峨參多糖含量測定與抗氧化作用的研究*

王岳峰，丁昭利

西南交通大學峨眉校區,四川 峨眉 614202

峨參多糖含量測定與抗氧化作用的研究*

王岳峰，丁昭利

西南交通大學峨眉校區,四川 峨眉 614202

目的：測定峨參提取物中的多糖含量并研究其抗氧化作用。方法：按照硫酸-蒽酮法，在分光光度計620 nm處測定吸光度，按標準曲線所得回歸方程計算峨參多糖的含量；同時采用鄰苯三酚在堿性條件下能發生自氧化的原理，根據抑制率=［A0-(Ax-Ai0)］/A0×100%，計算不同濃度的峨參多糖對超氧陰離子產生的抑制率來觀察其抗氧化作用。結果：峨參提取物中多糖濃度為0.389 9 mg/mL，含量為38.99%；且在0.1～1 mg/mL濃度內，多糖對超氧陰離子的抑制率隨多糖濃度的增加而增強，在0.6～1 mg/mL濃度之間，其抑制率明顯增強，最大抑制率達到31.22%。結論：峨參提取物中的多糖含量較高，且具良好的體外抗氧化活性，為把峨參多糖作為天然抗氧化劑開發提供了科學依據。

峨參;多糖；含量測定；抗氧化

峨參為傘形科峨參屬植物峨參Anthriscus sylvestris(L.)Hoffm.，主要含有峨參內酯，具有殺蟲、抑制癌細胞增殖，抗病毒、抗癌和抗有絲分裂的作用[1-5]。本文在原有研究的基礎上,對其多糖的含量進行測定,并對峨參多糖抗氧化作用進行研究。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 峨參多糖干燥粉末（課題組自行制備）

1.2 藥品和主要試劑 鄰苯三酚（分析純）,成都金線科技有限公司提供,批號：20100420；T r i s（分析純），成都金線科技有限公司提供，批號：20090315；蒽酮（分析純），成都市科龍化工試劑廠提供，批號：20101105；鹽酸成都市科龍化工試劑廠提供，批號：20100320；濃硫酸，成都市科龍化工試劑廠提供，批號：20100320；無水葡萄糖成都市科龍化工試劑廠提供，批號：20101020。

1.3 主要儀器及設備 FA2204B型精密天平，上海精密科學儀器有限公司提供；電子天平（61872型），上海民橋精密科學儀器有限公司提供；HH-4型數顯恒溫水浴鍋，常州澳華儀器有限公司提供；T U-1901型雙光束紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責任公司提供。

1.4 多糖的含量測定

1.4.1 原理 采用硫酸-蒽酮的方法，因為多糖在濃硫酸作用下，可以水解成單糖分子，并迅速脫水生成糠醛，之后糠醛與蒽酮縮便合成糠醛衍生物，呈藍綠色，顏色很穩定，在620 n m處有特征吸收，可以測定多糖含量。

1.4.2 標準曲線制備 取18支具塞試管，分成3組。每組分別加入0.1m g/mL葡萄糖標準液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL然后加蒸餾水至1.0mL，沿試管壁緩慢加入0.2%蒽酮-濃硫酸4.0mL，振蕩器混勻，在沸水浴中加熱10分鐘，冷卻10分鐘后，以不加葡萄糖標準液的試管為對照，在分光光度計上測定620 n m處吸光值。

1.4.3 多糖含量測定 稱取峨參多糖干燥粉末0.100 0 g于100mL容量瓶中，用蒸餾水定容，制成濃度為1m g/mL的峨參多糖溶液。移取0.5mL峨參多糖液，按照硫酸-蒽酮法，在分光光度計上測定620 n m處測定吸光度。按標準曲線所得回歸方程計算峨參多糖的含量。

1.5 抑制超氧陰離子

1.5.1 原理 采用鄰苯三酚在堿性條件下能發生自氧化的原理，

1.5.2 實驗操作方法 于9支10mL具塞試管中移取4.5mL 50mmo l/L的T r i s-Acc緩沖溶液（p H=8.2），每支試管加入4.2mL雙蒸水，再分別取1mL濃度為1.0m g/mL、0.8m g/mL、0.6m g/mL、0.4 m g/mL、0.2 m g/mL、0.1 m g/mL、0.05 m g/mL濃度的峨參多糖液于第3～9支試管中，第1～2支試管用雙蒸水補足。20℃水浴20分鐘后，第2～9支試管中加入濃度為10mmo l/L的鄰苯三酚0.4mL，立即搖勻，準確反應4分鐘，立即加入8 mo l/L H C l 0.1mL終止反應，325 n m測吸光值。

