抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）檢測及臨床應用

摘要：目的 探討抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）檢測在系統性紅斑狼瘡（SLE）診斷中的意義。方法 酶聯免疫吸附法聯合間接免疫熒光發檢測抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）。結果 SLE組、其他風濕病組和健康對照組抗雙鏈DNA抗體水平比較，差異均有統計學意義（P<0.05）。。抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）ELISA方法檢測靈敏度為88.5%，特異性為96.6%；抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）ELISA方法檢測靈敏度為89.6%，特異性為97.7%。結論 兩種實驗方法檢測抗雙鏈DNA抗體，有利于診斷和治療SLE。

關鍵詞：SLE dsDNA抗體

系統性紅斑狼瘡（SLE）：是一種自身免疫性疾病，它的發病與家族遺傳、紫外線照射、體內雌激素水平、某些藥物、食物及感染有關[2～10]。我們分析96例SLE患者抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）檢測結果，以探討抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）在SLE診斷治療中的臨床應用

1資料與方法

1.1一般資料 我院2011年10月～2014年3月風濕免疫科門診及病房SLE患者96例（SLE組），SLE診斷標準符合美國風濕病學會SLE分類標準（2009年），年齡45～72歲，平均年齡（55±8）歲，其中男25例，女71例；其他風濕疾病對照組40例，年齡40～65歲，平均年齡（45±8）歲，其中男15例，女25例；健康對照組為100名健康體檢者，年齡40～70歲，平均年齡（50±10）歲，其中男25例，女75例。

1.2方法和試劑 采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）定量檢測抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體），采用間接免疫熒光法檢測抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）。試劑盒由歐蒙公司提供。測定嚴格按試劑說明書操作。酶聯免疫吸附試驗（ELISA）定量檢測抗雙鏈DNA抗體步驟：取5μl血清用1.0ml樣本緩沖液稀釋并混勻，1：201倍稀釋。按加樣方案向相應微孔分別加100μl標準品、陽性對照、陰性對照或稀釋后的樣本，加樣時間不要超過15min。室溫溫育30min（+18℃到+25℃）。倒掉微孔板內液體，用稀釋后的清洗緩沖液洗三次，300ul/次.滴加100ul酶結合物至每一微孔，室溫溫育30min（+18℃到+25℃）。倒掉微孔板內液體，如上述步驟清洗。滴加100ul色原/底物液至每一微孔，室溫避光溫育30min（+18℃到+25℃）。倒掉微孔板內液體，如上述步驟清洗。滴加100ul終止也至每一微孔。450nm比色，參考波長620nm。

采用歐蒙試劑，間接免疫熒光法（IIF）檢測dsDNA。加1：10稀釋的待檢血清、陰性和陽性血清對照各25ul到反應區。置于室溫30min后，放置PBS洗液缸浸泡5min。在每個反應區加FITC標記羊抗人IgG20ul，室溫反應30min后，放置PBS洗液缸浸泡5min，用吸水紙吸干水分，再封片，熒光顯微鏡下讀片。

1.3統計學處理 用SPSS11.0統計軟件進行分析，采用四方格計算分析抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）：計算數據比較用x2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

兩種方法測定抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）在SLE、其他風濕病組和健康對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）ELISA方法檢測靈敏度為88.5%，特異性為96.6%；抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）ELISA方法檢測靈敏度為89.6%，特異性為97.7%。見表1。

3討論

SLE是一種常見的自身免疫性疾病，患病率約為70/10萬。SLE的診斷主要依靠臨床表現、實驗室檢查、組織病理學和影像學檢查。抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）是SLE的診斷標志（ACR標準），它們的陽性率取決于疾病的活動度和器官表象，同時，dsDNA也是判斷預后的標志，dsDNA滴度通常與疾病活動度相關[1]。本文對SLE組（96例）、其他風濕病組（40例）和健康組（100例）進行了抗雙鏈DNA抗體檢測。抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）：ELISA方法檢測靈敏度為88.5%，特異性為96.6%；抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）ELISA方法檢測靈敏度為89.6%，特異性為97.7%。因此，兩種實驗方法對dsDNA抗體檢測，大大提高了dsDNA的檢出率，有利于盡早診斷和治療SLE，觀察疾病活動度，減少SLE給患者帶來的痛苦。

參考文獻：

[1]李永哲自身抗體檢測技術臨床推廣應用和質量保證工作中應重視的問題.中華檢驗醫學雜志，2006，29：769-773

[2]冀春梅，王振明，馬居鳳.抗核抗體譜檢測在自身免疫性疾病中的意義[J].實用醫技雜志，2008，15（5）：583-584.

[3]劉鴻林，杜志勛.抗核抗體和抗雙鏈DNA檢測在系統性紅斑狼瘡診斷中的意義[J].中國醫藥導報，2008，5（1）：1633.

[4]劉淑梅.抗核抗體的檢測間接免疫熒光法和酶聯免疫吸附試驗法的比較[J].醫學檢驗與臨床，2007，18（4）：43-44.

[5]蘭小鵬，黃俏佳，葉小芬，等.快速斑點免疫金滲濾法檢測抗雙鏈DNA抗體[J].中華醫學檢驗雜志，1996，19（2）：92-94.

[6]張銘明，張銳，徐建華，等.三種方法檢測抗雙鏈DNA抗體的比較及臨床意義[J].國際檢驗醫學雜志，2007，28（5）：411-412.

[7]姜兆金，雷明君.扶正化瘀膠囊聯合阿德福韋酯治療慢性乙型肝炎肝纖維化的療效觀察[J].臨床肝膽病雜志，2009，25（3）：186-187.[8]龔亞華，陳建杰，薛建華，等.恩替卡韋聯合扶正化瘀膠囊治療慢性乙型肝炎肝纖維化28例[J].中西醫結合肝病雜志，2010，20（2）：119-120.

[9]張孝盈，李菲.恩替卡韋聯合扶正化瘀膠囊治療慢性乙型肝炎臨床研究[J].山東醫藥，2010，50（44）：79-81.

[10]尹有美，于立新，沈桂堂，等.阿德福韋酯聯合扶正化淤膠囊治療活動性肝硬化臨床觀察[J].中西醫結合肝病雜志，2008，18（3）：147-148.

編輯/王海靜