INNOVANCE測(cè)定血漿D—二聚體的分析性能驗(yàn)證

摘要：目的 驗(yàn)證INNOVANCE測(cè)定血漿D-二聚體的性能指標(biāo)。方法 參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)的相關(guān)文件，對(duì)INNOVANCE在Sysmex CA1500全自動(dòng)凝血分析儀上檢測(cè)D-二聚體的性能進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果 正常值和病理值質(zhì)控品批內(nèi)不精密度（CV批內(nèi)）分別為4.2%、2.1%，正常值和病理值質(zhì)控品總不精密度（CV總）分別為5.7%、3.3%。攜帶污染率0.23%。測(cè)定 2個(gè)水平標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確度試驗(yàn)的相對(duì)偏倚分別為-0.21%、4.0%。驗(yàn)證的線性范圍0.196～4.33mg/L FEU，線性方程y=0.977x+0.506，r=0.9993。最大稀釋倍數(shù)為16倍。結(jié)論 INNOVANCE在Sysmex CA1500全自動(dòng)凝血分析儀上測(cè)定血漿D-二聚體達(dá)到臨床要求的不精密度、攜帶污染率、準(zhǔn)確度、線性范圍和最大稀釋度，符合臨床檢測(cè)要求。

關(guān)鍵詞：D-二聚體；免疫比濁法；性能驗(yàn)證

本研究參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（clinical and laboratory standards institute，CLSI）相關(guān)文件，對(duì)INNOVANCE在Sysmex CA1500全自動(dòng)凝血分析儀上測(cè)定血漿DD的分析性能進(jìn)行驗(yàn)證，為該檢測(cè)系統(tǒng)在臨床的應(yīng)用提供可靠依據(jù)。

1 資料與方法

1.1儀器與試劑 Sysmex CA1500全自動(dòng)凝血分析儀（出廠編號(hào)：F8633，日本希森美康公司），INNOVANCE定量檢測(cè)試劑盒（試劑批號(hào)：56013427，德國(guó)西門子醫(yī)療診斷公司），原裝配套質(zhì)控品、校準(zhǔn)品：正常值質(zhì)控品（N值，批號(hào)：560761）、病理值質(zhì)控品（P值，批號(hào)：560662）、校準(zhǔn)品1（C1，批號(hào)：56056921）、校準(zhǔn)品2（C2，批號(hào)：56056921）。

1.2血漿標(biāo)本的準(zhǔn)備 按照《臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》采集靜脈血，3000r/min離心15min，排除溶血、脂血、黃疸、污染的血漿標(biāo)本，取INNOVANCE檢測(cè)臨床患者血漿DD濃度接近廠家測(cè)定范圍上限4.4mg/L FEU和下限0.19 mg/L FEU附近的標(biāo)本備用。

1.3方法

1.3.1不精密度驗(yàn)證 參照CLSI EP5-A2文件，使用2個(gè)濃度水平（N值和P值）的定值質(zhì)控品，測(cè)定2批/d，重復(fù)測(cè)定2次/批，2批測(cè)定時(shí)間間隔≥2h，連續(xù)測(cè)定10d，每個(gè)濃度可收集40個(gè)數(shù)據(jù)，計(jì)算批內(nèi)和總不精密度（CV）。所得結(jié)果與廠商提供的性能指標(biāo)進(jìn)行比較。

1.3.2攜帶污染率驗(yàn)證 參照CLSI EP10-A2文件，取高值和低值患者血漿標(biāo)本各1份，連續(xù)測(cè)定3次高值標(biāo)本，測(cè)定結(jié)果記為H1、H2、H3，立即連續(xù)測(cè)定低值標(biāo)本3次，測(cè)定結(jié)果記為L(zhǎng)1、L2、L3。攜帶污染率（%）= （L1-L3）/（H3-L3）×100%。攜帶污染率應(yīng)≤1.0%。

1.3.3準(zhǔn)確度驗(yàn)證 參照CLSI EP15-A文件，使用2個(gè)濃度水平（N值和P值）質(zhì)控品和2個(gè)批號(hào)校準(zhǔn)品，分別重復(fù)測(cè)定3次取均值作為測(cè)定值。計(jì)算相對(duì)偏倚，相對(duì)偏倚=[（靶值-測(cè)定值）/靶值]×100%。要求質(zhì)控品的測(cè)定值要在各質(zhì)控參考值范圍以內(nèi)，校準(zhǔn)品的相對(duì)偏倚應(yīng)在±10%的范圍以內(nèi)。

