粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子對(duì)大鼠創(chuàng)面JNK通路的作用

郭明鋒

(浙江省消防總隊(duì)醫(yī)院，浙江杭州310011)

●醫(yī)學(xué)研究

粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子對(duì)大鼠創(chuàng)面JNK通路的作用

郭明鋒

(浙江省消防總隊(duì)醫(yī)院，浙江杭州310011)

目的:研究粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子(GM-CSF)對(duì)大鼠創(chuàng)面愈合的影響及對(duì)JNK信號(hào)通路的作用。方法:將30只鼠隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組，每組各15只。于其背部制作約2cmx2cm全層皮膚缺損創(chuàng)面。治療組大鼠創(chuàng)面外涂重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子(rhGM-CSF)凝膠，對(duì)照組創(chuàng)面涂抹不舍任何藥物的凝膠基質(zhì)。觀察傷后創(chuàng)面愈合率、GM-CSF含量和JNK信號(hào)通路中蛋白表達(dá)量。結(jié)果:治療組傷后不同時(shí)間的創(chuàng)面愈合率均明顯高于對(duì)照組，P＜0．05。治療組GM-CSF含量在不同的時(shí)相點(diǎn)均明顯高于對(duì)照組(P＜0．05)。蛋白印跡結(jié)果表明治療組大鼠創(chuàng)面p-JNK表達(dá)量顯著升高，并且各時(shí)相點(diǎn)均高于對(duì)照組(P＜0．05)。結(jié)論:GM-CSF能促進(jìn)大鼠創(chuàng)面組織愈合，其機(jī)制可能與JNK信號(hào)通路激活有關(guān)。

粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子;JNK信號(hào)通路;創(chuàng)面愈合

粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子(GM-CSF)是一種多功能細(xì)胞因子，研究顯示［1］，GM-CSF具有促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用，尤其是對(duì)于難愈性創(chuàng)面和慢性創(chuàng)面有顯著療效，但作用機(jī)制尚不明了。皮膚的創(chuàng)傷愈合是一個(gè)十分復(fù)雜精細(xì)的生物學(xué)過(guò)程，涉及到多條細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路［2］。我們對(duì)創(chuàng)傷愈合過(guò)程中JNK信號(hào)通路的變化進(jìn)行初步研究，旨在為創(chuàng)面愈合治療尋找新的藥物靶點(diǎn)。

一、材料與方法

(一)主要試劑與儀器。

p-JNK和JNK抗體，外用型重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子凝膠和外用型凝膠基質(zhì)，ELlSA試劑盒。

(二)方法。

將30只鼠(上海中國(guó)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，體重180-220g)隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組，每組各15只。于其背部制作約2cmx2cm全層皮膚缺損創(chuàng)面。治療組大鼠創(chuàng)面外涂重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子(rhGM-CSF)凝膠，對(duì)照組創(chuàng)面涂抹不舍任何藥物的凝膠基質(zhì)，分籠飼養(yǎng)，每日給藥1次，直至創(chuàng)面完全封閉。

(三)觀察指標(biāo)。

觀察傷后創(chuàng)面愈合率，使用數(shù)碼相機(jī)對(duì)創(chuàng)面進(jìn)行拍照并用Image J圖像分析軟件進(jìn)行分析，創(chuàng)面愈合率=(原始創(chuàng)面面積-各時(shí)相點(diǎn)創(chuàng)面面積)/原始創(chuàng)面面積x100%，采用ELISA法測(cè)定GM-CSF含量，采用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)JNK信號(hào)通路中蛋白表達(dá)量。

(四)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

所得數(shù)據(jù)用SPSS軟件13．0分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

大鼠創(chuàng)面愈合率結(jié)果如下(見(jiàn)表1)。

創(chuàng)面組織GM-CSF含量檢測(cè)與JNK信號(hào)通路蛋白表達(dá)量果如下(見(jiàn)表2)。

表1 兩組大鼠創(chuàng)面愈合率比較

表2 創(chuàng)面組織GM-CSF含量比較

三、討論

粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)是一種多功能的造血生長(zhǎng)因子，研究表明GM-CSF能作用于成纖維細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等，具有促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化和遷移等作用［3］。同時(shí)多種參與創(chuàng)面修復(fù)過(guò)程的細(xì)胞如角質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等合成分泌GM-CSF，其中角質(zhì)細(xì)胞是產(chǎn)生GM-CSF的主要細(xì)胞。參與了創(chuàng)面愈合過(guò)程并發(fā)揮了重要作用，但GM-CSF促進(jìn)創(chuàng)面愈合的具體作用機(jī)制目前尚未清楚。MAPK因其調(diào)控多條信號(hào)通路而倍受學(xué)者們普遍關(guān)注，對(duì)細(xì)胞增殖、形態(tài)發(fā)生、細(xì)胞分化和凋亡的調(diào)節(jié)等方面均發(fā)揮著重要作用，其中JNK是其重要成員之一，JNK的激活能抑制角朊細(xì)胞的分化從而促進(jìn)傷口的愈合，JNK通路的激活被認(rèn)為在果蠅和鼠類傷口愈合細(xì)胞遷移過(guò)程中是必要的［4］。我們研究結(jié)果顯示，治療組傷后不同時(shí)間的創(chuàng)面愈合率均明顯高于對(duì)照組，治療組GM-CSF含量在不同的時(shí)相點(diǎn)均明顯高于對(duì)照組。蛋白印跡結(jié)果表明治療組大鼠創(chuàng)面p-JNK表達(dá)量顯著升高，并且各時(shí)相點(diǎn)均高于對(duì)照組，說(shuō)明JNK通路的激活可能在創(chuàng)面愈合過(guò)程中發(fā)揮重要作用?？傊覀兊难芯孔C實(shí)粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子可以顯著促進(jìn)創(chuàng)面的愈合，其機(jī)制可能與JNK信號(hào)通路激活有關(guān)。

［1］El-Saghir N，Otrock Z，Mufarrij A，etal．Dexrazoxane for anthracycline extravasation and GM-CSF for skin ulceration and wound healing．Lancet Oncol2004，5:320-321．

［2］Hafner C，Meyer S，Hagen I，et al．Ephrin-B reverse signaling induces expression ofwound healing associated genes in IEC-6 intestinal epithelial cells．World JGastroenterol 2006，11:4511-4518．

［3］Nishihara T，Ochi M，Sugimoto K，et al．Subcutaneous injection containing IL-3 and GM-CSF ameliorates stab wound-inducedbrain injury in rats［J］．Exp Neurol，2011，229:507-516．

［4］Bosch M，Serras F and Martin-Blanco E．JNK signaling pathway required for wound healing in regenerating Drosophila wingimaginal discs．Dev Biol 2005，280:73-86．

R644

B

1002-1701(2015)01-0129-02

2014-01

郭明鋒，男，本科，主任醫(yī)師，研究方向:燒傷科。

10．3969/j．issn．1002-1701．2015．01．069