Livin和Caspase—3在胃癌組織中的表達及其意義

摘要：目的 探討Livin和Caspase-3在胃癌組織細胞中的表達及臨床意義。方法 用免疫組化法檢測75例胃癌組織和36例癌旁正常組織細胞中Livin、Caspase-3蛋白的表達情況。結果 ①Livin蛋白在胃癌組織中的表達率（76.7﹪）高于癌旁正常組織（14.3﹪）；Caspase-3蛋白在胃癌組織中的表達率（17.3﹪）低于癌旁正常組織（74.3﹪），均具有統計學意義（P<0.05）；②Livin和Caspase-3表達呈負相關（P<0.01）；③Livin陽性表達率與組織分化程度、淋巴結轉移相關（P<0.05）；Caspase-3的陽性表達率與組織細胞的分化程度及淋巴結轉移相關（P<0.05）。結論 Livin蛋白低表達和Caspase-3蛋白高表達參與了胃癌的發生、分化和淋巴結轉移。

關鍵詞：胃癌；細胞凋亡；Livin；Caspase-3；免疫組織化學

Abstract：Objective To evaluate expression of Livin and Caspase-3 in human gastric carcinoma. Methods Immunohistochemical staining was applied to detect the expression of Livin and Caspase-3 in 75 cases of gastric carcinoma tissues and 36 cases of adjacent normal gastric mucosa. Results ①Livin protein positive expression rates（78.7﹪） in the gastric carcinoma tissues were higher than the adjacent normal gastricmucosa （14.3﹪）（P<0.05）. Caspase-3 protein positive expression rates（17.3﹪） in the gastric carcinoma tissues were lower than the adjacent normal gastric mucosa （74.3﹪）（P<0.05）. ②The expression of caspases-3 was negatively with the exprssion of Livin（P<0.01）.③The expression of Livin was closely correlated with？tissue differentiation， lymph node metastasis （P<0.05）；The expression of Caspase-3 was closely correlated with？tissue differentiation， lymph node metastasis （P<0.05）. Conclusion The abnormal expression of Livin and Caspase-3 protein may play a role in the ccurrence ， differentiation and lymph node metastasis of gastric carcinoma.

Key words：Gastic carcinoma；Apoptosis； Livin； Caspase-3； Immunohistoehemlstry

胃癌是我國最常見的消化道惡性腫瘤之一，其死亡率位居惡性腫瘤第1位。胃癌的形成與機體內凋亡調控機制紊亂有關。Livin是凋亡抑制蛋白IAP家族成員， 在大多數惡性腫瘤中高表達，起到抑制細胞凋亡的作用[1]。Caspase-3是caspase家族蛋白酶級聯反應的核心蛋白，是細胞凋亡的重要蛋白酶，它的表達降低、失活與許多腫瘤的發生密切相關[2] 。我們采用免疫組化Elivison二步法，檢測Livin、Caspase-3蛋白胃癌組織細胞、癌旁正常組織細胞的表達情況，探討Livin低表達和Caspase-3高表達參與了胃癌的發生、分化和淋巴結轉移。

1資料與方法

1.1一般資料 2004～2006年，銀川市第一人民醫院，術后經病理證實為胃腺癌，資料完整的石蠟標本75例，男性50例，女性25例；年齡37～76歲；高分化 32例，低分化 43例；51例淋巴結轉移， 24例未轉移者，Ⅰ期7例，Ⅱ期26例，Ⅲ期38例，Ⅳ期4例。另取病理證實癌旁正常組織36例。

1.2實驗試劑 Livin、Caspase-3試劑由北京中杉有限公司提供， DAB顯色劑、Elivison二步法試劑盒，由福州邁新生物技術有限公司提供。

1.3實驗方法 免疫組化Elivison二步法檢測，操作步驟按照說明書進行。用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作陰性對照。兩種蛋白主要在細胞漿著色，判斷的標準參照文獻[3]。

1.4統計學分析 采用 SPSS13.0版軟件包，組間比較用？字2檢驗；各指標之間的相關性分析Spearman檢驗；P<0.05有統計學意義。

2結果

2.1胃癌組織細胞、癌旁正常組織細胞中Livin、Caspase-3蛋白的表達 Livin在兩種組織中的陽性表達率分別為 78.7%（59/75）、14.3%（5/35），差異有統計學意義（P<0.05）。Caspase-3在兩種組織中的陽性表達率分別為 18.7%（14/75）、74.3%（26/35），差異有統計學意義（P<0.05）。

