白術對S180致肝腹水小鼠外周血中NO和iNOS的影響

歐 燕，袁洪霞，關富敏

重慶市綦江區人民醫院，重慶 401420

白術對S180致肝腹水小鼠外周血中NO和iNOS的影響

歐 燕，袁洪霞，關富敏

重慶市綦江區人民醫院，重慶 401420

目的：考察白術水煎劑對S180致肝腹水的小鼠外周血中NO和iNOS的影響，探討其抗腹水的作用機制。方法：將SPF級雄性昆明種小鼠，依體質量隨機分為空白組、模型組、腹水用藥組（白術水提取物高G、中Z、低劑量D3組）、陽性藥物組（陽性藥：環磷酰胺，CTX組）共6組，分別按照實驗方案給予相應受試藥物，S180造模，連續給藥7天，分取各組動物靜脈血，測定相應指標含量或活性。結果：白術用藥組與CTX組對S180致肝腹水的小鼠均有抑制腫瘤的作用；與空白組相比，模型組小鼠外周血中NO和iNOS的含量明顯上升；與模型組相比，CTX組合白術G、Z、D組的NO和iNOS的含量都有所下降，但各組的NO和INOS降低率不同。結論：白術水煎劑主要通過調節外周血中NO和iNOS的含量來起到抗S180致肝腹水的作用。

白術水提物；肝腹水；NO；iNOS

白術具有“健脾燥濕，利水消腫”的功效，多用于水濕內停之痰飲，或水氣外溢之水腫，近年研究白術抗腫瘤、抗炎、提高機體免疫力的實驗報道較多。經查閱文獻，白術對肝腹水治療方面的試驗研究較少，僅有幾篇文獻報道白術對正常小鼠的利尿作用，以及白術對肝腹水的臨床應用觀察[1]。一氧化氮（N O）是一種存在于體內各種細胞中的生物介質，參與機體的多種生理病理過程[2]，早在1991年，Va l l a n ce[3]首先提出N O導致肝硬化高動力循環的假說，認為血清中N O產生、增加與肝硬化患者并發癥的發生有一定關系。因此，本實驗主要以N O和i N O S為指標來考察白術對S180致肝腹水的小鼠的影響，以期為從分子的角度來尋找肝腹水的發生機制。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 實驗動物：S P F級雄性昆明種健康小鼠60只，醫用實驗動物合格證號：111實動管制第17號，體質量28～32g，瘤株：小鼠肉瘤S180。

1.2 實驗儀器 相關手術器械；萬分之一電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司提供）；冷凍離心機。

1.3 試藥、試劑 環磷酰胺（批號20130202，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司生產，臨用前用生理鹽水配成0.6 m g/mL)；白術（安徽海鑫中藥飲片有限公司，產地浙江）；生理鹽水（西南藥業）；無水乙醇等均為分析純；N O試劑盒（批號：A014-3）、i N O S三型同測試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所。

1.4 白術水煎液的制備[4]取白術100 g，加蒸餾水適量，浸泡30分鐘，煎煮2次，每次1小時，過濾，合并2次濾液，濃縮并定容至200mL，相當于生藥濃度50%，并取適量50%白術水煎液，用蒸餾水分別稀釋到31.8%、15.9%以及5.3%生藥濃度，裝瓶備用，低溫保存。以30g成年小鼠與70 kg成人體表面積換算，30 g小鼠灌胃31.5%、15.7%、5.3%生藥濃度的白術水煎液1mL相當于70 kg成人劑量60 g/d(高劑量組)、30 g/d(中劑量組)、10g/d(低劑量組)。

2 實驗方法[5]

2.1 模型復制及取材[6]腹腔接種小鼠肉瘤S180細胞小鼠6～7天后腹水形成明顯，將生長7天的腹水模型種鼠頸椎脫臼處死，蠟版固定，用碘伏、75%乙醇腹部局部消毒，在無菌條件下取出乳白色濃稠活體腹水，與生理鹽水注射液1∶3稀釋，移植于用75%乙醇消毒的受試小鼠，給右前腋窩皮下準確接種瘤液0.2mL。小鼠連續給藥7天，最后一次給藥8小時后眼球采血，室溫靜置2小時，冷凍離心機4℃，3 500 r p m，離心10分鐘，分離血清，備用；取血后立即處死動物，稱體重后頸椎脫臼處死小鼠，完整剝取瘤塊。

2.2 分組及給藥 所有動物適應性喂養3天按體重分層隨機分為6組：空白組、模型組、腹水用藥組（白術水提取物高、中、低劑量3組，分別標示為白術G、Z、D組）、陽性藥物組（陽性藥：環磷酰胺0.6 m g/mL，按20 m g/kg灌胃，標示為C T X組）共6組，每組10只。各實驗組自實驗當天開始按規定給藥量灌胃給予相應藥物。實驗分組及試藥劑量設置見表1。

表1 實驗分組及試藥劑量設置

2.3 觀測指標[7]

