益母草總堿在治療丙酸睪丸素誘導大鼠前列腺增生模型中的應用研究①

馬 雷，高英英，辛 華，李 升，曲燦華，于海東，李雅江，孫玉鴻

(1.佳木斯大學附屬第一醫院,黑龍江 佳木斯 154003;2.佳木斯大學檢驗醫學院,黑龍江 佳木斯 154003)

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益母草總堿在治療丙酸睪丸素誘導大鼠前列腺增生模型中的應用研究①

馬 雷1，高英英2，辛 華1，李 升1，曲燦華1，于海東1，李雅江1，孫玉鴻1

(1.佳木斯大學附屬第一醫院,黑龍江 佳木斯 154003;2.佳木斯大學檢驗醫學院,黑龍江 佳木斯 154003)

目的：探討益母草總堿在治療丙酸睪丸素誘導的大鼠前列腺增生模型中的作用及前列腺增生的發生機制。方法：以丙酸睪丸素誘導建立模型，再給予益母草總堿治療，處死后立即取前列腺組織，以放射免疫法檢測DHT和T，以免疫組化法檢測EGF、bFGF、TGF-β1平均光密度值。結果：各實驗組與模型組比較DHT、T都存在顯著性差異，有統計學意義。各實驗組前列腺組織中EGF、bFGF、TGF-β1平均光密度值與模型組比較都有統計學意義。結論：丙酸睪丸素誘導大鼠前列腺增生模型成立，益母草總堿在治療前列腺增生方面有重要應用價值。

益母草總堿；前列腺增生

隨著人口老齡化的加劇，前列腺增生癥(Benign prostatic hyperplasia，BPH)成為老年男性最常見的泌尿系統疾病之一，而且這一趨勢愈演愈烈，無數老年男性飽受這一病癥的折磨[1]。我國流行病學數據顯示，在進行尸檢時發現BPH發病率有向中老年人群蔓延的趨勢，而在60歲以上老年人群發病率高達63.5%。BPH的臨床表現主要是隨著病情的發展，出現進行性的排尿困難，最后出現尿潴留，給腎臟及身體帶來傷害，甚至危及人的生命[2]。所以，對BPH發生機制和治療的研究變得越來越迫切。本實驗利用中藥益母草總堿對丙酸睪丸素造模的BPH大鼠進行治療，探討BPH的發生機制，并且對益母草總堿的功效進行評估。

1 資料與方法

1.1 一般資料

①實驗動物：18月齡老年SD雄性大鼠90只，購自佳木斯大學動物實驗中心。分為6組，每組15只，分別設置為益母草小劑量組、益母草中劑量組、益母草大劑量組、癃閉舒對照組、模型組、空白對照組。

②試劑：益母草總堿購自咸陽航空一六八生物工程有限公司；癃閉舒膠囊購自石家莊科迪藥業有限公司；丙酸睪丸素購自河南科倫藥業有限公司；大鼠雙氫睪酮(Dihydrotestosterone,DHT)，睪酮(Testosterone,T)檢測試劑盒購自南京森貝伽生物科技有限公司；大鼠表皮生長因子(Epidermal growth factor,EGF)、成纖維細胞生長因子(basic Fibroblast growth factor,bFGF)、轉化生長因子β1(Transforming growth factor beta1,TGF-β1)免疫組化檢測試劑盒購自上海雅吉生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 丙酸睪丸素誘導老年大鼠BPH模型和給藥 首先將益母草小、中、大劑量組、癃閉舒對照組、模型組5組共75只大鼠去勢，接下來連續7d給予肌注青霉素待其恢復。然后連續30d給予皮下注射丙酸睪丸素4mg/100g，空白對照組只皮下注射4mg/生理鹽水。

自注射丙酸睪丸素第1天起，益母草小、中、大劑量組、癃閉舒對照組、模型組，每天1次分別給予胃飼益母草總堿12.5mg/kg、25mg/kg、50mg/kg、癃閉舒膠囊蒸餾水溶液(用量約為臨床用藥量的10倍)、等量蒸餾水。

1.2.2 大鼠前列腺濕重和前列腺指數計算：稱大鼠體重后，處死大鼠，仔細摘取前列腺，用濾紙吸干組織表面液體，用電子天平稱取前列腺組織濕重，計算前列腺指數(前列腺指數=前列腺濕重mg/鼠體重g)。

1.2.3 顯微鏡下觀察前列腺組織結構：取前列腺組織固定后，送病理科用蘇木精-伊紅染色，用OlympusX51顯微鏡觀察BPH造模成功與否。

1.2.4 大鼠前列腺組織中DHT、T檢測：取200mg前列腺組織，及時勻漿，由放射免疫實驗室專業人員，嚴格按照試劑使用說明書要求操作，測量前列腺組織中DHT、T水平。

1.2.5 大鼠前列腺組織中EGF、bFGF、TGF-β1平均光密度值檢測：取前列腺組織，用4%甲醛固定保存后，進行免疫組化檢測，計算生長因子的平均光密度值。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 益母草總堿對大鼠前列腺濕重和前列腺指數的影響

