microRNA-375在肝纖維化中的作用及其調控信號通路的研究

陳 征 劉曉峰 麻樹霖

·論著·

microRNA-375在肝纖維化中的作用及其調控信號通路的研究

陳 征 劉曉峰 麻樹霖

目的 通過提高肝星狀細胞(HSC)中微小核糖核酸(microRNA-375，miR-375)的表達水平，探討miR-375在肝纖維化進程中的作用及其靶向信號通路。方法 通過瞬時轉染將miR-375mimic或者miR-375 mimic negative control (NC)轉染到大鼠肝星狀細胞(HSC-T6)，將細胞分為mimic組、NC組和空白對照組。通過實時熒光定量聚合酶鏈反應(qRT-PCR)、免疫印跡實驗(Western blot)檢測細胞中蛋白激酶B(Akt)基因、3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1(PDK1)基因表達水平的變化。分別用細胞流式技術、細胞計數實驗(CCK-8)試劑盒和細胞遷移實驗檢測過表達的miR-375對HSC-T6的細胞周期、增殖和遷移能力的影響。結果 與其他兩組相比，mimic組細胞中Akt、PDK1含量明顯下降(P<0.05)，細胞停滯在G0/G1期的比例升高(P<0.05)、增殖受到抑制(P<0.05)，細胞遷移的差異無統計學意義(P>0.05)。結論 miR-375可抑制HSC的增殖，負性調控肝纖維化進程。

miRNA-375；肝纖維化；轉染；信號通路

肝星狀細胞(HSC)在肝纖維化形成的過程中起著重要的作用。HSC在正常肝臟中處于靜止狀態，在肝臟受損時被激活，活化的HSC分泌大量的細胞外基質和活性細胞因子，自身持續激活是肝纖維化形成的中心環節[1]。在HSC活化過程中伴隨許多基因表達的改變，進而導致細胞中一系列轉錄因子、信號通路蛋白以及膠原蛋白含量的改變。微小核糖核酸(microRNA， miRNA)是一類長約20～25個核苷酸的非編碼的單鏈RNA分子，它通過與靶基因mRNA 3′端非翻譯區(3′UTR)完全或不完全配對，降解靶基因mRNA，在轉錄后水平調控基因表達[2-3]。目前很多研究發現，多種miRNA參與了HSC的活化和纖維化形成。本課題小組的前期實驗研究發現，與靜止期HSC相比，miR-375在活化期HSC中表達下調。……