新生血管動物模型的構建

郭 婷，宋洪元，趙世紅

(第二軍醫大學長海醫院眼科，上海 200433)

新生血管是指從已有毛細血管發展形成新血管，該過程受血管生成因子和血管抑制因子雙重調控，是一個動態平衡的過程[1]。這個過程有利于胚胎發育、傷口修復以及缺血組織再灌注等[2]。然而對于腫瘤、早產兒視網膜病變(retinopathy of prematurity，ROP)和糖尿病視網膜病變(diabetic retinopathy,DR)等疾病，新生血管卻會造成身體嚴重損害[3-6]。它們產生新生血管的原因有各自的機制，目前還尚不明確。為了深入探討這些疾病的發病機制，建立成熟和接近臨床的新生血管動物模型是必要前提，本文對建立新生血管動物模型的4種常用方法進行了綜述。

1 主動脈環血管生成模型

1990年，Nicosia和Ottinetti首次設計了大鼠主動脈環血管生成模型(aortic ring assay,ARA)[7]。這種方法目前應用較廣，所選用的動物主要有大鼠、小鼠、豬等[8]。

1.1 方法

分離8～12周野生型C57 BL/6小鼠胸主動脈，于Opti-MEM培養基中清洗，剝離干凈殘帶組織后切成寬為0.5～1.0 mm的環，Opti-MEM饑餓過夜，第2天將環置于鋪有基質膠的96孔板中培養，觀察主動脈形成新生血管的情況[9]。本模型能檢測生長因子和一些小分子藥物對新生血管形成的影響。

1.2 影響因素

1.2.1 培養基 主動脈環培養采用Opti-MEM培養基加2.5%的胎牛血清,相比DMEM加2.5%的胎牛血清培養基，主動脈環在Opti-MEM培養基中出芽效果更明顯[9]。

1.2.2 基質和生長因子 培養主動脈環的基質主要有膠原基質、纖維蛋白基質、基底膜基質[10,11]。生長因子有血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)。在纖維蛋白基質中加入bFGF,或在膠原基質中加入VEGF，新生血管出芽效果較明顯，基底膜基質添加10%的胎牛血清而不添加任何生長因子是最優組合[9]。……