1.3.4線性范圍驗(yàn)證 參照CLSI EP6-A2文件，取接近廠家測(cè)定范圍下限低值（L）和上限高值（H）混合血漿樣本，將低值和高值標(biāo)本按：5L、4L+H、3L+2H、2L+3H、L+4H、5H進(jìn)行配比，制備5個(gè)等間距不同稀釋濃度的樣本。每個(gè)水平重復(fù)測(cè)定3次，取均值作為實(shí)測(cè)值用Y表示，X表示各樣本的預(yù)期值。計(jì)算回歸方程：Y=bX+a，相關(guān)系數(shù)r值應(yīng)>0.98。

1.3.5稀釋度驗(yàn)證 參照CLSI EP6-A2文件，取接近廠家測(cè)定范圍上限混合血漿樣本4.5mg/L FEU，根據(jù)儀器設(shè)定的稀釋比例，用配套稀釋液按照以下稀釋倍數(shù)手工進(jìn)行配比稀釋：原倍、1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64。分別測(cè)定2次，將實(shí)測(cè)值與稀釋后的理論值進(jìn)行比較，計(jì)算回收率。回收率=（實(shí)測(cè)值/理論值） ×100%，回收率在90%～110%為可接受。

2 結(jié)果

2.1不精密度驗(yàn)證結(jié)果 批內(nèi)不精密度和總不精密度（CV）測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2攜帶污染率驗(yàn)證結(jié)果 攜帶污染率驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果 測(cè)定2個(gè)不同批次質(zhì)控品（N值、P值）和2個(gè)批次的校準(zhǔn)品（C1、C2）準(zhǔn)確度結(jié)果見(jiàn)表3。

2.4線性范圍驗(yàn)證結(jié)果 驗(yàn)證的線性范圍為0.196～4.33mg/L FEU，線性方程y=0.977x+0.506，相關(guān)系數(shù)r=0.9993，線性驗(yàn)證的回歸曲線見(jiàn)圖1。

圖1 INNOVANCE測(cè)定血漿DD的線性驗(yàn)證回歸曲線

2.5稀釋度驗(yàn)證結(jié)果 對(duì)DD濃度為4.5mg/L FEU的血漿標(biāo)本進(jìn)行稀釋測(cè)定，最大稀釋倍數(shù)為16倍時(shí)，回收率仍然在可接受范圍內(nèi)。稀釋度驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表4。

3 討論

臨床實(shí)驗(yàn)室DD檢測(cè)的分析性能驗(yàn)證的方案及性能標(biāo)準(zhǔn)缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，不同方法學(xué)只能針對(duì)自身的特性采用最佳方案及標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行驗(yàn)證。我實(shí)驗(yàn)室針對(duì)INNOVANCE檢測(cè)試劑在Sysmex CA1500全自動(dòng)血凝分析儀檢測(cè)DD水平的不精密度、攜帶污染率、準(zhǔn)確度、線性范圍及稀釋度進(jìn)行性能評(píng)價(jià)，依據(jù)EP5-A2文件進(jìn)行分析性能評(píng)價(jià)可以得到與時(shí)間相關(guān)的不精密度，其中以批內(nèi)不精密度及總不精密度最有意義，雖然測(cè)定結(jié)果低于廠商建立不精密度的數(shù)值，但就實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證而言，能滿足臨床需要，其他性能均達(dá)到驗(yàn)證要求，可以較好的服務(wù)于臨床。

參考文獻(xiàn)：

[1]胡云建， 陶鳳榮， 王厚東， 等. D-二聚體測(cè)定在肺栓塞診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2002；25（2）：95-97.

[2]朱鐵楠. D-二聚體檢測(cè)在靜脈血栓栓塞性疾病診治中的應(yīng)用[J]. 中華內(nèi)科雜志，2012；51（3）：240-242.

[3]侯銀靜，秦明照.D-二聚體檢測(cè)在肺栓塞診斷中的正確評(píng)價(jià)[J]. 中華臨床醫(yī)師雜志， 2013， 7（17）： 114-116.

[4]畢波，呂元.定量檢測(cè)方法學(xué)性能驗(yàn)證的系統(tǒng)設(shè)計(jì)[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007；30（2）：143-145.

編輯/哈濤