2 結果

2.1 超氧陰離子的抑制率 根據抑制率=［A0-(A x-A i0)］/A0×100%，計算不同濃度多糖對超氧陰離子產生的抑制率。見表1。

表 1 多糖超氧陰離子抑制率

2.2 峨參多糖的含量 以回歸方程y=5.575x+ 0.119 1，計算峨參多糖濃度為0.389 9m g/mL，含量為38.99%。見表2。

表 2 葡萄糖不同濃度的吸光度值

3 討論

葡萄糖標準曲線結果顯示，所得的回歸方程為y=5.575x+0.119 1，R=0.999 6，說明采用硫酸-蒽酮法測定多糖含量，所得標準曲線線性關系良好。多糖抑制超氧陰離子量效關系實驗結果表明，在0.1～1m g/mL濃度內，多糖對超氧陰離子的抑制率隨多糖濃度的增加而增強。0.6～1m g/mL濃度之間，其抑制率明顯增強，最大抑制率達31.22%。

人體內抗自由基損傷體系是一個復雜而完善的機能的體系，主要包括抗氧化酶和抗氧化劑兩類［6-7］。在自由基產生過多或者自由基消除功能降低時，自由基對身體的損傷就會顯現出來［8］。這時就需要依靠外力來幫助消除體內過量的自由基，以防止疾病的發生。研究抗氧化作用的藥物對于預防和治療因自由基過剩引起的疾病有重要意義。本研究初次探索研究峨參多糖的抗氧化作用，通過峨參多糖對超氧陰離子的抑制效果證實峨參多糖具有良好的體外抗氧化活性。這將為今后開發峨參多糖為天然抗氧化劑提供了科學依據。

[1] 王鳳岐，吳大真.峨眉神效驗方[M].北京：科學普及出版社，1982：42.

[2] 王志光，尹述凡.脫氧鬼臼毒素殺蟲作用機理初步研究[J].中國醫藥工業雜志，1992，23(2)：65-68.

[3] 王岳峰，耿耘，朱利平.峨參根化學成分研究[J].安微農業科學，2009，37（23）：11001-11002.

[4] 丁昭利，王岳峰，劉苡菡.峨參提取工藝的優化研究[J].安微農業科學.2009，37（31）：15424-15425.

[5] 王岳峰，劉苡菡，耿耘，等.HPLC法測定峨參中峨參內酯[J].中成藥.2011，33（9）：1565-1567.

[6] 馬超英，涂顯琴，牛順子，等.峨參石油醚提取物對肺癌細胞A549和H460的增殖的抑制作用觀察[J].河北醫藥，2011，33（13）：1956-1926.

[7] 涂顯琴，馬超英，耿耘，等.峨參提取物對肺癌細胞A549和H460的增殖抑制作用的初步觀察[J].中華中醫藥學刊，2012，30（1）：60-62.

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Study on Content Determ ination and Antioxidant Activity of Polysaccharide in EShen

WANG Yuefeng,DING Zhaoli
Emei Branch of Xi'an Jiaotong University,Emei614202,China

Objective:To study on determination and antioxidant activity of polysaccharides in EShen[Anthriscus sylvestris (L.)Hoffm]extracts.Methods:According to the anthrone-sulfuric acid method,the contents of polysaccharides in EShen extractswere calculated by regression equation obtained from the standard curveand the absorbance wasmeasured under 620nm w ith spectrophotometer;simultaneously,w ith the principle of pyrogallic acid happening auto-oxidation in alkaline situation,the inhibition ratesof differentconcentrationsof polysaccharideson superoxide anion were calculated to observe its antioxidantactivity in the lightof inhibition rate=[A0-(Ax-Ai0)]/AO× 100%.Results:The concentrations of polysaccharides in EShe n extractswere 0.389 9mg/m L and 38.99%;the inhibition rate of polysaccharides in EShen extracts on superoxide anion increased as the concentrations of polysaccharides raised in the concentrations between 0.1 and 1mg/m L,the inhibition rates enhanced obviously in the concentrations between 0.6 and 1mg/ML,maximum inhibition rate reached 31.22%.Conclusion:Polysaccharides in EShen extracts are in high contents,which show better antioxidantactivity in vitro,itwould provide scientific basis for the developmentof polysaccharides in EShen extractsasa naturalantioxidant.

EShen;polysaccharide;contentdetermination;antioxidantactivity

R284.2

A

1004-6852(2015)08-0021-02

2014-10-25

四川省應用基礎項目（編號：05JY029-099-1）。

王岳峰（1957—）男，副教授。研究方向：中藥學。