空白對照組與模型組比較分析，可見大鼠前列腺組織的濕重和指數都有顯著性差異，說明誘導BPH模型成功。各治療組與模型組比較，濕重只有小劑量組有統計學意義，前列腺指數只有大劑量組無統計學意義，并且癃閉舒組存在顯著性差異，見表1。

表1 益母草總堿對大鼠前列腺濕重和前列腺指數的影響

※與模型組比P<0.05,※※與模型組比P<0.01。

2.2 顯微鏡觀察各試驗組大鼠前列腺組織結構的情況

模型組大鼠前列腺褶皺增多，呈乳頭狀突起，朝向前列腺腺腔內部，細胞層次增多，間質增厚，腺腔面積明顯縮小，期間可見大量粉紅色分泌物。空白對照組大鼠前列腺褶皺很少，上皮細胞排列整齊一致，細胞間質很薄，由單層柱狀上皮組成，腺腔面積較大，分泌物很少。說明使用丙酸睪丸素誘導大鼠BPH模型成功。同模型組比較，癃閉舒給藥組和益母草總堿大、中、小劑量給藥組大鼠前列腺組織都有不同程度的褶皺增生減少、腺腔擴大和間質變薄。

2.3 益母草總堿對大鼠前列腺組織中DHT、T的表達水平的影響

各實驗組與模型組比較DHT、T都存在顯著性差異，有統計學意義，見表2。

表2 各實驗組大鼠前列腺組織中DHT、

※與模型組比P<0.05,※※與模型組比P<0.01。

2.4 益母草總堿對大鼠前列腺組織中EGF、bFGF、TGF-β1的平均值的影響

各實驗組前列腺組織中EGF平均光密度值與模型組比較都有統計學意義，其中小劑量組和癃閉舒組存在顯著性差異。各組與模型組比較，bFGF平均光密度值都有統計學意義。各組與模型組比較，TGF-β1平均光密度值都有統計學意義，其中益母草總堿中、小劑量組和癃閉舒組存在顯著性差異，見表3。

表3 各實驗組大鼠前列腺組織中EGF、bFGF、TGF-β1平均光密度值

※與模型組比P<0.05,※※與模型組比P<0.01。

3 討論

益母草味苦、辛，微寒。分布于全國大部分地區，可以植物全草入藥，功效為活血調經，利尿消腫，清熱解淋。益母草總堿是益母草發揮主要功效的組成成分[3]。本課題應用益母草總堿治療BPH正符合中醫藥應對 “癃閉”、“淋證”的診治原則。模型組與空白對照組比較，前列腺組織形態出現褶皺增多，間質變厚，腺腔縮小，分泌物量多。同時，模型組大鼠的前列腺濕重，尤其是前列腺指數顯著大于空白對照組。充分說明本實驗利用丙酸睪丸素誘導建立老年大鼠BPH模型是成功的。需要注意的是本實驗時間較長，動物處理過程較復雜，故應挑取健康狀況良好的大鼠，來減少損失率。各治療組及模型組大鼠前列腺組織勻漿標本中DHT和T的水平均高于空白對照組，模型組顯著增高，說明DHT和T在前列腺組織中的含量增高與BPH發生發展有著密切的關系。與模型組比較，益母草總堿和癃閉舒膠囊治療大鼠BPH的過程中降低了前列腺組織中EGF和bFGF水平，提高了TGF-β1水平，與文獻報道一致[4,5]，證明益母草總堿可以通過調節生長因子的動態平衡的方式，來達到治療BPH的目的。這為闡明BPH發病機制中細胞因子途徑提供有力的證據。根據實驗結果發現大鼠BPH模型前列腺組織中的激素水平和生長因子呈現一定的相關性，BPH發生過程中激素和生長因子之間的相互作用關系有待進一步探討。

[1]DijkmanGA，DebruyneFM.Epidemiologyofprostatecancer[J].EurUrol,1996,30(3):281-295

[2]馬雷，辛華，高英英,等. 血清總PSA、游離PSA檢測在前列腺癌診斷中的臨床應用研究[J].黑龍江醫藥科學,2007, 30(2):11-12

[3]鄭師明，嚴鵬科，李世煌，等.精制益母草生物堿提取純化工藝研究[J],中國藥房,2010,21(15):1370

[4]Gandour-EdwardsR,MackPC,GumerlockPH.Abnormalitiesofapoptoticandcellcycleregulatoryproteinsindistincthistopathologiccomponentsofbenignprostatichyperplasia[J].ProstateCancerandProstaticDiseases, 2004, 7(4):321-326

[5]GuessHA.Benignprostatichyperplasia:antecedentsandnaturalhistory[J].Epidemiologicreviews, 1992, 14(1): 131-153

黑龍江省中醫藥科研項目，編號：ZHY12-Z191;佳木斯大學科研項目,編號:S2010-103。

馬雷(1980～)男,黑龍江哈爾濱人,碩士,主管技師。

高英英(1980～)女,黑龍江雞西人,碩士,講師。E-mail:happygaoyingying@163.com。

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1008-0104(2015)03-0082-02

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