外周血白細胞介素32和金屬基質蛋白酶-2對HBV相關慢加急性肝衰竭預后的預測價值研究

曹力，汪美華，鄒美銀，朱勇根

外周血白細胞介素32和金屬基質蛋白酶-2對HBV相關慢加急性肝衰竭預后的預測價值研究

曹力，汪美華，鄒美銀，朱勇根

目的探討外周血白細胞介素（interleukin,IL）-32和金屬蛋白酶（matrixmetalloproteinases,MMP）-2表達水平對HBV相關慢加急性肝衰竭（HBV-associated acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF）預后的預測價值。方法選擇34例HBV-ACLF和31例慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）患者作為研究對象，檢測外周血IL-32和MMP-2的表達水平，并與ALT、AST、TBIL、ALB及PT等指標進行相關性分析；采用Logisitic回歸分析IL-32和MMP-2預測HBV-ACLF預后的價值。結果HBV-ACLF組IL-32與TBIL、PT呈中等程度正相關（rs=0.774、0.686），與ALB呈弱負相關（rs=-0.456）；MMP-2與ALB呈弱負相關（rs=-0.451）；IL-32與MMP-2呈弱正相關（rs=0.580）。CHB組IL-32與TBIL、PT呈弱正相關（rs=0.439、0.555）；MMP-2與AST呈弱正相關（rs=0.417），與ALB呈弱負相關（rs=-0.541），與TBIL、PT呈中等程度正相關（rs=0.647、0.766）；IL-32與MMP-2呈弱正相關（rs=0.590）。HBV-ACLF組、CHB組和對照組外周血IL-32表達水平呈依次升高（P均＜0.05）。HBV-ACLF組MMP-2表達高于CHB組和對照組（P均＜0.05），但CHB組與對照組相比，差異無統計學意義。在合并感染率、外周血IL-32和MMP-2表達水平方面，HBV-ACLF組明顯高于CHB組。Logisitic回歸分析發現IL-32與HBV-ACLF的預后密切相關。結論外周血IL-32和MMP-2的表達水平可反映肝損傷嚴重程度；IL-32與HBV-ACLF的預后密切相關。

乙型肝炎，慢性；慢性肝疾病急性衰竭；白細胞介素-32；基質金屬蛋白酶-2

目前，我國仍為乙型肝炎（乙肝）大國，HBV感染引起的肝衰竭占到肝衰竭總數的83%，而在慢加急性肝衰竭（acute-on-chronic liver failure,ACLF）患者中，HBV感染引起的則高達90%[1]。雖然隨著診療技術的發展，ACLF的病死率較前有所下降，但仍達到62.18%～72.30%[2]。因此，及時準確預測HBV相關ACLF（HBV-related ACLF,HBV-ACLF）的預后，以便盡早采取干預措施有著重要的臨床意義。目前國內外通用的終末期肝病預測模型（model for end-stage liver diseases,MELD）評分系統和Child-Pugh評分系統，對臨床預后的判斷有一定的意義，但其計算方式繁瑣，不包括肝衰竭的并發癥或使用主觀指標，缺乏連貫性，限制了它們在臨床上的應用。因此，尋求新的能預測ACLF預后的指標有著重要的臨床意義。在先前的研究中我們發現，白細胞介素（interleukin,IL）-32、金屬蛋白酶（matrixmetalloproteinases,MMP）-2在原發性肝癌患者中表達增多，可預測原發性肝癌的發生及預后[3]，之后我們對二者能否預測HBV-ACLF的預后［生存或死亡（包括病情加重自動出院）］進行了研究，現將相關研究結果報道如下。

