血清丙氨酸氨基轉移酶檢測的臨床可報告范圍的建立及評價

陳　群，羅文沈，吳愿如，吳雪梅

(深圳市龍崗區第二人民醫院檢驗科，廣東深圳 518112)

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·論著·

血清丙氨酸氨基轉移酶檢測的臨床可報告范圍的建立及評價

陳群，羅文沈，吳愿如，吳雪梅

(深圳市龍崗區第二人民醫院檢驗科，廣東深圳 518112)

摘要:目的分析德賽診斷試劑采用Beckman Dxc800生化儀檢測血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)的靈敏度(FS)、最大允許稀釋度(MAD)、分析測量范圍(AMR)等，并建立ALT臨床可報告范圍(CRR)，為臨床提供可靠檢測結果。方法參照美國臨床和試驗室標準化協會(CLSI)EP6-A文件，選用覆蓋廠家聲明AMR的高、低值患者混合標本配制系列等間距不同濃度標本進行ALT重復測定2次，應用SPSS19.0統計軟件進行AMR多項式回歸分析；選用5份較低濃度標本進行日間重復測定ALT，以相應的變異系數與檢測均值關系確定FS；選用3份高濃度ALT標本用生理鹽水進行不同倍數稀釋后再測定，計算回收率，確定MAD，并結合FS建立CRR。結果應用德賽診斷試劑采用Beckman Dxc800生化儀檢測血清ALT的AMR為5.50～847.50 U/L，FS為3.698 U/L，MAD為1∶8，CRR為3.698～6 780.000 U/L。結論應用德賽診斷試劑采用Beckman Dxc800生化儀進行血清ALT檢測的AMR較廠家聲明的寬；所建立的CRR可滿足臨床常規需要。

關鍵詞:丙氨酸轉氨酶；評價研究；臨床可報告范圍

根據國際標準化組織頒布的《醫學實驗室質量和能力的專項要求》(ISO15189)和中國《醫療機構臨床實驗室管理辦法》，對自建系統的主要方法學性能應進行驗證或評價，證實其能達到相應標準后才能用于臨床檢測。定量檢測項目需進行方法學驗證試驗，包括準確度、精密度、靈敏度(FS)、特異度、可報告范圍(CRR)和參考區間等[1]。本研究主要參照美國臨床和試驗室標準化協會(CLSI)EP6-A文件和文獻[2-4]對本試驗室檢測血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)的自建系統的FS、最大允許稀釋度(MAD)、分析測量范圍(AMR)進行研究，并由此建立CRR，現報道如下。

1材料與方法

1.1儀器與試劑Beckman Dxc800生化分析儀、德賽ALT生化試劑(批號07120/00001206)和校準品(591009910064)、Randox質控品(批號27601、27602)等。

1.2試驗操作及標本要求對各種試驗、儀器均嚴格遵守各項標準操作規程操作。確保儀器處于良好狀態。應用Beckman Dxc800生化分析儀，使用德賽ALT生化試劑，經校準并質控在控。試驗所用標本均來本院臨床科室，要求新鮮、膽紅素小于684 μmmol/L、無脂濁及溶血。

1.3AMR試驗參照CSLI EP6-A文件，收集高ALT水平患者混合血清，要求超過廠家線性范圍20%～30%，離心后取上清液作為高值標本(H)；以同樣方法收集低ALT水平患者混合血清作為低值標本(L)。將H和L按20L+0H、19L+1H、18L+2H、17L+3H、16L+4H、15L+5H、14L+6H、12L+8H、10L+10H、8L+12H、6L+14H、5L+15H、4L+16H、3L+17H、2L+18H、1L+19H、0L+20H的配比關系配制得到17份試驗標本(A1～17)。每份標本重復測定2次。記錄檢測結果。各種操作標本采集后1 d內完成。

1.4FS試驗收集5個低濃度標本分別標記為B1～5(接近廠家線性范圍下限，B1經56 ℃水浴60 min處理)，然后分裝，-21 ℃保存；每天1批，每批重復測定2次，連續測定10 d。FS指日間重復變異系數(CV)為20%時對應檢驗限樣品具有的平均濃度。

1.5MAD及CRR試驗收集3個高濃度標本(C1～3)，用生理鹽水分別進行2、4、8、16倍稀釋，然后進行檢測。記錄實測值。計算稀釋回收率(稀釋后實測值×100%/稀釋后預期值)，在90%～110%范圍內確定MAD。CRR指患者標本經稀釋、濃縮或其他處理后向臨床所能報告的結果范圍。CRR下限為FS，上限為AMR上限×MAD。

