng)。在弓形蟲急性感染早期（2～4 d）可使用膠體金交聯(lián)的抗排泄/分泌物抗原IgG抗體進(jìn)行快速ICT［12］。與ELISA相比結(jié)果具有一致的敏感性和特異性，操作簡(jiǎn)便快速，無(wú)需特殊儀器，適合廣泛應(yīng)用。

3.9蛋白免疫印跡試驗(yàn)（western-blotting， WB）WB是血清與弓形蟲抗體在膜上發(fā)生反應(yīng)后轉(zhuǎn)移到聚丙烯酰胺凝膠上，產(chǎn)生的條帶與已知的分子量相比對(duì)而得到結(jié)果。WB靈敏度達(dá)到100％，檢測(cè)人唾液中的特異性抗弓形蟲IgG抗體的特異度可達(dá)98.5％，但對(duì)于弓形蟲視網(wǎng)膜炎癥的特異性診斷低于83.0％。WB是一種有效的補(bǔ)充診斷方法，用于新生兒先天性弓形蟲病診斷。如IgA與IgM的ELISA、IgG與IgM的WB兩者結(jié)合，分別具有94％、94％和100％的靈敏度［30］。

3.10親和力試驗(yàn) 寄生蟲感染后產(chǎn)生抗弓形蟲IgG，不能確定感染具體時(shí)間，抗弓形蟲IgM抗體不能作為急性感染的精確標(biāo)準(zhǔn)，IgA也不能作為急性階段的特異性標(biāo)志物。Hedman等［31］描述的IgG親和力試驗(yàn)被廣泛應(yīng)用于鑒別急性和慢性弓形蟲感染。弓形蟲抗原的特異性抗體的親和力在不同感染時(shí)期有所不同。在早期感染時(shí)，親和力隨感染病程而上升，因此可用于區(qū)分慢性和急性感染。該試驗(yàn)適合于不同的血清學(xué)試驗(yàn)過(guò)程中檢測(cè)IgG、IgM和IgA，但具有一定限制性，如妊娠婦女檢測(cè)弓形蟲特異性IgG親和力較低，可能與懷孕期間對(duì)弓形蟲的治療有關(guān)［32］。

4　基于檢測(cè)寄生蟲核酸的分子生物學(xué)診斷

分子生物學(xué)診斷通常作為血清學(xué)檢測(cè)弓形蟲病之外的檢測(cè)方法，常規(guī)方法雖然正確率較高，但是對(duì)產(chǎn)前診斷和免疫缺陷患者的診斷具有一定限制性。如妊娠婦女可能通過(guò)血清學(xué)確診感染弓形蟲，此時(shí)胎兒被感染的潛在幾率增加，但是血清學(xué)結(jié)果并不能確定寄生蟲是否通過(guò)母嬰傳播導(dǎo)致胎兒感染，而分子生物學(xué)方法可對(duì)胎兒是否感染弓形蟲進(jìn)行準(zhǔn)確診斷。

4.1常規(guī)PCR由于傳統(tǒng)診斷方法的內(nèi)在限制，PCR是除血清學(xué)之外診斷弓形蟲病的重要方法之一。PCR可以進(jìn)行有效體外酶擴(kuò)增，在較短時(shí)間內(nèi)通過(guò)微量原料特異性擴(kuò)增出DNA片段。生物樣本檢測(cè)弓形蟲感染常用的拷貝目的基因包括B1基因、529 bp的重復(fù)序列、內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔序列（ITS-1）和18S rDNA序列。當(dāng)出現(xiàn)寄生蟲血癥時(shí)，對(duì)血液樣本進(jìn)行PCR意義不大，SAG1、SAG2和GRA1等單拷貝基因也可作為PCR的目的基因。

檢測(cè)弓形蟲B1基因被廣泛應(yīng)用于先天性弓形蟲病的產(chǎn)前檢測(cè)以及免疫缺陷患者的弓形蟲感染。將529 bp的重復(fù)序列擴(kuò)增10～100次后進(jìn)行檢測(cè)，比單純檢測(cè)B1基因更敏感［33-34］。在極少數(shù)實(shí)驗(yàn)中，多拷貝ITS-1和18S rDNA也可以作為靶基因，與B1基因的敏感性相似。巢式PCR針對(duì)B1基因、529 bp和ITS-1序列檢測(cè)時(shí)，建立2個(gè)連續(xù)PCR體系所使用的2組不同引物，并且使用第1次PCR的反應(yīng)產(chǎn)物作為第2次PCR反應(yīng)模板，其檢測(cè)結(jié)果與常規(guī)PCR檢測(cè)相比較，更具有敏感性和特異性。巢式PCR對(duì)529 bp重復(fù)片段的檢測(cè)極限是640 fg的寄生蟲DNA，對(duì)B1基因最小為5.12 pg，巢式PCR對(duì)B1基因的靈敏度高于ITS-1［35］。