1 對象與方法

1.1 對象選擇2008年5月—2012年6月在南通市第三人民醫院感染科住院的慢性乙肝（chronic hepatitis B,CHB）和HBV-ACLF共65例作為研究對象。CHB組31例，男18例，女13例，年齡（43.5± 6.7）歲；HBV-ACLF組34例，男19例，女15例，年齡（44.1±5.7）歲。入選HBV-ACLF病例中，經內科、人工肝等綜合治療后病情好轉16例，死亡或病情加重自動出院18例。入選病例的診斷標準均符合2010年版《慢性乙型肝炎防治指南》[4]和2012年版《肝衰竭診治指南》[5]；ACLF的診斷標準是在慢性肝病的基礎上，短期內發生急性肝功能失代償的臨床癥候群，表現為：①極度乏力，有明顯的消化道癥狀；②黃疸迅速加深，血清TBIL大于正常上限10倍或每日上升≥17.1μmol/L；③出血傾向，PTA≤40%或國際標準化比值≥1.5，并排除其他原因者；④失代償性腹水；⑤伴或不伴肝性腦病。同時排除合并甲、丙、丁、戊型肝炎病毒、HIV、真菌、細菌等其他病原體感染以及自身免疫性肝病、酒精性肝病和原發性肝癌；排除已經使用抗病毒藥物者。隨機抽取21名健康體檢者作為對照組，其中男14例，女7例，年齡（40.7±9.1）歲。

1.2 方法于入選病例入院后第2天清晨從其肘靜脈采取空腹血標本約5ml，分離血清保存在-70℃冰箱內，集中用于檢測IL-32和MMP-2。同步留取血清標本檢測ALT、AST、TBIL、ALB、PT等肝功能指標及HBV標志物。用上海精美科技有限公司提供的試劑盒，以ELISA法檢測IL-32和MMP-2，操作嚴格按試劑盒使用說明進行。ALT、AST、TBIL、ALB、PT及HBV標志物由本院檢驗科常規檢測。本研究經過南通市第三人民醫院倫理委員會同意。

1.3 統計學處理應用SPSS 16.0軟件進行統計分析。計量資料如呈正態分布或近似正態分布，以x±s表示，2組均數比較用成組t檢驗，多組均數比較用方差分析，組間兩兩比較采用LSD法；計量資料如呈偏態分布，以中位數（四分位數間距）［M(Q)］表示，多組比較采用秩和檢驗，組間兩兩比較采用Kruskal-Wallis檢驗。IL-32和MMP-2均為偏態資料，與肝功指標的相關性分析用Spearman相關分析。2組計數資料比較使用Fisher確切概率法。用Logisitic回歸分析預測HBV-ACLF預后相關因素。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

表1 HBV-ACLF組和CHB組患者肝功能指標Table 1 Com parison of liver function indicators between HBV-ACLF group and CHB group

2.1 HBV-ACLF組和CHB組患者一般情況HBVACLF組和CHB組患者肝功能情況見表1。預后情況：HBV-ACLF組好轉16例，死亡18例；CHB組好轉31例，死亡0例。

2.2 外周血IL-32、MMP-2與ALT、AST、TBIL、ALB、PT相關性分析

2.2.1 HBV-ACLF組IL-32與TBIL、PT呈中等程度正相關，與ALB呈弱負相關。MMP-2與ALB呈弱負相關。見表2。另外，IL-32與MMP-2呈弱正相關（rs=0.580，P=0.001）。

2.2.2 CHB組IL-32與TBIL、PT呈弱正相關。MMP-2與AST呈弱正相關，與ALB呈弱負相關，與TBIL、PT呈中等程度正相關。見表3。另外，IL-32與MMP-2呈弱正相關（rs=0.590，P=0.000）。

2.3 HBV-ACLF組、CHB組和對照組IL-32和 MMP-2表達水平比較HBV-ACLF組、CHB組和對照組IL-32表達水平依次降低（P＜0.05）。HBVACLF組MMP-2表達水平高于CHB組和對照組（P＜0.05），但CHB組與對照組相比，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表4。

2.4 HBV-ACLF預后影響因素分析以HBVACLF組患者年齡、病程、入院時HBV DNA載量、是否合并感染、外周血IL-32和MMP-2表達水平以及MELD評分作為自變量X，住院期間的預后［生存或死亡（包括病情加重自動出院患者）］為結果變量Y，用向前引入法引入法篩選出有統計學意義的自變量進行Logistic回歸分析。變量賦值情況見表5。結果顯示，僅有外周血IL-32和MELD評分值能影響HBV-ACLF的預后，其他因素如年齡、病程、是否合并感染和HBV DNA載量對HBVACLF預后的影響均無統計學意義（表6）。