1.6統計學處理采用SPSS19.0統計軟件進行重復性誤差和多項式回歸分析[5-6]。設定重復性和線性允許誤差分別為5%和10%。重復性誤差分析公式：

2結果

2.1AMR試驗結果A1～17標本檢測CVr=2.46%，<5%設定目標。以加入H相對量為X與實測均值為Y進行多項式回歸分析得最適多項式為二次，與一次方程偏倚分析中A1、A2點超過設定10%允許偏差，在5.500～858.000 U/L呈非線性。經繪制散點圖觀察到A17點存在明顯偏差后舍掉該點再進行回歸修正分析得直接判斷為線性，見圖1。最適為一次多項式Y=44.687X+4.874，確定AMR為5.500～847.500 U/L。A1～A17標本檢測結果見表1。

圖1　以H相對加入量為X軸與實測均值為

試驗標本測量結果1測量結果2測量均值差值A1(20L+0H)565.50-1A2(19L+1H)434142.002A3(18L+2H)959896.50-3A4(17L+3H)141138139.503A5(16L+4H)182176179.006A6(15L+5H)227232229.50-5A7(14L+6H)278272275.006A8(12L+8H)365362363.503A9(10L+10H)453465459.00-8A10(8L+12H)548555551.50-7A11(6L+14H)631622626.509A12(5L+15H)670663666.507A13(4L+16H)722728725.006A14(3L+17H)760752756.008A15(2L+18H)815822818.50-7A16(1L+19H)851844847.507A17(0L+20H)853863858.00-10

2.2FS試驗結果將B1～5標本重復檢測的CV(%)與實測均值作回歸分析得出最適方程為Y=-0.226X+8.218。將20%代入該方程得出FS為3.698 U/L。B1～5標本檢測結果見表2。

表2　　B1～5標本檢測結果

2.3MAD及CRR試驗結果用生理鹽水作稀釋介質時確定的MAD為1∶8，C1～3標本檢測結果見表3。結合FS為3.698 U/L，AMR上限為847.500 U/L，MAD為1∶8，確定CRR為3.698～6 780.000 U/L。

表3　　C1～3標本檢測結果

3討論

眾所周知，ALT是一項主要反映肝功能受損的靈敏指標，輕微肝損傷即可明顯升高。臨床很多肝臟疾病均可導致血清ALT明顯升高，時常會超過1 000 U/L，甚至超出現有測定方法的測量范圍。故對ALT檢測系統分析性能的驗證分析非常重要。目前，關于參考CLSI-EP系列文件，使用德賽診斷生化試劑采用Beckman Dxc800生化分析儀進行血清ALT檢測的自建系統的分析性能驗證和評價研究較少見，特別是臨床可報告范圍的建立和分析相關文獻報道更為罕見。而該分析性能是廣大檢驗工作者最終能否向臨床發出可靠檢驗報告的重要指標之一。

本研究在AMR建立的研究中參照CLSI-EP6-A文件要求，采用了由高值和低值混合標本按比例配成的覆蓋廠家聲明分析測量范圍(4～550 U/L)的17份等間距的不同濃度標本，在所得數據線性偏倚分析中發現，A1、A2點偏倚超過設定10%允許偏差，說明其引入的誤差不能被接受。經繪制散點圖直接觀察到A17點存在明顯線性偏倚，去掉A17點后進行修正回歸處理得出最適為一次方程，在A1～16點范圍內呈線性，從而確定AMR為5.50～847.50 U/L，較

李俊立等[4]報道的數據范圍窄，較田峰[7]報道的數據范圍寬，可能與本研究使用的儀器、試劑、具體操作方法不同有關。

在探討FS時直接采用一系列低濃度患者標本，與采用系列稀釋低濃度樣品的方法比較[8]，可避免由于稀釋操作或基質效應可能引起的各種誤差。

雖然本研究所建立的AMR較廠家聲明的數據范圍寬，但在臨床常規檢測中還是存在相當多的超出847.500 U/L的標本，還需進行適當倍數稀釋后處理。這就涉及用何種稀釋介質和最大允許稀釋度的問題。本研究參照試劑說明書，直接采用生理鹽水作為稀釋介質。結果顯示，MAD為1∶8，且發現隨稀釋倍數增大所得回收率也增大。而朱愛萍等[9]報道用生理鹽水稀釋時在1∶3倍以內與原倍血清測定結果比較差異無統計意義(P>0.05)，且隨稀釋倍數增大所得回收率逐漸降低，筆者推測以上差異除與本研究采用不同的試劑、儀器、質量管理目標要求有關外，與試驗所用的稀釋介質引起基質效應的關系更大[10]。與姚少羽等[3]報道的結果也有區別，可能與本研究測定方法學不同有關。通過確定MAD，為在日常操作時對高水平標本的稀釋提供了可靠依據。本研究結合FS、AMR和MAD，最后建立的CRR為3.698～6 780.000 U/L，可滿足臨床常規需要。