2.3.1 抑瘤率 稱取除空白組外各組瘤塊的重量，計算抑瘤率。抑瘤率=（模型組平均瘤重-給藥組平均瘤重）／模型組平均瘤重×100%

2.3.2 NO含量測定 10%生理鹽水血漿，321500 r p m離心10分鐘，取上清，采用硝酸還原酶法，按照N O試劑盒說明書測定組織和血液的N O含量。

2.3.3 iNOS活性測定 根據試劑盒說明書進行相關預試，選取最佳測定濃度，測定組織i N O S。

2.4 統計學方法 用S P SS 19.0軟件進行統計分析。數據以(±s)表示，采用A N OVA分析，組間多重比較進行L S D-t檢驗，不符合正態分布的組間采用非參數檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

3 實驗結果

3.1 各藥物組對S180致肝腹水的小鼠的抑瘤率統計 與模型組相比，各用藥組的瘤重均較模型組輕（P＜0.05）。見表2。

表2 各藥物組對S180致肝腹水的小鼠肉瘤的影響

3.2 各藥物組對S180致肝腹水的小鼠外周血中NO含量及iNOS活性的影響 與模型組相比，各實驗組均可明顯降低肝腹水的小鼠外周血中N O含量及i N O S活性(P＜0.05)，環磷酰胺組降低N O達53.1%(P＜0.05)，降低i N O S達74.1%，白術G組降低N O為47.5%(P＜0.05)，降低i N O S達72.3%，其他各組N O值均呈下降趨勢。見表3-4及圖1-2。

表3 各藥物組對S180致肝腹水的小鼠外周血中NO含量影響

圖1 各藥物組對S180致肝腹水的小鼠外周血中NO含量影響

表4 各藥物組對對S180致肝腹水的小鼠外周血中iNOS含量的影響

圖2 各藥物組對S180致肝腹水的小鼠外周血中iNOS含量的影響

4 討論

N O是一種免疫分子和炎癥介質，也是一種自由基，但又具有細胞毒性，可引起多種病理生理效應，與血管擴張、免疫、抗腫瘤、蛋白質合成等有關[8]。N O S活性增高及N O濃度的增加與炎癥程度呈平行關系。體內N O S有結構型N O S(c N O S)和誘導型N O S(i N O S)2種[9]。c N O S先天性存在，生成N O數量較少，產生迅速。i N O S在生理情況下基本不表達，當受到某些細胞因子、病原微生物或腫瘤細胞刺激后，即被激活，大量產生i N O S，且持續時間長。i N O S催化的N O對細胞有殺傷毒性及促炎作用。此前有研究證實了肝硬化肝功能損害程度與N O水平密切相關，肝臟儲備功能越差，N O水平越高。

[1] 宿廷敏，王敏娟，阮時寶.白術的化學成分及藥理作用研究概述[J].貴陽學院學報(自然科學版)，2008，3(2):32-35.

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[3] 貝光明，李海強，韋剛.肝硬化腹水形成機制及治療的研究進展[J].中國臨床新醫學，2011，4(7):677-680.

[4] 施文榮，劉艷，陳玲，等.白術燥濕利水作用的研究[J].福建中醫學院學報，2007，（17）(3):48-49.

[5] 張萍，任永申，付強，等.軟肝消水巴布劑對S180腹水模型小鼠的治療作用[J].解放軍藥學學報，2007，23(4)：259-261.

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The Influenceof BaiZhu on NO and INOS in PeripheralBlood ofM ice w ith S180-induced Liver Ascites

OU Yan,YUAN Hongxia,GUAN Fumin
Chongqing Municipality Qijiang District People's Hospital,Chongqing 401420,China

Objective:To investigate theeffectsof BaiZhu(Atractylodesmacrocephala)decoction on NO and i-NOS in peripheral blood of mice w ith S180-induced liver ascites.Methods:The m ice were randomized into six groups:the blank group,themodelgroup,liverascitesmedication groups(high dosage group of BaiZhu decoction G, moderate dosage group of BaiZhu decoction Z and low dosage group of BaiZhu decoction D3)and positivemedicine groups(positivemedicine:cyclophospham ide,CTX group),all them ice received the correspondingmedicine according to experimental program,themodelwas prepared with S180,treated for seven consecutive days,and the blood was drawn out from different groups to detect the contents and the activity of the corresponding indexes.Results: BaiZhu and CTX could inhibit tumorof them icew ith S180-induced liverascites;compared w ith the blank group,NO and iNOS in peripheral blood ofm ice increased obviously in themodel group;compared w ith themodel group,the contentsof NO and iNOS in peripheralblood ofm ice deceased in G,Z and D groupsof CTX,but the decrease ratesofNO and iNOS in peripheralblood ofm ice in all the groupswere different.Conclusion:BaiZh u decoction could fightagainstascitesofmice suffering from S180-induced liverascites through regulating the contentsof NO and iNOS in peripheralblood.

BaiZhu decoction;liverascites;NO;iNOS

R285.5

A

1004-6852(2015)08-0015-03

2014-10-25

歐燕(1987—)，女，碩士學位，藥劑師。研究方向：臨床藥學。