表2 HBV-ACLF組IL-32、MMP-2與ALT、AST、TBIL、ALB、PT的相關性分析(n=34)Table 2 Correlation between IL-32,MM P-2 and ALT, AST,TBIL,ALB,PT in HBV-ACLF group(n=34)

表3 CHB組IL-32、MMP-2與ALT、AST、TBIL、ALB、PT的相關性分析(n=31)Table 3 Correlation between IL-32,MMP-2 and ALT, AST,TBIL,ALB,PT in CHB group(n=31)

表4 3組IL-32和MMP-2表達水平比較[M(Q)，ng/m l]Table 4 Comparison of MMP-2 and IL-32 levels among HBV-ACLF group,CHB group and control group[M(Q), ng/m l]

注：a.與對照組相比，P＜0.05；b.與CHB組相比，P=0.000

3 討論

在本研究中，我們發現HBV-ACLF患者外周血IL-32和MMP-2的表達水平明顯升高，高于CHB組和對照組，且二者與反映肝損傷嚴重程度的傳統指標密切相關。IL-32表達水平與HBVACLF預后密切相關。

表5 HBV-ACLF預后影響因素及賦值表Table 5 Prognostic factors for HBV-ACLF and the assignment

IL-32具有促進炎癥反應的作用，在肝臟發生炎癥反應的情況下，IL-32可通過炎癥因子刺激T細胞、自然殺傷細胞和單核細胞產生[6]，通過誘導IL-1、IL-6、IL-8、腫瘤壞死因子-α、干擾素γ等細胞因子的產生而發揮作用[7]。既往有研究表明，在HCV相關性肝病中，肝組織中IL-32表達程度與炎癥和纖維化程度密切相關，在肝癌患者的腫瘤細胞中表達也較多[8]；還有研究認為CHB患者外周血IL-32較健康人群明顯升高[9]，IL-32在HBV相關肝衰竭中的研究國內外鮮有報道。本研究發現，HBV-ACLF患者外周血IL-32表達水平明顯高于CHB患者，而CHB患者高于健康者，這與先前相關基礎和臨床研究的結論相一致，再次提示IL-32能反映肝臟炎癥損傷嚴重程度。

表6 Logistic回歸分析結果Table 6 Results of logistic regression analysis

MMP是一組以有選擇地降解細胞外基質中多種成分為特征的細胞因子，能刺激多種細胞分泌生長因子和細胞因子，發揮主要功能作用的是MMP-2，它主要在肝纖維化形成過程中活化，進入肝組織中，導致肝損傷，同時，還能趨化白細胞至炎癥部位，從而加重肝損傷[10]。既往研究發現，MMP-2在慢性丙型肝炎患者中表達水平明顯升高，可作為無創預測肝臟炎癥發生的指標之一[11]，CHB患者的MMP-2表達水平也明顯升高，提示MMP-2可用于判斷CHB患者病情嚴重程度[12]。本研究在既往研究基礎上對HBV-ACLF患者MMP-2表達水平的變化進行了相關研究。研究發現，CHB患者與健康人群相比無明顯差異，這與先前研究有相悖之處，一方面考慮可能與本組病例數偏少有關，另一方面還可能與入組患者肝臟炎癥損傷程度較輕有關。但HBV-ACLF患者外周血MMP-2表達水平明顯高于CHB患者和健康者，提示當肝臟炎癥損傷程度極度嚴重、肝細胞發生壞死時，MMP-2仍能反映肝臟的炎癥損傷程度。

