血清TWEAK與YKL-40聯(lián)合檢測對子宮內(nèi)膜癌診斷價值的研究①

王麗娜，吳雅冬，徐春梅，李亞君

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，黑龍江 佳木斯 154003)

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血清TWEAK與YKL-40聯(lián)合檢測對子宮內(nèi)膜癌診斷價值的研究①

王麗娜，吳雅冬，徐春梅，李亞君

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：探討血清腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導(dǎo)劑(TWEAK)和人類軟骨糖蛋白-39(YKL-40)聯(lián)合檢測在子宮內(nèi)膜癌診斷中的應(yīng)用價值。方法：采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定25例子宮內(nèi)膜癌患者、25例子宮內(nèi)膜增生患者及30例健康對照婦女血清TWEAK和YKL-40水平。以正常健康婦女TWEAK水平均數(shù)±1.96S(x±1.96S)作為上下臨界值。YKL-40陽性標(biāo)準(zhǔn)值是以正常對照組95%可信區(qū)間值為上限。比較TWEAK和YKL-40在三組間的水平與陽性率差異。以及二者聯(lián)合檢測對診斷子宮內(nèi)膜癌的敏感度和差異度。結(jié)果：(1)血清TWEAK含量在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)明顯高于子宮內(nèi)膜增生患者及健康對照患者。差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。血清TWEAK含量診斷子宮內(nèi)膜癌的敏感度和特異度分別為：73.34% 、83.75% 。(2)血清YKL-40含量診斷子宮內(nèi)膜癌的敏感度和特異度分別為：67.71% 、80.03% 。較單獨(dú)檢測TWEAK敏感度低，特異度低。TWEAK和YKL-40聯(lián)合檢測敏感度為：81.7% 特異度為：82.19%，較單項檢測TWEAK、YKL-40敏感度高，特異度較單項檢測TWEAK低，高于單項檢測YKL-40。結(jié)論：TWEAK可作為早期診斷子宮內(nèi)膜癌的生物學(xué)標(biāo)記物，TWEAK與YKL-40聯(lián)合檢測進(jìn)一步提高了對子宮內(nèi)膜癌的早期診斷。

TWEAK；YKL-40；子宮內(nèi)膜癌；腫瘤標(biāo)記物

子宮內(nèi)膜癌(endometrialcarcinomaEC)是當(dāng)今女性生殖系統(tǒng)主要的惡性腫瘤，在女性惡性腫瘤中所占的比例為：20%～30%[1]。發(fā)展中國家子宮內(nèi)膜癌患者的5年生存率為75%，而發(fā)達(dá)國家病死率為82%，可見發(fā)展中國家子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率低于發(fā)達(dá)國家，但死亡率明顯高于發(fā)達(dá)國家。研究發(fā)現(xiàn)EC發(fā)病與生活方式密切相關(guān)，地域不同發(fā)病率就不同。在西方國家發(fā)病率居于女性腫瘤之首，在我國占惡性腫瘤第二位，僅在宮頸癌之后[2]。近年來，國內(nèi)外許多學(xué)者嘗試尋求新的實(shí)驗室檢測指標(biāo)，能在手術(shù)前給予更多的提示，以便術(shù)前作出更準(zhǔn)確的判斷。TWEAK是新近發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤壞死因子(TNF)[3]。是由Chicheportiche[4]等從人的扁桃體及胎肝cDNA文庫中所篩選出來的一條長約1.3kb和TNF家族成員相似的cDNA，是由200多個氨基酸組成的II型跨膜蛋白，其相對分子質(zhì)量為27000[5]。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)：腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導(dǎo)劑可以在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，且介導(dǎo)著不同的生物學(xué)活性，因此有望成為有效的早期診斷子宮內(nèi)膜在的生物學(xué)標(biāo)記物。本試驗通過檢測EC患者血清TWEAK的濃度變化，旨在探討其在EC早期診斷中的價值及TWEAK與YKL-40聯(lián)合檢測對早期診斷子宮內(nèi)膜癌的價值。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科2013-03～2014-11住院收治的經(jīng)病理檢查確診的子宮內(nèi)膜癌患者25例，年齡35～82歲，平均55歲。及同期住院的子宮內(nèi)膜增生患者25例，年齡18～55歲，平均43歲。門診體檢的健康婦女30例，年齡28～54歲，平均40歲。三組的血液標(biāo)本作為血清對照。所有患者術(shù)前均未經(jīng)放療、化療，無性激素服用史，否認(rèn)肝炎、關(guān)節(jié)炎及近期感染史，且臨床病理資料完整，實(shí)驗前病人知情同并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。三組采血時均非月經(jīng)來潮，三個組別的年齡差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 實(shí)驗方法

1.2.1 采集標(biāo)本：取所選25例子宮內(nèi)膜癌患者組手術(shù)前2～4d的血清作為標(biāo)本，25例子宮內(nèi)膜增生患者組同樣也去治療前的血清標(biāo)本，而對照組取30例健康婦女門診空腹體檢時的肘靜脈血5～7mL，將其采集的血樣放在未加抗凝劑的真空采血管中。常溫下靜止30min，采集標(biāo)本后將溶血標(biāo)本剔除，封存在4℃的冰箱內(nèi)封存。離心機(jī)離心(3000r/min)，離心后取上清液分別裝在盛有聚丙烯的EP管內(nèi)，存放于-80℃的冰箱內(nèi)待測。