2.2Livin、 Caspase-3蛋白在胃癌組織中的表達與臨床病理因素的關系 Livin、Caspase-3蛋白的表達率與淋巴結轉移、組織細胞分化程度有（P<0.05）；淋巴結未轉移組的陽性表達率與轉移組相關（P<0.05）；Livin、 Caspase-3蛋白表達均與臨床分期無關 （P>0.05）。

2.3Livin、Caspase-3蛋白表達的相關性 Livin與caspase- 3的表達呈顯著負相關，r=-0.421，P<0.009。

3討論

Livin是IAPs家族的最新成員，與已發現的凋亡家族成員一樣，其過度表達能夠不同程度抑制細胞凋亡，在腫瘤的發生過程中，發揮其重要作用。Caspase-3 是Caspase家族的核心蛋白酶，在細胞凋亡過程中起著關鍵性的作用，也是近年來研究的與腫瘤發生發展密切相關的、較為深入的凋亡相關基因。

Livin的抗凋亡活性主要依賴其半胱氨酸組氨酸的桿狀病毒IAP重復區（BIR）結構域，BIR結構域是結合并抑制 Caspase-3的關鍵部位，抑制其活性，促進細胞凋亡過程。已有大量的研究，Livin在多種腫瘤組織細胞中高表達。Hariu等[4]采用RT-PCR方法，檢測原發性肺癌組織、肺癌細胞株中Livin 的表達異常，而正常肺組織中Livin 未表達。侯毅鞠等[5]研究發現，胃癌組織中，Livin 蛋白高表達于正常黏膜組織，與腫瘤組織的分化程度、細胞的浸潤深度、淋巴結轉移的表達差異間有統計學意義（P<0.05）。本研究利用免疫組化法檢測結果顯示：Livin在不同的胃組織細胞中，陽性表達率不同，并且有顯著差異 （P<0.05）。Livin的表達與臨床多種病理因素有關。提示： Livin在胃癌組織細胞中異常表達，與胃癌的發生過程存在相關性。

Caspase-3是半胱氨酸蛋白酶Caspase級聯反應中關鍵的效應酶，是細胞凋亡的效應分子，在整個凋亡途徑中起者重要的作用[6]。寇有為等[7]用免疫組化法檢測胃癌組織細胞中低表達Caspase-3，且Caspase-3 陽性表達率與腫瘤的淋巴轉移、病理分化程度以及臨床分期有顯著性差異（P<0.05）。本研究顯示：胃癌組織中caspase-3 的表達低于胃良性病變組織、癌旁正常黏膜組織（P<0.05）。caspase-3 在胃癌組織中的表達與胃癌的淋巴結轉移呈負相關（P<0.05），與腫瘤的分化程度呈正相關（P<0.05）。提示：胃癌組織細胞中caspase-3低表達率與腫瘤的產生相關。

本研究分析發現Livin和Caspase-3表達有負相關性，從實驗結果看，胃癌組織中Livin在細胞凋亡中起到負性調節的作用，Caspase-3起到正性調節的作用，二者均參與了細胞凋亡過程，其作用相反，提示：在胃癌的惡性轉化過程中，Livin和Caspase-3的異常變化起了重要作用。

參考文獻：

[1]Kasof G M， Comes B C. Livin， a novel inhibitor of apoptosis protein family member[J]. J Biol Chem，2001，102（1）：3238-3246.

[2]Meggiato T， Calabrese F， De Cesare CM， et al. C-JUN and CPP32 （caspase-3） in human pancreatic cancer： relation to cell proliferation and death [J].Pancreas，2003，26：65.

[3]許良中，楊文濤.免疫組織化學反應結果的判定標準[J].中國癌癥雜志，1996，6（4）：229-231.

[4]Hariu H，Hirohashi Y， Torigoe T， et al. Aberrant expression and potency as a cancer inununotherapy target of inhlbitor of apoptosis protein family，Livi/ML-IAP in lung cancer[J]. Clin Cancer Res，2005，11：1000-1009.

[5]侯毅鞠，李艷，袁忠海，等.凋亡抑制蛋白Livin 在胃癌及癌旁組織中的表達[J].世界華人消化雜志，2010，18（12）：1196-1200.

[6]Meggiato T， Calabrese F， De Cesare CM，et al. C-jun and cpp32（caspase-3） in human pancreatic cancer： relation to cell proliferation and death[J]. Pancreas，2003，26（1）：65-70.

[7]寇有為，王強.XIAP 、caspase- 3 在胃癌中表達及其相關性[J].中國現代醫學雜志，2011，21（28）：3490-3494.

編輯/馮焱