肝衰竭主要發生在肝組織嚴重受損，肝細胞的再生能力明顯下降，殘存的肝細胞不足以維持肝臟正常的功能，導致肝功能失代償的情況下。ALB和影響PT的主要成分是在肝細胞合成的，外周血中二者表達水平可直接反映肝功能的狀態，如ALB表達水平下降，PT明顯延長，則提示肝細胞壞死程度極為嚴重或殘存的肝細胞極少，同時，PT亦是臨床診斷肝衰竭的重要指標之一[5]。本研究發現，無論是CHB患者還是HBV-ACLF患者外周血IL-32和MMP-2均與傳統反映傳統肝損傷程度的指標相關，提示二者能較好地反映肝細胞損傷及壞死嚴重程度。

有研究認為，肝衰竭患者年齡、是否合并肝性腦病、MELD評分和TBIL可作為預測肝衰竭以及短期死亡的相關因素[13-14]，還有研究發現與傳統的SOFA、CTP、MELD等評分模型相比，APACHEⅡ評分系統更有價值[15]，但上述評分系統納入參數較多，計算復雜，臨床應用不方便。IL-32和MMP-2與肝損傷嚴重程度密切相關，本研究對相關指標進行了分析，結果發現，是否合并感染和MELD評分在CHB和HBV-ACLF患者中表達存在明顯差異，但進一步采用Logistic回歸分析發現，僅有外周血IL-32和MELD評分與HBV-ACLF的預后密切相關。

總之，外周血IL-32和MMP-2的表達水平可反映肝損傷嚴重程度；IL-32對HBV-ACLF的預后有較強的預測作用，為臨床HBV-ACLF的預后提供了一種新的實驗室指標。

[1]Zheng SJ,Liu S,Liu M,et al.Progno s tic value of M30/M65 for outcome of hepatiti s B viru s-related acute-on-chronic liver failure［J］.World JGa s troenterol,2014,20(9):2403-2411.

[2]Chen JF,Wang KW,Zhang SQ,et al.Dexametha s one in outcome of patient s with hepatiti s B viru s-related acute-on-chronic liver failure［J］.JGa s troenterol Hepatol,2014,29(4):800-806.

[3]鄒美銀，朱勇根，汪美華，等.白細胞介素-32和基質金屬蛋白酶-2對原發性肝癌的診斷價值［J］.中華實驗和臨床感染病雜志（電子版），2014，7(6):821-824.

[4]中華醫學會肝病學分會，中華醫學會感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）［J］.傳染病信息，2011，24(1):Ⅲ-XV.

[5]中華醫學會感染病學分會肝衰竭與人工肝學組，中華醫學會肝臟病學分會重型肝病與人工肝學組.肝衰竭診治指南（2012年版）［J］.中華臨床感染病雜志，2012，5(6):321-327.

[6]Goda C,Kanaji T,Kanaji S,etal.Involvement of IL-32 in activation-induced cell death in T cell s［J］.Int Immunol,2006,18 (2):233-240.

[7]Xu Q,Pan X,Shu X,etal.Increa s ed interleukin-32 expre ss ion in chronic hepatiti s B viru s-infected liver［J］.J Infect,2012,65(4): 336-342.

[8]Mo s chen AR,Fritz T,Clou s ton AD,et al.Interleukin-32:a new proinflammatory cytokine involved in hepatiti s C viru s-related liver inflammation and fibro s i s［J］.Hepatology,2011,53(6):1819-1829.

[9]張艷，許春梅，左維澤，等.乙型肝炎患者外周血T細胞亞群、lL-32、IL-6水平的變化及其臨床意義［J］.胃腸病學，2010，15 (8):471-474.

[10]Shukla V,Kumar Shakya A,Dhole TN,etal.Upregulated expre ss ion of matrix metalloproteina s e s and ti ss ue inhibitor s of matrix metalloproteina s e s in BALB/c mou s e brain challenged with Japane s e encephaliti s viru s［J］.Neuroimmunomodulation,2012,19(4): 241-254.

[11]Akca G,Tuncbilek S,Sepici-Dincel A.A ss ociation between matrix metalloproteina s e(MMP)-2,MMP-9 and total antioxidant s tatu s of patient s with a s ymptomatic hepatiti s C viru s infection［J］.Lett Appl Microbiol,2013,57(5):436-442.