1.2.2 血清中TWEAK檢測：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定血清TWEAK水平，TWEAKELISA試劑盒( 美國R&D) ，按照說明書操作。

1.2.3YKL-40檢測：采用(ELISA雙抗體夾心法)檢測，YKL-40ELISA試劑盒(武漢貝萊茵)，操作步驟詳見說明書。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定子宮良性疾病患者和子宮內(nèi)膜癌患者血清中TWEAK的濃度,以正常健康婦女TWEAK水平均數(shù)±1.96S(±1.96S)作為上下臨界值。血清YKL-40陽性標(biāo)準(zhǔn)值是以正常對照組的均值+2個標(biāo)準(zhǔn)差，即95%可信區(qū)間值上限值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1TWEAK水平及陽性率在子宮內(nèi)膜癌組、子宮內(nèi)膜增生組和健康體檢組血清中對比，見表1。

表1 三組血清中TWEAK含量及陽性率的對比

如表1所示：在子宮內(nèi)膜癌組，患者TWEAK血清含量明顯比子宮內(nèi)膜增生組和健康體檢組高。(χ2=20.61，P<0.001)。然而在子宮內(nèi)膜增生組和健康體檢組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。(χ2=0.53，P>0.05)。

2.2YKL-40含量及陽性率在子宮內(nèi)膜癌組、子宮內(nèi)膜增生組和健康體檢組的對比，見表2。

表2 三組血清中YKL-40含量及陽性率的對比

2.3TWEAK、YKL-40聯(lián)合檢測陽性率在子宮內(nèi)膜癌組、子宮內(nèi)膜增生組和健康體檢組比較，見表3。

表3 各組間血清TWEAK、YKL-40及兩者聯(lián)合

可見:TWEAK和YKL-40聯(lián)合檢測敏感度為：81.7% 特異度為：82.19%，與單獨(dú)檢測TWEAK、YKL-40相比較，二者聯(lián)合檢測敏感度更高。但特異度高于單項檢測YKL-40,低于單項檢測TWEAK。在內(nèi)膜癌患者組中TWEAK和YKL-40單項檢測比較的陽性率，差異是有統(tǒng)計學(xué)意義的(P<0.05)。同樣，在內(nèi)膜癌患者組中TWEAKYKL-40TEWAK+YKL-40三種檢測放法比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.42，P<0.05)。內(nèi)膜增生組中兩種因子單獨(dú)檢測及聯(lián)合檢測均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。健康體檢組TWEAK、YKL-40及兩者聯(lián)合三種檢測方法陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.4 血清TWEAK、YKL-40在子宮內(nèi)膜癌患者診斷中敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值及準(zhǔn)確度的比較，見表4。

表4 清TWEAK、YKL-40在子宮內(nèi)膜癌患者中診斷準(zhǔn)確性的比較(%)

TWEAK及TWEAK+YKL-40診斷子宮內(nèi)膜癌的特異度和敏感度有統(tǒng)計學(xué)意義。然而其陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值和準(zhǔn)確度無統(tǒng)計學(xué)意義。

3 討論

子宮內(nèi)膜癌的確切的發(fā)病原因現(xiàn)在其實(shí)并不是很明確,很多早期患者并沒有明顯癥狀,僅在普查或常規(guī)做婦科檢查時偶然被發(fā)現(xiàn)[6]。出現(xiàn)的癥狀大多表現(xiàn)為子宮出血、陰道排液等。圍絕經(jīng)期前后的不規(guī)則陰道出血是最主要的癥狀,通常被誤認(rèn)為是月經(jīng)不調(diào)而未及時就診,延誤了最佳的治療時機(jī)。因此早期診斷、早期治療是惡性腫瘤患者改善預(yù)后的重要手段。

TWEAK是一種分泌性蛋白質(zhì)，其結(jié)構(gòu)高度保守,在人和鼠TWEAK的受體結(jié)合區(qū)有93%的氨基酸同源性[7]，并有著極其豐富的活性。比如它可以促進(jìn)新生血管的生成，并起著調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的作用[8～10]。它還可以誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和IL-8的生成[11]。大量研究表明：TWEAK可以在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，且介導(dǎo)著不同的生物學(xué)活性，因此有望成為有效的早期診斷子宮內(nèi)膜在的生物學(xué)標(biāo)記物。本研究顯示：子宮內(nèi)膜癌患者TWEAK陽性率和含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于健康對照組和內(nèi)膜增生組，表明TWEAK可以作為檢測子宮內(nèi)膜癌的新興腫瘤標(biāo)記物。我們通過本實(shí)驗的可以得出結(jié)論：認(rèn)為血清TWEAK與YKL-40均是子宮內(nèi)膜癌的腫瘤標(biāo)記物，且二者聯(lián)合檢測對子宮內(nèi)膜癌的早期診斷、進(jìn)一步評估及完善預(yù)后等多方面具有重大意義，將對子宮內(nèi)膜癌的早期篩查奠定重要的實(shí)驗基礎(chǔ)。

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王麗娜(1987～)女，黑龍江哈爾濱人，在讀碩士研究生。

吳雅冬(1968～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，副主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail：531188918@qq.com。

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