4.2實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（real-time PCR，RTPCR） RT-PCR可檢測(cè)到低濃度的靶DNA并且定量正在復(fù)制的特異性DNA模板，在每個(gè)循環(huán)通過(guò)探針和嵌合染料可檢測(cè)到擴(kuò)增產(chǎn)物，可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)已知濃度進(jìn)行定量。RT-PCR可對(duì)人的血液、腦脊液、羊水、房水及其他樣本檢測(cè)，還可用于評(píng)估弓形蟲病進(jìn)程和治療效果，以及弓形蟲感染強(qiáng)度［36-38］。與常規(guī)PCR和巢式PCR相比，RT-PCR檢測(cè)B1基因是診斷先天性弓形蟲病表現(xiàn)最好的技術(shù)。由于其是一個(gè)快速封閉的管狀系統(tǒng)，RT-PCR可消除污染對(duì)定量結(jié)果的影響，因此適于標(biāo)準(zhǔn)化校準(zhǔn)。

Opsteegh等［39］發(fā)明一種磁力捕獲特異性序列的方法，可從不同組織分布的弓形蟲組織包囊這樣的大組織樣本中定位弓形蟲DNA，也可通過(guò)微量樣本進(jìn)行檢測(cè)，這項(xiàng)技術(shù)結(jié)合RT-PCR可用于肉類樣本檢測(cè)，評(píng)估弓形蟲感染食源性動(dòng)物的不同組織的干擾因素。

4.3環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法（loop-mediated isothermal amplification， LAMP） LAMP是一種特殊的DNA擴(kuò)增技術(shù)，在等溫條件下用4種引物識(shí)別靶基因的6個(gè)區(qū)域。該法靈敏度略高于常規(guī)PCR，略低于RT-PCR［40］。LAMP可從人類和動(dòng)物樣本以及水樣本中定位弓形蟲基因如SAG1、29-bp重復(fù)序列、B1、SAG2、GRA1、卵囊壁蛋白（oocyst wall protein， OWP）基因和18S rRNA［41］。LAMP可以在感染弓形蟲2 d豬的血液樣本中檢測(cè)出弓形蟲DNA，該方法可用于弓形蟲病的早期診斷。B1-LAMP和OWP-LAMP檢測(cè)閾值極低，LAMP在人血樣本和水樣本檢測(cè)弓形蟲時(shí)通常定位SAG1、SAG2和 B1基因。由于LAMP只要求水浴或加熱器，能目測(cè)到擴(kuò)增產(chǎn)物，可在沒(méi)有精密復(fù)雜的昂貴儀器時(shí)做為一種診斷替代方法。但是就目前而言，LAMP似乎極易被污染，因此嚴(yán)格的質(zhì)量控制是降低假陽(yáng)性的基本標(biāo)準(zhǔn)。

5　小　　結(jié)

顯微鏡檢查和活體檢查是針對(duì)弓形蟲檢查的“金標(biāo)準(zhǔn)”，雖然準(zhǔn)確性高，但比較費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不便于大樣本篩查。臨床上更多應(yīng)用血清學(xué)檢測(cè)方法檢測(cè)弓形蟲特異性抗體或循環(huán)抗原，具有較高的準(zhǔn)確性，操作簡(jiǎn)便快捷，臨床上經(jīng)常使用，也適用于流行病學(xué)調(diào)查。在診斷弓形蟲病的方法中，分子生物學(xué)方法最為標(biāo)準(zhǔn)化，也比較客觀，是近年來(lái)持續(xù)研究與發(fā)展的熱點(diǎn)。了解弓形蟲基因組、轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)和基因及血清學(xué)分型法，對(duì)調(diào)查弓形蟲的遺傳特性有著至關(guān)重要的作用。綜合運(yùn)用分子生物學(xué)和生物技術(shù)，可能為診斷弓形蟲病提供全新的思路。

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（2015-11-11收稿 2015-12-28修回）

（責(zé)任編委 曲 芬 本文編輯 陳玉琪）

［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］［中國(guó)圖書資料分類號(hào)］ R531.8 A

［文章編號(hào)］1007-8134（2016）03-0139-05

*Corresponding author， E-mail： liuquan1973@hotmail.com

［基金項(xiàng)目］公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)（201303042）

［作者單位 ］130117，長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心（馮嘉軒、吳澤民、劉智），生物教研室（李娜）；130122 長(zhǎng)春，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所病毒學(xué)研究室（趙永坤），寄生蟲病研究室 吉林省人畜共患病預(yù)防與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（劉全）；133002，延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫與病原微生物教研室（孟繁平）

［通訊作者］劉全，E-mail∶ liuquan1973@hotmail.com

Advances in diagnostic techniques of toxoplasmosis

FENG Jia-xuan， ZHAO Yong-kun， MENG Fan-ping， WU Ze-min， LIU Zhi， LI Na， LIU Quan*
Center of Experimental Teaching， College of Basic Medicine， Changchun University of Chinese Medicine， Changchun， Jilin 130117， China

［Abstract］Toxoplasmosis is a severe parasitic zoonosis caused by Toxoplasma gondii， which poses a threat to human health. In this paper， the diagnostic techniques of toxoplasmosis and detection methods of T. gondii were reviewed， including non-DNA-based diagnostic methods， serological assays， and molecular methods based on detection of parasite nucleic acid in hope of providing an insight into the development of novel diagnostic technologies and methods of toxoplasmosis.

［Key words］toxoplasmosis； molecular biology； diagnosis