綜上所述，本研究通過分析德賽診斷生化試劑采用Beckman Dxc800生化分析儀進行血清ALT檢測的自建檢測系統的AMR和CRR等相關性能，確定了該項目在本試驗室日常檢測工作中的準確性。同時也提醒廣大檢驗工作者不同試驗室檢測系統具體的分析性能也不同，在實際應用中應對其進行驗證，以確保檢測結果可靠性[11]。

參考文獻

[1]畢波，呂元．定量檢測方法學性能驗證的系統設計[J]．中華檢驗醫學雜志，2007，30(2)：143-145．

[2]楊有業，張秀明．臨床檢驗方法學評價[M]．北京：人民衛生出版社，2008：142-193．

[3]姚少羽，孫艷虹，高玲，等．Vitros950生化檢測系統最大稀釋度測定[J]．中國實用醫藥，2008，3(34)：31-34．

[4]李俊立，彭長華，王昌富．BACKMAN LX20生化檢測系統ALT可報告范圍的評價[J]．現代檢驗醫學雜志，2010，25(6)：71-73．

[5]Jhang JS,Chang CC,Fink DJ,et al.Evaluation of linearity in the clinical laboratory[J].Arch Pathol Lab Med,2004,128(1):44-48.

[6] Kroll MH,Praestgaard J,Michaliszyn E,et al.Evaluation of the extent of nonlinearity in reportable range studies[J].Arch Pathol Lab Med,2000,124(9):1331-1338．

[7]田峰．貝克曼CX4生化儀上使用開放試劑測試肝功能項目的探討[J]．現代檢驗醫學雜志，2007，22(2)：84-85．

[8]陳斌鴻，羅恒，李煒煊，等．奧林巴斯AU5400全自動生化分析儀檢測尿素氮臨床可報告范圍的建立與評價[J]．實驗與檢驗醫學，2011，29(2)：117-120．

[9]朱愛萍，呂秀英，郭書云．不同稀釋介質對15個生化項目測定的影響[J]．國際檢驗醫學雜志，2009，30(3)：214-216．

[10]李萍．臨床實驗室管理學[M]．北京：高等教育出版社，2006：254-264．

[11]萬臘根，孔蘊源，羅清，等．定量檢測系統臨床可報告范圍評價方法的探討[J]．現代檢驗醫學雜志，2010，25(5)：150-152．

Establishment and evaluation on the clinical reportable rang of serum alanine aminotransferase

ChenQun，LuoWenshen,WuYuanru,WuXuemei

(DepartmentofClinicalLaboratory,theSecondPeople'sHospitalofLonggang,ShenZhen,Guangdong518112,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the functional sensitivity, maximum allowable dilution, analytical measurement range and clinical reportable rang of the serum alanine aminotransferase (ALT) detected by Beckman Dxc800 automatic analyzer with the DiaSys diagnostic biochemistry reagent kits.MethodsAccording to the EP6-A document published in 2004 by American Clinical and Laboratory Standards Institution(CLSI),these samples with equal interval, proportional prepared with the low levels serum and the high levels serum and their concentration exceeding the range claimed by manufacture, were detected twice each.The results were registered and analyzed by the SPSS19.0 statistic software with polynomial regression analysis to determine the analytical measurement range. Five samples at the low concentration,which were prepared previously, were detected repeat at day interval. And the functional sensitivity was determined with combining the coefficient of variation and the average value. Three samples,diluted to different dilution ratio with physiological saline, were detected. The dilution recovery rate, which was required in the range of 90%-110%,was calculated to establish the clinical reportable rang by combining the Functional Sensitivity. ResultsThe analytical measurement range of the serum ALT detected by Beckman Dxc800 analyzer was 5.50-847.50 U/L,the runctional sensitivity was 3.698 U/L,the maximum allowable dilution was 1∶8 and the clinical reportable rang was 3.698-6 780.0 U/L.ConclusionThe analytical measurement range of the serum ALT detected by Beckman Dxc800 analyzer with the DiaSys diagnostic biochemistry reagent kits, was wider than that of being claimed by manufacture,the clinical reportable rang could meet the need of clinic.

Key words:alanine aminotransferase;evaluation study;clinical reportable rang

(收稿日期：2015-10-07)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.03.031

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)03-0362-03

作者簡介：陳群，男，主管檢驗師，主要從事臨床檢驗和實驗室技師管理研究。