高效液相色譜法測定抗病毒藥物溶出度的研究

王俊尹

【摘要】本文主要針對高效液相色譜法測定抗病毒藥物溶出度展開了研究，通過結合具體的試驗實例，對試驗所用的方法與結果作了詳細的介紹，并論述了最后所得的結果，以期能為有關方面的需要提供參考借鑒。

【關鍵詞】高效液相色譜法；抗病毒藥物；溶出度

【中圖分類號】R-0 【文獻標識碼】B 【文章編號】1671-8801（2015）01-0451-02

所謂的高效液相色譜法，是以液體為流動相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測。其具有著高壓、高速、高效等特點，在抗病毒藥物溶出度的測定中有著廣泛應用。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1200高效液相色譜儀；四元泵；UV2450紫外分光光度計；ZRS-8G型智能溶出試驗儀；Simplicity超純水機；MS205DU電子天平。

1.2 試劑與試藥

阿昔洛韋對照品；阿昔洛韋片規格0.1g；甲醇；水為超純水；氫氧化鈉；鹽酸。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：依利特BDSC18（150mm×4.6mm，5μm）；柱溫：30℃；流動相：甲醇-水（10∶90）；流速：1.0mL·min-1；檢測波長：254nm；進樣體積：20μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取阿昔洛韋對照品23.32mg，置于25mL量瓶中，用0.4%氫氧化鈉溶液適量溶解并用水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液S。

2.3 溶出介質的配制

根據張啟明等報道的溶出介質的選擇原則，參考金麗等多條實時溶出曲線對阿昔洛韋片的質量再評價，結合阿昔洛韋的理化性質及國家食品藥品監督管理局國家藥品標準WS1-（X-054）-2003Z中阿昔洛韋分散片的溶出介質為水，本文采用兩種pH值對比試驗，分別以水，0.1mol·L-1的鹽酸溶液為溶出介質進行溶出度檢查。其它條件按《中國藥典》2010年版二部阿昔洛韋片檢查項下的溶出度測定條件：采用轉漿法，水浴溫度37.0±0.5℃，轉速50r·min-1，溶出時間30min，溶出介質900mL。

2.4 方法學考察

2.4.1線性關系的考察：取“2.2項下”配制的對照品溶液，用水稀釋成系列濃度（4.664，9.328，18.656，27.984，46.64，93.28）μg·mL-1的對照品溶液，分別精密吸取20μL注入液相色譜儀，按“2.1”色譜條件進行測定，記錄色譜圖，以峰面積A為縱坐標，濃度C為橫坐標，得到回歸方程：A=67.0880C+7.5073，r=0.9999。在4.664μg·mL-1～93.28μg·mL-1范圍內，濃度與峰面積成良好的線性關系。

2.4.2精密度試驗：精密度取濃度為18.656μg·mL-1對照品溶液20μL注入液相色譜儀，重復進樣6次，測定峰面積，RSD=0.2%（n=6）。

2.4.3重現性試驗：取同一批號的樣品（A來源：某公司批號：20131104）按“2.3”項下操作，按“2.1”色譜條件進行測定3次，測得其溶出量的RSD為0.3%（n=3）。結果表明該方法重現性良好。

2.4.4穩定性試驗：精密吸取同一批號的樣品（同上）溶液20μL，分別于0，2，4，6，8，12h進樣，測定峰面積，RSD=0.6%（n=6）。

2.4.5干擾實驗：分別吸取0.1mol·L-1鹽酸溶液A，水B，對照品溶液C，供試品溶液（溶出介質為0.1mol·L-1鹽酸溶液D，溶出介質為水E）各20μL，在“2.1”色譜條件下進行測定。高效液相色譜圖譜中，0.1mol·L-1鹽酸溶液在254nm有較大的紫外吸收，水無紫外吸收，供試品溶液中鹽酸溶液可見明顯溶劑峰，但保留時間tR與阿昔洛韋對照品不同。

2.4.6加樣回收率試驗：采用加樣回收法，精密稱取已知含量的阿昔洛韋片（同上）適量，精密加入5mL的對照品溶液S，置于25mL量瓶中，用水稀釋成約20μg·mL-1的溶液，分別取上述溶液20μL，注入液相色譜儀，計算加樣回收率（見表1）。

表1 加樣回收率試驗結果（n=9）（mg）

2.5 樣品測定

取“1.2”項下阿昔洛韋片，按“2.3”項下制備供試品溶液，在“2.1”色譜條件下測定，記錄色譜圖，按外標法計算每批的溶出結果，同時將藥典方法的數據進行比較，結果表明3批不同廠家的阿昔洛韋片在以水為溶出介質與以0.1mol·L-1的鹽酸溶液（9-1000）為溶出介質下溶出度均符合標準規定的標示量的80%的限度要求，兩種介質，兩種測定方法結果基本一致（見表2、3）。

表2 阿昔洛韋片在水中溶出度結果

表3 阿昔洛韋片在鹽酸溶液溶出度結果

3 討論

（1）藥物的溶出度是評價藥品質量及生產制備工藝的重要質控項目，能全面，科學地評價不同企業生產的同藥品在體內的溶出行為是否一致。提供最優的標準的控制才能最真實的反應患者使用該藥物的生物利用度。

（2）對比兩組數據，高效液相色譜法溶出結果比紫外分光光度法數值小。是因為高效液相色譜法避免了溶出介質鹽酸溶液的紫外吸收干擾，及樣品中其他輔料的干擾。

（3）阿昔洛韋的紫外吸收光譜及其λmax的E（1%，1cm）值受pH（酸、中性、堿）的影響較大。按藥典方法測定時，對溶出度結果有一定的干擾。0.1mol·L-1的鹽酸溶液pH值為1.2，患者的胃液很難達到如此高值。水作為溶出介質可以滿足溶出度限度要求，因此建議在《中國藥典》2015年版修訂時應考慮將水作為阿昔洛韋片的溶出度檢查的溶出介質，同時采用高效液相色譜法測定。

4 結語

綜上所述，本文就高效液相色譜法測定抗病毒藥物溶出度進行了研究，并結合了具體的試驗實例，對高效液相色譜法在抗病毒藥物溶出度的測定試驗作了系統的闡述，相信對有關測定試驗方面的需要能有一定幫助。

參考文獻：

[1]苗立紅.高效液相色譜法測定替硝唑片的溶出度[J].首都醫藥.2014（20）.

[2]程佩素.高效液相色譜法測定多非利特膠囊的溶出度[J].中國藥房.2006（23）.