[12]林英輝，黃小琪.慢性乙型肝炎患者血清基質金屬蛋白酶2及其組織抑制因子的變化及臨床意義［J］.第四軍醫大學學報，2007，28(20):1865-1867.

[13]Wlodzimirow KA,E s lami S,Abu-Hanna A,etal.A s y s tematic review on progno s tic indicator s of acute on chronic liver failure and their predictive value for mortality［J］.Liver Int,2013,33(1): 40-52.

[14]李晨，王慧芬，萬謨彬.HBV相關慢加急性肝衰竭患者體內細胞因子表達及動態變化的研究［J］.傳染病信息，2011，24(3): 151-155.

[15]Du s eja A1,Choudhary NS,Gupta S,et al.APACHE II s core i s s uperior to SOFA,CTP and MELD in predicting the s hort-term mortality in patient s with acute-on-chronic liver failure(ACLF)［J］.JDig Di s,2013,14(9):484-490.

（2015-01-07收稿 2015-03-15修回）

（責任編委 辛紹杰 本文編輯 張云輝）

Predictive value of interleukin-32 and matrix metalloproteinases-2 in peripheral blood for the prognosis of HBV-related acute-on-chronic liver failure

CAO Li,WANG Mei-hua*,ZOU Mei-yin,ZHU Yong-gen
Department of Infectious Diseases,the Third Hospital of Nantong,Nantong,Jiangsu 226006,China
*Corresponding author,E-mail:wmh85834876@163.com

Objective To investigate the predictive value of the levels of interleukin(IL)-32 and matrix metalloproteases (MMP)-2 in peripheralblood for the prognosisofpatientswith HBV-related acute-on-chronic liver failure(HBV-ACLF).M ethods Totally 34 HBV-ACLF patientsand 31 patientswith chronic hepatitis B(CHB)were enrolled in the study.The levels of IL-32 and MMP-2 in peripheralblood were detected by ELISA.The relationshipsbetween IL-32,MMP-2 and ALT,AST,TBIL,ALB,PTwere analyzed. The logistic binary regression was used to analyze the predictive value of the levels of IL-32 and MMP-2 for the prognosis of HBVACLF.Results In HBV-ACLFgroup,IL-32 had amoderately positive correlation with TBIL and PT（rs=0.774,0.686）,and aweakly negative correlation with ALB（rs=-0.456）;MMP-2 and ALBwereweakly negatively correlated（rs=-0.451）;IL-32 and MMP-2 were weakly positively correlated（rs=0.580）.In CHB group,IL-32 wasweakly positively correlated with TBIL and PT（rs=0.439,0.555）; MMP-2wasweakly positively correlated with AST（rs=0.417）,weakly negatively correlated with ALB（rs=-0.541）,andmoderately positively correlated with TBIL and PT（rs=0.647,0.766）;IL-32 and MMP-2 wereweakly positively correlated（rs=0.590）.The level of IL-32 in peripheral blood increased in turn in HBV-ACLF group,CHB group and control group(P＜0.05).The level of MMP-2 in HBV-ACLFgroup was significantly higher than that in CHB group and controlgroup(P＜0.05),but the levelwasnotsignificantly differentbetween CHB group and controlgroup.Compared with CHB group,the occurrence of co-infection wasmore frequent,and the levels ofMMP-2 and IL-32 were higher in HBV-ACLF group.Logisitic regression analysis showed that IL-32 was closely correlated with the prognosis of ACLF.Conclusions The levels of IL-32 and MMP-2 in peripheral blood can reflect the degree of liver injury.IL-32 is closely correlated with the prognosisof HBV-ACLF.

hepatitis B,chronic;acute-on-chronic liver failure;interleukin-32;matrixmetalloproteinase-2

R512.62

A

1007-8134(2015)04-0227-04

10.3969/j.issn.1007-8134.2015.04.010

226006，江蘇省南通市第三人民醫院感染科（曹力、汪美華、鄒美銀、朱勇根）

汪美華，E-mail:wmh85834876@163.com